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1、【精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流氧化苦参碱与拉米夫定在Beagle犬体内的药物动力学相互作用研究.精品文档.氧化苦参碱与拉米夫定在Beagle犬体内的药物动力学相互作用研究刘晓红 孙英华 孙进 何仲贵（沈阳药科大学 药学院 生物药剂学研究室，辽宁 沈阳，110016）摘要 目的：评价氧化苦参碱（OM）和拉米夫定（3TC）在体内的药物动力学相互作用，为指导临床用药提供理论依据。方法：同时灌胃或静注给予Beagle犬单剂量OM和3TC，采用固相萃取（SPE）和HPLC-UV法分析不同时刻Beagle犬血药浓度。结果：3TC和OM联合用药后不改变二者在Beagle犬的体内药动学参
2、数，也不改变OM代谢产物苦参碱（M）的生物转化率和体内药动学参数（p0.05）。结论：3TC和OM配伍使用后在Beagle犬体内未发生药物动力学相互作用。关键词：氧化苦参碱；苦参碱；拉米夫定；药物相互作用Single-dose pharmacokinetics of lamivudine and oxymatrine administrated alone and in combination to beagle dogsXiaohong Liu, Yinghua Sun, Jin Sun, Zhonggui He(School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceut
3、ical University, Shenyang 110016, China)ABSTRACT: OBJECTIVE To evaluate the single-dose pharmacokinetic interaction of lamivudine and oxymatrine in combination to beagle dogs, both of drugs which are active against hepatitis B virus and which exert synergetic antiviral effect by co-administration. M
4、ETHODS A randomized 3 way crossover-Latin square experiment was designed. Twelve healthy adult male beagle dogs were divided into two groups. Six dogs were randomly intravenously administrated with lamivudine (2.5 mg/kg) and oxymatrine (15 mg/kg) alone and in combination, while the other six dogs we
5、re orally administrated with lamivudine (5 mg/kg) and oxymatrine (30 mg/kg) alone and in combination. RESULTS Simultaneous oral treatment with lamivudine and oxymatrine did not significantly affect the in vivo pharmacokinetic behavior of the two drugs, even including matrine, the active metabolite o
6、f oxymatrine. Furthermore, the main pharmacokinetic parameters of three compounds were not significantly influenced by the simultaneous intravenous administration of lamivudine and oxymatrine. CONCLUSIONS The concomitant oral or intravenous use of lamivudine and oxymatrine did not lead to significan
7、t pharmacokinetic interactions in beagle dogs. Moreover, the present study provides the in vivo pharmacokinetic basis for supporting the recent clinical practices in China that no dosage adjustment is needed when lamivudine and oxymatrine are co-administrated.Keywords: Oxymatrine; Lamivudine; pharma
8、cokinetic interaction.拉米夫定（3TC）为胞嘧啶核苷类似物，属于RNA逆转录酶抑制剂，对乙肝病毒（HBV）有抑制作用1, 2。然而其长期应用会产生耐药现象，影响其疗效3, 4。氧化苦参碱（OM）可直接抗HBV，并且具有稳定肝细胞膜、阻断肝细胞凋亡等作用5。临床研究已经表明6-8，二者联合应用，可协同提高疗效，缩短疗程，是目前治疗慢性乙型肝炎的较好选择。但两药以及OM的代谢产物苦参碱（M）联合用药后在体内的药物动力学性质还不清楚，故本文考察同时给予3TC和OM后二者在犬体内的药动学相互作用，为临床合理用药提供理论依据。1、药物、试剂、动物与主要仪器氧化苦参碱、苦参碱（含量9
9、8.5%，宁夏博尔泰力药业股份有限公司）；拉米夫定（含量98.5%，合肥市森瑞化工有限责任公司）；法莫替丁对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙睛（色谱纯，天津康科德科技有限公司）；其他试剂均为分析纯。雄性Beagle犬（沈阳药科大学动物实验中心）12只，体重101.3 kg，随机分为静脉给药组和口服给药组，每组6只。高效液相色谱仪（日本HITACHI公司）；LDZS-2型低速自动平衡离心机（北京医用离心机厂）；CETIVAP 78120-03离心浓缩干燥仪（美国LABOCONCO公司）；OASIS HLB 固相萃取小柱 (1cc, 30 mg, Waters Corp.)。2 实验方法2
