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1、学号：20101493南京中医蔼大学IIIIIIIIIIIIl4WF2810136硕士学位论文膏摩治疗木瓜蛋白酶诱导兔膝骨关节炎性滑膜炎的实验研究研究生指导教师学科专业所在学院毕业时间熊震坤薛明新主任中医师针灸推拿学第二临床医学院2013年6月The experimental study of The effects of Gaomo withnotopterygium cream on synovitis in Papain induced rabbitknee osteoarthritisA Dissertation Submitted for theMasters DegreeCandi
2、date：Xiong ZhenkunAdviser：DirectorXue Ming-xinNanjing University of Chinese Medicine。NanjingI China学号：20101493硕士学位论文膏摩治疗木瓜蛋白酶诱导兔膝骨关节炎性滑膜炎的实验研究作者姓名 熊震坤 申请学位级别 临床医学硕士学位指导教师姓名薛明新学科专业 针灸推拿学学习时间自 2010年09月11日职 称研究方向起至主任中医师脊柱相关性疾病2013年06月28日止论文提交日期2013年03月25日 论文答辩日期 2013年05月31日学位授予单位南京中医药大学 学位类型 临床医学硕士学位原创
3、性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名： 矽f，年参月，日堑露砷7学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等
4、复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“”)=篡_貔黧：刷蒜莉摊：铲钟锄旧南京中医药大学硕士学位论文目录摘要iAbstractii前言1一日青第一部分理论研究21 祖国医学对膝关节骨性关节炎的认识211 中医病名探讨212 中医病因病机研究213症候分类414治法方药515中医治法62现代西医学对骨性关节炎的认识721 发展史及流行病学研究722病因及其危险因素823病理学特征924 临床表现1225 治疗进展133 结论1 5第二部分实验研究ili ol aOi Q161 引言1 62 羌活膏的制备1 621 仪器与试药l
5、622 方法与结果1 63 动物实验对象1 731 实验设计1 732 实验时间及地点1 833 实验材料1 84实验方法和结果1941 随机分组对照实验过程1942实验结果2143 实验结论26第三部分讨论271 膝关节骨性关节炎动物模型的选择272推拿对膝关节骨性关节炎的治疗作用进展2821单纯手法治疗2822配合针刺治疗2823结合康复训练giill2824配合中药熏洗2825推拿作用机制293羌活膏膏摩作用机制探讨2931 膝骨关节炎性滑膜炎中医治则治法探讨2932羌活的功效及药理作用2933 膏摩对膝骨关节炎性滑膜炎的作用机制31又4过敏产生的原因“31目录结吾321本研究结论322
6、创新点323需要注意的问题3231 治疗时间点的选择3232羌活膏制备工艺的改进324展望32参考文献33附录38攻读硕士学位期间取得的学术成果44致谢45什南京中医药大学硕士学位论文摘要背景：膏摩是在施术前于体表涂上药物配制的药膏为介质，再施以推拿手法的传统中医外治治疗方法，是一种把推拿按摩与药物相结合运用的形式。羌活膏是江苏省中医院推拿科薛明新主任拟定并由本院制剂部制作，以羌活挥发油为主要成分的新制剂。羌活挥发油具有消炎、镇痛等临床药理作用。我们通过观察羌活膏膏摩治疗对木瓜蛋白酶诱导兔膝骨关节炎性滑膜炎中细胞因子的影响来探讨其作用机制。目的：观察羌活膏膏摩治疗对木瓜蛋白酶诱导兔膝骨关节炎性
7、滑膜炎模型的滑膜中白三烯(m4)、II型胶原羧基端端肽(C一II)及白细胞介素一1(IL1)的影响，探讨羌活膏膏摩治疗膝关节骨关节炎的作用机制。方法：选用健康新西兰大白兔40只，随机分为空白组、模型组、羌活膏敷药组、推拿组和羌活膏膏摩组，每组8只，对模型组、羌活膏敷药组、推拿组和羌活膏膏摩组采用木瓜蛋白酶关节腔内注射法，建立兔左膝关节骨性关节炎模型。空白组及模型组不进行治疗，羌活膏敷药组、推拿组和羌活膏膏摩组，在造模2周时开始分别使用羌活膏敷药、推拿及羌活膏膏摩治疗。治疗前后分别对各实验动物进行Lequesne MG膝关节评估。在治疗开始后的第11天处死所有动物，切取左侧髌下脂肪垫处滑膜组织约
