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1、精选优质文档-倾情为你奉上LC480核酸扩增荧光检测仪操作程序1开机：先开电脑，电脑登录名与密码均为LCinstall；再按仪器左侧后面的主开关打开仪器。2 核酸扩增标准程序2.1开机后，仪器正面的两个状态指示灯呈现橙色闪动，提示仪器正在进行初始化。当左侧的状态指示灯变为绿色固定，右侧的状态指示灯变为橙色固定时，提示仪器处于待机状态。2.2装载：点击仪器正面最右侧的灰色按钮开关，仪器右侧弹出多孔板加载器，将加好的反应体系（96孔板或上置8联管的适配器）放入加载器的加载框中，注意卡槽位置相配。再次按下灰色按钮开关，这时已放入反应板的加载器会弹出仪器内。2.3设置：双击电脑桌面上的LC480基础软
2、件图标，进入软件。输入登录名admin和密码Rcheo1，进入主界面，选择“New Expriment”开始新实验，在“Run Protocol”菜单下依次填入本次实验的荧光种类、反应体积，扩增反应的步骤及温度、时间、荧光采集时间等循环参数，确认无误后可点击“Start Run”，开始扩增反应。2.5扩增开始后，软件自动调至Data菜单，在此刻观察运行状态和过程。2.6样品孔命名：点击“Sample Editor”可按照提示的三步法对样品进行编辑，第一步选择“Abs Quant”绝对定量，第二步选择要命名的孔，第三步给选定的孔命名并选择样品类型。2.7反应结束后，按灰色按钮弹出加载器，取出96
3、孔板或适配器。2.8在软件上点击“Analysis”，选择分析方法，确认之后，出现结果，可以进行分析。3 结果分析标准程序：结果曲线的分析，应按以下步骤进行：全部曲线阴性对照阳性对照阳性室内质控品阳性标准品逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果登记，发报告。3.1整体曲线的观察：将所有曲线选中进行整体观察a）观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。b）观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。3.2阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。作用：用以监测实验
4、室和前处理过程中是否存在污染。3.3阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。3.4阳性室内质控品的分析阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。3.5阳性标准品的分析a）各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。b）观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置。情况1：若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。
5、情况2：出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。c）每日必做103标准品，用作以下三方面监控：一是否存在操作误差，如加样量过少等原因导致103标准品未能检出；二是否存在稀释后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况；三是若高拷贝标准品出现Ct值后移，且能排除情况A、B，则判断是否为试剂灵敏度下降。3.6单个曲线的判断逐个分析每条曲线，判断曲线的阴阳性或属可疑曲线。（可疑标本是指曲线在37个Ct值后出现上涨且平台趋势不明显或上涨幅度比较低的标本。可疑标本要第二天重做，两次结果一致则报阳性，否则结果报阴性。）3.7得出定量结果调节基线和阈值以得到一
6、较好的标准曲线。电脑据此曲线给出阳性结果值。此时应排除某些阴性标本因荧光曲线假性上扬而得出的假阳性结果和某些弱阳性标本因终末荧光值过低而显示的假阴性。3.8发放报告及时登记检测结果记录，发放临床报告。4 关机：先关电脑，再按仪器左侧后面的主开关关闭仪器。5 仪器的维护和保养5.1微软Windows XP工作站的维护5.1.1做好每日的清洁工作。5.1.2每月进行键盘鼠标的消毒工作，使用10%84消毒液擦拭。5.1.3硬盘驱动器每月25日左右运行一次碎片清除程序。5.1.4每日数据按照数据管理办法进行保存，每周五整理一次数据文件夹，每月26日进行一次数据备份到光盘，每年12月30日更换一次备份光盘，上一年度光盘存档。5.2 PCR仪的维护和保养5.2.1做好每日的清洁工作。5.2.2每日实验完毕，待仪器散热完全之后，使用防尘罩防尘。5.2.3根据仪器提示信息，更换所需配件。专心-专注-专业