10、.1 给药方案各组内进行3周期二重33拉丁方交叉试验，清洗期为1周。实验前禁食12 h。静脉给药组：单独给予OM（15 mg/kg）；单独给予3TC（2.5 mg/kg）；联合给予同剂量3TC和OM；于药后2、5、10、15、30、45、60、90、120、150、180、240、360和480 min取血4 mL，取血浆分析。灌胃给药组：单独给予OM（30 mg/kg）；单独给予3TC（5 mg/kg）；联合给予同剂量3TC和OM；于药后10、20、30、45、60、90、120、150、180、240、300、360、540和720 min取血4 mL，取血浆分析。2.2 OM、M和3TC
11、血药浓度测定OM、M和3TC血药浓度测定采用固相萃取（SPE），HPLC-UV检测9。方法如下：C18色谱柱（4.6200 mm, 5 m ID）；流动相：乙腈-水（13:87，5 mmol/L庚烷磺酸钠，pH 3.2）；220 nm检测。取固相萃取小柱，依次加甲醇、重蒸水各2 mL冲洗，备用。取血浆样品0.5mL，加入内标100 L（法莫替丁60 g/mL），重蒸水400 L，涡旋，转移至备用的小柱中，加2乙腈溶液1 mL冲洗，用1 mL乙腈洗脱，收集洗脱液，于40 真空离心干燥仪挥干，残渣以200 L流动相溶解，旋涡，离心，取上清液50 L进样。2.3 数据处理采用非隔室模型依赖方法进行血
12、药浓度数据处理，求算药动学参数。另外，相对生物利用度：FrAUCco-administration/AUCalone；代谢转化率：Conversion rateAUC0, M/AUC0, OM+M100。采用双单侧t-检验（p0.05）评价单独给药和联合给药后药动学参数的显著性差异。3 结果3.1 联合给药后3TC在犬体内的药物动力学研究Beagle犬单独静注3TC（2.5 mg/kg）和与OM同时静脉给药后，其体内血药浓度时间曲线见图1a；Beagle犬单独灌胃3TC（5 mg/kg）和与OM同时灌胃给药后，其体内血药浓度时间曲线见图1b；所得药动学参数见表1。与单独静注3TC相比的绝对生物
13、利用度为：单用组80.5%，合用组73.3%。统计学结果表明，在实验剂量下，联合用药组与单独用药组的3TC主要药动学参数无显著性变化（p0.05），无论灌胃还是口服给药OM不能改变3TC的体内药动学过程。图1 Fig 1 表1 Tab 1 3.2 联合给药后OM在犬体内的药物动力学研究Beagle犬单独静注OM（15 mg/kg）和与3TC同时静脉给药后，其体内血药浓度时间曲线见图2a；Beagle犬单独灌胃OM（30 mg/kg）和与3TC同时灌胃给药后，其体内血药浓度时间曲线见图2b；所得药动学参数见表2。统计学结果表明，在实验剂量下，联合用药组与单独用药组的OM主要药动学参数无显著性变化
14、（p0.05），无论灌胃还是口服给药3TC不能改变OM的体内药动学过程。图2 Fig 2 表2 Tab 2 3.3 联合给药后OM的代谢产物M在犬体内的药物动力学研究Beagle犬单独静注OM（15 mg/kg）和与3TC同时静脉给药后，其代谢产物M体内血药浓度时间曲线见图3a；Beagle犬单独灌胃OM（30 mg/kg）和与3TC同时灌胃给药后，其代谢产物M体内血药浓度时间曲线见图3b；所得药动学参数见表3。OM口服的代谢转化率为：单用组49.8%，合用组51.2%；静注的代谢转化率为：单用组6.74%，合用组8.75%。统计学结果表明，在实验剂量下，联合用药组与单独用药组OM的代谢产物M
15、的主要药动学参数无显著性变化（p0.05），无论灌胃还是口服给药3TC不能改变OM在Beagle犬体内的代谢过程。图3 Fig 3 表3 Tab 3 4 讨论4.1 3TC的药物动力学研究单剂量口服3TC，其无显著代谢，主要以原型经肾排泄，仅有约有5-10的原型化合物被代谢为无生理活性的对位硫氧化代谢物，并且仅在尿中检测到该代谢产物。3TC在人体体内迅速吸收和消除，平均生物利用度较为80-90，70的原型药物的消除经肾小管主动分泌3, 10。单独静脉给予3TC后，测得的CL（0.570.12 L/h/kg）和Vss（1.030.20 L/kg）满足3TC静注给药的药动学种属外推公式11：CL0
16、.74W0.76（0.48 L/h/kg），Vss1.09W0.94（0.95 L/kg）。4.2 OM与3TC联合用药的药物动力学相互作用研究3TC和OM联合用药后不改变二者在Beagle犬的体内药动学参数，也不改变OM代谢产物M的生物转化率和体内药动学参数（p0.05），说明3TC和OM配伍使用未发生药物动力学相互作用。而药物相互作用发生的基础就是某一药物改变另一种药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程中的任一个过程。3TC为高溶解度和高通透性药物，其通过被动扩散的方式通过消化道壁3，Caco-2细胞试验表明12，OM和M同样以被动扩散的方式被吸收。因此，3TC与OM在吸收过程中不发生相互
17、作用。由于3TC（229 D）相对较低的分子量和血浆蛋白结合率（36），使其在体内分布广泛，可自由的从体循环进入组织；而且OM和M的血浆蛋白结合率也不高13，因此3TC和OM在体内分布过程也无明显的相互作用。OM主要经肝脏和胃肠道菌群代谢，生成代谢产物M，Beagle犬体内两代谢部位的代谢比例约为1:4，而3TC无显著性代谢，其代谢产物仅为母体化合物的5-10，并且3TC与CYP3A的探针底物均无相互作用，因此，3TC和OM的代谢过程中也无明显的相互作用。虽然3TC的排泄经肾小球滤过和肾小管主动分泌（有机氧离子转运系统）3，并且OM和M也主要经肾脏排泄，但是联合给药后3TC和OM的AUC，CL