8、O59剪碎匀浆离心，取上清液采用ELISA法测定LTB4、CTXII的含量，并通过病理观察及IL1的免疫组化半定量分析观察各组实验动物左膝关节滑膜组织的细胞降解、破坏情况。结果：Lequesne MG膝关节评估，治疗前空白组与其它四组分别比较有显著性差异(P0。05)。结论：本研究中的膏摩治疗系推拿手法与羌活膏的结合，其对兔膝骨关节炎性滑膜炎的作用机制从研究的结果看，亦是两者的结合。即减少炎症因子来缓解膝骨关节炎性滑膜组织的炎症，从而缓解膝关节骨性关节炎症状。但因为羌活膏外敷和推拿手法有明显的拮抗作用，以及实验中出现的过敏反应，膏摩治疗有一定的作用，没有达到预期效果。关键词：木瓜蛋白酶，膝关节
9、骨性关节炎，动物模型，羌活，膏摩，白三烯，II型胶原羧基端端肽，白细胞介素一1摘要AbstractBackground：Gaomo is a form of massage combined witll drugIt is a way of external therapyof traditional Chinese medicine which is based on drug compounding ointments for media effectof preoperative in surface coated with ointment and then is subjected
10、toNotopterygium cream，developed by Director Xue Mingxin of Department Tuina，produced by our agents section ofJiangsu Province Hospital of TCM，is a new preparation which main component is volatile oil inrhizoma et radix notopterygii that has antiinflammatory and analgesic clinical pharmacologicaleffe
11、ctsWe observe an effect of cytokines in Gaomo with notopterygium cream treatment onpapain-induced inflammatory synovitis of rabbit knee joint to investigate its mechanismObjective：The aim was to investigate the mechanism of Gaomo with notopterygium cream intreating patients with osteoarthritis of kn
12、ee joint synovitis by observing notopterygium creammassage with ointment in treating papain-induced inflammatory synovitis of knee joint in rabbitsinduced by leukotrienes(LTB4)，the cterminal end of type II collagen peptide(CTXII)andInterleukin-1(IL一1)impactMethods：Selected 40 health New Zealand Whit
13、e rabbits，randomly divided into empty groups，model groups，notopterygium cream dressing groups，tuina groups and gaomo groups，eachgroup of 8，model groups，notopterygium cream dressing groups，tuina groups and gaomo groupsbuide the IeR knee osteoarthritis model by using papain intra-articular i巧ecfion，Th
14、e blank groupand the model group were not treatedAt modeling for 2 weeks the notopterygium creamdressing group，tuina group and gaomo group respectively began using notopterygium creamdressing，massage and the gaomo with notopterygium cream treatmentLequesne MG of kneejoint of the experimental animals
15、 were respectively assessed before and after treatmentOn l lthday all animals were executed，the infrapatellar fat pad at the synoviai 059 cut and shear wasuniformly centrifuged，supernatant liquor Was taken，LTB4and CTX-11 were measured by ELISAlaw,degradation and destruction of left knee synovial tis
16、sue and cell of all groups of experimentalanimals were observed bY pathological observation and immunohistochemical semi-quantitativeanalysis of lL一1Results：Before treatment，blank group was of significant difference(p005)in Pathological and immunohistochemical semiquantitative analysis of lL-1Conclu
17、sion：Ointment masssge therapy method of this study is combined with tuina andnotopterygium cream，which is also the mechanism of the rabbit knee arthitis synovitis from theresultIn other words，it is relieving inflammatory synovium of knee joint inflammation byreducing inflammation to alleviate the sy
18、mptoms of osteoarthritis of the kneeHowever,becausenotopterygium cream and manipulations are obviously antagonistic，as well as there ale allergicreactions occurring in experiment,tuina with cream in the treatment plays a certain role，whichis not what we are expectedKey words：papain，knee osteoarthrit
19、is，animal models，rhizoma et radix notopterygii，gaomo，Leukotrienes，cterminal end of type II collagen peptide，Interleukin1蕾南京中医药大学硕士学位论文刖吾膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是一种退行性疾病。首先膝关节面软骨发生原发性或继发性退变和结构紊乱，伴随发生的软骨下骨质增生、软骨剥脱、滑膜炎症等使关节逐渐破坏、畸形，最终导致关节功能障碍。其发病率和年龄呈正相关，是一种在老年人群中常见、多发和较难治的骨关节病。国外的初步调查显示，骨性关节炎的