18、和Vss均未发生明显的改变（p0.05），说明二者在排泄过程中，也无明显的相互作用。文献报道了3TC为不易发生药物相互作用的药物3，本文试验进一步证明了3TC与OM不论静注还是灌胃给药在Beagle犬体内均未发生相互作用。另外，由于3TC和OM以及M的药动学参数均可进行种属外推，因此临床上，对HBV感染的患者给予3TC和OM联合用药时，无需进行剂量调整。5 结论3TC和OM联合用药后不改变二者在Beagle犬的体内药动学参数，也不改变OM代谢产物M的生物转化率和体内药动学参数（p0.05），说明3TC和OM配伍使用后在Beagle犬体内未发生药物动力学相互作用。临床上，对HBV感染的患者给予3
19、TC和OM联合用药时，无需进行剂量调整。参考文献1 SOKAL EM, ROBERTS EA, MIELI-VERGANI G, et al. A dose ranging study of the pharmacokinetics, safety, and preliminary efficacy of lamivudine in children and adolescents with chronic hepatitis BJ. Antimicrob Agents Chemother, 2000, 44(3): 590597.2 BENHAMOU Y, DOHIN E, LUNEL-FA
20、BIANI F, et al. Efficacy of lamivudine on replication of hepatitis B virus in HIV-infected patientsJ. Lancet, 1995, 345: 3963973 MARK AJ, KHP MOORE, GJ Yuen, et al. Clinical pharmacokinetics of lamivudineJ. Clin Pharmacokinet, 1999, 36(1): 41-66.4 ONO-NITA SK, KATO N, SHIRATORI Y, et al. YMDD motif
21、in hepatitis B virus DNA polymerase influence on replication and lamivudine resistance; a study by in vitro full-length viral DNA transfectionJ. Hepatology, 1999, 29(3): 939-945.5 王国俊, 蔡雄, 王俊学等. 苦参素(氧化苦参碱)治疗慢性肝炎的基础与临床J. 第二军医大学学报, 2002, 7(2): 23-25.6 王卫卫, 赵亚刚, 钟武装. 苦参素联合拉米夫定抗乙肝病毒疗效观察J. 实用医学杂志, 2006,
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23、ctive Metabolite Matrine in Dog PlasmaJ. Chromatographia, 2006, 63: 483-486.10 MOORE KH, YUEN GJ, RAASCH RH, et al. Pharmacokinetics of lamivudine administered alone and with trimethoprim-sulfamethoxazoleJ. Clin Pharmacol Ther, 1996, 59(5): 550558.11 RAJAGOPALAN P, BOUDINOT FD, CHU CK, et al. Pharma
24、cokinetics of (-)-2-3-dideoxy-3-thiacytidine in woodchucksJ. Antimicrob Agents Chemother, 1996, 40(3): 642-645.12 XH LIU, J SUN, YH SUN, et al. Transport Characteristics of Quinolizidine Alkaloids in the Human Intestinal Cell Line Caco-2C. 中日制剂和粒子设计研讨会 May 15-17, 2006 沈阳药科大学，沈阳.13 刘晓东, 黄圣凯, 袁惠南. 苦参碱
25、类似物的油/水分配系数与药代动力学的关系J. 中国药科大学学报, 1987, 18(3): 216-218.表1 联合给药后3TC在Beagle犬体内的药物动力学参数Tab. 1 Pharmacokinetic parameters of 3TC following intravenous and oral administration alone and in combination with OM （n=6, meanSD）Intravenous administrationOral administrationAloneCombinationAloneCombinationCmax (g
26、/mL)4.12 0.483.75 0.82Tmax (h)1.25 0.111.08 0.20t1/2 (h)1.79 0.191.81 0.161.76 0.191.58 0.16AUC0 (gh/mL)6.35 1.625.50 0.6810.22 0.999.31 1.30MRT (h)2.05 0.192.09 0.162.63 0.142.95 0.13CL (L/h/kg)0.57 0.120.53 0.070.51 0.05 a0.59 0.08 aVss (L/kg)1.03 0.201.07 0.141.35 0.16 b1.77 0.28 bFr(%)86.7191.10
27、a Apparent oral clearance (CL/F) was calculated as dose/ AUC0; b Apparent oral steady-state volume of distribution (Vss/F) was calculated as (doseAUMC0)/(AUC0)2表2 联合给药后OM在Beagle犬体内的药物动力学参数Tab. 2 Pharmacokinetic parameters of OM following intravenous and oral administration alone and in combination w