20、总患病率约为15，40岁以下发病率约为5；而6075岁发病率则超过50；75岁以上发病率甚至达到80；此外，该病的致残率高达53n1。KOA导致的痛苦和残疾严重损害患者的生存质量，并且已经成为当前社会面临的严重的社会经济负担之一。滑膜炎是膝骨关节炎的临床常见并发症，可分为急性、慢性两种。急性者膝关节局部肿胀、疼痛，一般呈膨胀性或隐痛，膝关节活动不利，尤以伸直及完全屈曲时肿痛难忍。原发损伤处可有压痛，但压痛点不固定。皮肤温度可增高，触之手下有波动感，膝关节活动受限程度随损伤情况而定。转为慢性滑膜炎者常有膝关节粘连，影响关节活动，日久可出现股四头肌萎缩。多见于体型肥胖的老年人。目前，西医认为本病是
21、由于急性创伤或慢性劳损等刺激关节滑膜而产生的无菌性炎症反应。祖国医学中没有膝关节骨性关节炎的名称，但根据其临床症状，可将其归于“痹证”、“骨痹”、“痿证”、“白虎病”等范畴。祖国医学认为本病与年老体衰，长期劳损，外感风寒湿邪等有关。治疗上根据临床分型主要以补益肝肾，益气补血，利湿通络、祛风散寒等为治则，采用中药汤剂内服，外敷，针灸推拿等内治外治方法治疗。推拿手法应用范围广、副作用少，是一种历史悠久的治疗手段，早在黄帝内经中就有相关描述，如：“形数惊恐，经络不通，病生于不仁，治之以按摩醒药。”又如：“凡小有不安，必按摩妥捺，令百节通利，邪气得泄。”(素问血气形志篇)说明推拿按摩有疏通全身气血，驱
22、除邪气而达到治病康复的作用。膏摩是一种把推拿按摩与药物配合运用的形式，是在施术前于体表涂上药物配制的药膏为介质，再施以推拿手法的治疗。圣济总录谓之“摩与药俱”。羌活膏是江苏省中医院推拿科薛明新主任拟定并由本院制剂科制作，以羌活挥发油为主要作用成分的新制剂。羌活挥发油具有消炎、镇痛等临床药理作用。本研究通过观察羌活膏膏摩治疗对木瓜蛋白酶诱导的兔膝骨关节炎性滑膜炎的影响，探讨其作用机制，以期将其早日应用于临床。第一部分理论研究第一部分理论研究1祖国医学对膝关节骨性关节炎的认识11中医病名探讨祖国医学中没有膝关节骨性关节炎的病名，但根据其临床症状可归于“痹证”、“骨痹”、“痿证”、“白虎病”等范畴。
23、内经首先提出痹之病名，素问痹论指出：“痹，闭也风、寒、湿三气杂至，合而为痹。其风气胜者为行痹，寒气胜者为痛痹，湿气胜者为着痹也。素问四时刺逆从论云：“厥阴有余病阴痹，不足病生热痹”。膝关节骨性关节炎在临床上多以“骨痹”相称，素问长刺节论日：“病在骨，骨重不可举，骨髓酸痛，寒气至，名日骨痹。”素问逆调论日：“是人者，素肾气胜，以水为事，太阳气衰，肾脂枯不长肾者水也，而生于骨，肾不生，则髓不能满，故寒甚至骨也，所以不能冻栗者，病名日骨痹，是人当挛节也。”汉代中藏经指出：“骨痹者，乃嗜欲不节，伤于肾也，肾气内消则精气日衰邪气妄入”，以及“痹者闭也，五脏六腑感于邪气，闭而不仁，故日痹”。故凡因正虚卫外
24、不固或外邪侵袭人体筋骨关节，致气滞寒凝血疲，经络闭阻，从而出现肢体沉重、关节剧痛，甚至发生肢体拘急率缩、强直畸形者，称之为“骨痹”。历代医家根据疾病不同特点，赋予不同病名。张仲景之金匮要略立“历节”之名，巢元方诸病源候论称之为“历节风”。王焘OI-台秘要载：“近效论：白虎病者，大都是风寒暑湿之毒，因虚所致，将摄失理，受此风邪，经脉结滞，血气不行，畜于骨节之问，或在四肢，肉色不变。其疾昼静而夜发，发即彻髓酸疼，乍歇。其病如虎之啮，故名日白虎之病也。由此可见，“白虎病”是因体虚感受风邪，风邪蓄积于骨节之间，四肢疼痛如虎啮的疾病，该病与膝关节骨性关节炎伴滑膜炎的症状相似。金元时期，李杲及朱震亨，以“
25、痛风”立名。后世医家有将骨关节炎称为“风湿”、“痛风”，或称为“历节”、“骨节病”等。膝关节骨性关节炎除膝关节的疼痛、肿胀等症状外，还有肌肉萎缩、肌力下降，特别是疾病后期常有关节不能为用，肢体活动功能障碍，甚至站立时即感足膝疲软乏力。据此，部分中医医家将该病归入“痿证”范畴。素问痿论载：“骨枯丽髓虚，故足不任身，发为骨痿。”12中医病因病机研究121病因膝关节骨性关节炎一病，病在肝、肾，与脾、肺关系密切，但与肢体筋脉、关节、肌南京中医药大学硕士学位论文肉、经脉气血密切相关。凡是能引起气血经脉痹阻不通的因素，皆可引起膝关节骨性关节炎的发生。1211肝肾亏虚素问上古天真论：“丈夫七八，肝气衰，筋不
26、能动。A)k，天癸竭，精少，肾气衰，形体皆极”，故出现脚足痿弱，步履如失，关节屈伸不利。张仲景在金匮要略中指出：“寸口脉沉而弱，沉即主骨，弱即主筋，沉即为肾，弱即为肝。汗出入水中，如水伤心，历节黄汗出，故日历节。”肝主筋，肾主骨，肝肾气血不足是历节致病的内在因素，再加上汗出入水中等因素可致历节病，因而出现关节疼痛。后世医家如张介宾在论及痹证时指出“阳非有余，真阴不足。张璐在张氏医通诸痛门中记载“膝者，筋之府膝痛无有不因肝肾虚者，虚者风寒湿气袭之。”罗天益卫生宝鉴云：“老年腰膝久痛，牵及少腹两足，不堪步履，奇经之脉，隶于肝肾为多。”可见，肝肾精血亏虚，筋骨失充不止直接导致痹证的发生，也是风寒湿等
27、外邪侵袭的内在因素。“痿证的主要病因，在素问痿论、类经、景岳全书等著名医书内，众多医家皆认为是由于外来损伤或者患者禀受父母之肾气不足，导致患者精气不足、肝肾亏损、后天失养、脾气虚弱而致病。张介宾所谓“败伤元气者亦有之”即是言此。1212感受外邪早在内经中就强调了感受外邪在膝关节骨性关节炎发病中的重要作用，如素问蚺论提及“风、寒、湿三气杂至，合而为痹。其风气胜者为行痹，寒气胜者为痛痹，湿气胜者为着痹也”“以冬遇此者为骨痹”等。中藏经也指出：“痹者闭也，五脏六腑感于邪气，闭而不仁，故日痹”。巢元方同样强调风寒湿邪在痹证发病中的作用，如诸病源候论风病诸侯上：“痹者，风寒湿三气杂至，合而成痹。其状，肌
28、肉顽厚，或疼痛。由人体虚，腠理开，故受风邪也。病在阳日风，在阴日痹冬遇痹者为骨痹，则骨重不可举，不随而痛。”“其风湿气多，而寒气少者，为风湿痹也。由血气虚，则受风湿，而成此病。久不瘥，入于经络，搏于阳经，亦变令手足不随”等。张仲景的病因学思想与内经一脉相承，但较之更为详尽、具体，强调外邪须待正虚方可致病。如伤寒杂病论：“此病伤于汗出当风，或久伤取冷所致也。”“盛人脉涩小，短气，白汗出，历节疼不可屈伸，此皆饮酒汗出当风所致。”1213痰瘀留滞由于久病气血周流不畅或外邪留恋，导致血停为瘀，湿凝为痰，痰瘀又可互结，阻闭经络，或深入骨骱，而致痹证。瘀血理论肇始于内经。如素问调经论云：“寒独留，则血凝泣
29、，凝则脉不通。”在晋代，从葛洪肘后备急方可见，治疗痹痛之虎骨膏、独活酒等，选用丹参、川芎、当归、牛膝等活血药。而在隋唐，治疗痹痛突出了酒剂的使3第一部分理论研究用，药酒中加入大量活血化瘀药物。在外台秘要中特别介绍了四物汤加附子治疗“风湿百节疼痛，不可屈伸。清代王清任更是提出了“痹有瘀血的学术观点，在医林改错中阐述“总滋阴，外受之邪，归于何处?总逐风寒，去湿热，已凝之血，更不能活。如水遇风寒，凝结成冰，冰成风寒己散。明此义，治痹证何难古方颇多，如古方治之不效，用身痛逐瘀汤明确表达了“痹由瘀血致病”的学术观点。邪斥日久，寒凝津为痰，湿停聚为痰，热炼津为痰。如灵枢周痹日：“风寒湿气，客于外分肉之间，
30、迫切而为沫，沫得寒则聚，聚则排分肉而分裂也。分裂则痛金元时期张从正在儒门事亲中就认为，痹证乃“胸膈间有寒痰之故也，并指出：“先涌制其寒痰，然后诸法皆效。朱震亨在丹溪心法痛风中认为痛风乃“四肢百节走痛是也，他方谓之白虎历节风证大率有痰、风热、风湿、血虚。”明确指出“有痰”可致痹痛。叶桂在临证指南医案痹中也指出：“风寒湿三气合而为痹，然经年累月，外邪留著，气血皆伤，其化为败瘀凝痰，混处经络，盖有诸矣。倘失其治，多年气衰，延至废弃沉疴。”清代林习ii【琴在类证治裁痹证中论述痹证日久不愈时明确指出：“必有浊痰败血淤滞经络”。董西园在医级痹论中更是明确提出“痹非三气，患在痰瘀”。122病机1221肝肾亏
31、虚，筋骨失充肝肾以及肺脾等脏腑的亏虚，导致筋骨肌肉失于充养，而“宗筋主束骨而利机关”，因而可致足膝疲软无力，“胫纵而不任地”；又张璐在张氏医通诸痛门中记载：“膝者，筋之府膝痛无有不因肝肾虚者，虚者风寒湿气袭之。”可见肝肾等脏腑不足，可致气血营卫空虚，经脉不充，而致外邪有机可乘。1222风寒湿邪，侵袭人体由于久居湿地、失于温暖、气候剧变等原因，以致风寒湿邪乘虚侵入人体，流注经络，滞留关节，导致气血痹阻而发为痹证。内经云：“风、寒、湿三气杂至，合而为痹也。”1223痰瘀留滞，经络痹阻痰瘀在痹证的形成中有两种情况：一是在痹证发生之前，机体可由于某些因素在体内己产生痰瘀，这种情况下痰瘀是疾病发生的原因