28、ith 3TC （n=6, meanSD）. Intravenous administrationOral administrationAloneCombinationAloneCombinationCmax (mol/L)21.64 2.7023.46 3.87Tmax (h)1.25 0.171.08 0.14t1/2 (h)1.51 0.151.35 0.162.18 0.312.14 0.26AUC0(molh/L)91.85 22.4982.42 10.5356.82 8.9248.36 8.36MRT (h)2.19 0.291.92 0.182.85 0.192.61 0.13C
29、L (L/h/kg)0.76 0.150.74 0.092.28 0.38 a2.64 0.35 aVss (L/kg)1.57 0.271.37 0.126.65 1.25 b6.97 1.08 bFr(%)89.7385.11a Apparent oral clearance (CL/F) was calculated as dose/ AUC0; b Apparent oral steady-state volume of distribution (Vss/F) was calculated as (doseAUMC0)/(AUC0)2表3 联合给药后OM的代谢产物M在Beagle犬体
30、内的药物动力学参数Tab. 3 Pharmacokinetic parameters of metabolite M following OM intravenous and oral administration alone and in combination with 3TC （n=6, meanSD）. Intravenous administrationOral administrationAloneCombinationAloneCombinationCmax (mol/L)2.87 0.852.59 0.1612.30 4.1010.06 2.88Tmax (h)0.09 0.0
31、30.06 0.023.75 0.364.50 0.22t1/2 (h)3.07 0.562.93 0.543.53 0.163.39 0.12AUC0(molh/L)6.64 1.597.90 2.2356.31 19.1350.64 8.25MRT (h)4.59 0.754.83 0.984.59 0.284.99 0.19Fr(%)118.9189.93a b图1 Beagle犬单独给予3TC和与OM同时给药后3TC的体内血药浓度-时间曲线图Fig.1. Mean plasma concentration time curves of 3TC following intravenous
32、 and oral administration alone and in combination with OM to beagle dogs.(a) two intravenous regimens involving a single dose of 2.5 mg/kg 3TC to beagle dogs: alone () and in combination with a single dose of 15 mg/kg OM (); (b) two oral regimens involving a single dose of 5.0 mg/kg 3TC to beagle do
33、gs: alone () and in combination with a single dose of 30 mg/kg OM (). Each value represents the meanSE (n=6).a b图2 Beagle犬单独给予OM和与3TC同时给药后OM的体内血药浓度-时间曲线图Fig.2. Mean plasma concentration time curves of OM following intravenous and oral administration alone and in combination with 3TC to beagle dogs.
34、(a) two intravenous regimens involving a single dose of 15 mg/kg OM to beagle dogs: alone () and in combination with a single dose of 2.5 mg/kg 3TC (); (b) two oral regimens involving a single dose of 30 mg/kg OM to beagle dogs: alone () and in combination with a single dose of 5.0 mg/kg 3TC (). Eac
35、h value represents the meanSE (n=6).图3 Beagle犬单独给予OM和与3TC同时给药后OM代谢产物M的体内血药浓度-时间曲线图Fig.3. Mean plasma concentration time curves of M following OM intravenous and oral administration alone and in combination with 3TC to beagle dogs. (A) two intravenous regimens involving a single dose of 15 mg/kg OM to beagle dogs: alone () and in combination with a single dose of 2.5 mg/kg 3TC (); (B) two oral regimens involving a single dose of 30 mg/kg OM to beagle dogs: alone () and in combination with a single dose of 5.0 mg/kg 3TC (). Each value represents the meanSE (n=6).