32、：二是痹证日久，导致痰瘀内生，这种情况下痰瘀既是病理产物，同时也是病理因素。痹证初期，风寒湿热之邪斥于经络，气血运行因之不畅：日久，寒湿凝聚为痰；热炼津也可成痰。正如医学转新路所说：“风寒湿气侵入肌肤，流注经络，则津液为之不清，或变为痰饮，或成瘀血，闭塞隧道，故作痛走注，或麻木不仁。”13证候分类4南京中医药大学硕士学位论文参照LIJ医病证诊断疗效标准乜1(国家中医药管理局1994年颁布)中骨痹诊断标准。肝肾不足、筋脉瘀滞证：关节疼痛，胫软膝酸。活动不利，运作牵强，畏寒，舌质偏红，苔薄或薄白，脉滑或弦。脾肾两虚、湿注骨节证：关节疼痛，肿胀积液。活动受限，便溏，舌质偏红，或舌胖质淡，苔薄或薄腻，
33、脉滑或弦。肝肾亏虚、痰瘀交阻证：关节疼捕，肿胀肥厚感，痿弱少力。骨节肥大，活动受限，经少或色暗，舌质偏红，或舌胖质淡，苔薄或薄腻，脉滑或弦细。14治法方药因为本病发作时常具有本虚标实的特点，因而治疗原则以“补虚扶正”、“祛邪”、“通络”为大法。具体运用时，既要重视扶正祛邪，标本兼顾，又要注重标本缓急的原则。如清代董西园在医级杂病中指出：“盖邪之感人，非虚不痹，丹棱气血充盛流行，则痹必自解，所以古方皆以扶正祛邪之法”。就具体治疗而言，偏于风胜者，以祛风化湿；偏于湿胜者，除湿为主，兼用祛风散寒；而热痹证，则以清热为主，实者宜清泄络热，虚者宜养阴清热，并佐以祛风化湿之品。若风寒湿痹日久，应注重益气固
34、卫，和营养血，培养肝肾。顽痹宜活血化瘀、祛痰通络。正如类证治裁云：“治法总以补助真元，宣通脉络，使气血流畅，则痹自己”，又说“三痹各有所胜，用药以胜者为主，而兼者佐之。治行痹散风为主，兼祛寒利湿，参以补血，血行风自灭也；治痛痹温寒为主，兼祛风渗湿，参以益火，辛温解寒凝也；治著痹利湿为主，兼祛风逐寒，参以补脾补气，土强可胜湿也”。医学入门云：“初起强硬作痛者，宜疏风豁痰，久病徐芬气血虚实、痰瘀多少治之”。张仲景对关节疼痛的论述主要在湿病、历节病等篇章。祛除风寒湿邪，张仲景多用微汗法等几种治法：一是微汗法。麻黄加术汤、麻杏苡甘汤则是微汗法的代表方。而是利小便法，“湿痹之候，小便不利，大便反快，但当
35、利其小便”，是小便得利，则里湿去，阳气通，湿痹亦除。三是温阳祛寒法，如“病历节不可屈伸，疼痛，乌头汤主之”，这类方剂多包含附子、乌头、桂枝等温阳祛寒药，足以祛除风寒湿邪。唐代备急千金要方治痹，提出了“风毒”的概念，对四肢历节肿痛，治之以犀角汤。备急千金要方诸痛首载独活寄生汤，至今仍为治疗痹证的名方。金元时期，张从正倡用汗、吐、下法治痹。朱震亨明确提出有痰，以二陈汤加酒炒黄芩、羌活、苍术等治疗痹证有痰：以二妙散治疗痹证因湿热者，而上中下痛风方在丹溪心法、金匮钩玄、丹溪治法心要等书中都有记载，功能祛风湿、化痰瘀，为朱震亨治疗上中下痛风的代表方剂。虞抟医学正传以加味四物汤，治疗白虎历节风证。明代王肯
36、堂证治准绳以如意通圣散、桂心散、没药散、小乌犀丸治疗走注疼痛(行痹)，以小续命汤、除湿蠲痛汤、大橘皮汤、豁痰汤、潜行散治疗痛痹，以除湿补气汤、温经除湿汤、除风湿羌活汤治疗著痹。张介宾景岳全书认为：“痹证之风胜者，治当S第一部分理论研究从散，宜败毒散、乌药顺气散之类主之。若以风胜而兼微火者，宜大秦艽汤，或九味羌活汤之类主之。痹证之寒胜者，但察其表俱无热证，即当从温治之，宜五积散，或小续命汤、甘草附子汤之类主之。若寒甚气虚者，宜三因附子汤之类主之。痹证之湿胜者，其体必重，或多寒，或多痰，或多汗，皆脾弱阴寒证也。若羌活胜湿汤，乃祛风散湿之剂也。五积散，乃温经散湿之剂也。真武汤，乃温中除湿之剂也。”清
37、代叶桂重视风寒湿三气为痹，又推崇从奇经治络法，注重搜剔动药，后期重视补肾壮骨，除用汤剂、丸剂、散剂外，还常用酒剂，如枸杞松节酒和钻地风酒等。15中医治法151中医内治法祖国医学认为与本病有关的因素有年老体衰，长期劳损，外感风寒湿邪等。治疗上根据临床分型主要以补益肝肾，益气补血，利湿通络、祛风散寒等为治则。刘洪旺等口1根据中医辩证将本病分为三型：身痛逐瘀汤加减治疗气滞血瘀型；四逆汤合独活寄生汤加减治疗寒湿痹阻型；六味地黄丸加减治疗肝肾亏虚型；均取得较好的疗效。朱东平等H3将膝骨性关节炎患者100例随机分为骨痿灵胶囊治疗组和抗骨增生胶囊对照组治疗膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型)。结果治疗后2组均比治
38、疗前有改善(P005，差异无显著性意义；在步态上，模型组和其它四组比较P005，差异无显著性意义，推拿组、敷药组和膏摩组分别与空白组比较P005，差异无显著性意义，敷药组和膏摩组分别与空白组比较P005，差异无显著性意义，敷药组和膏摩组分别与推拿组比较P005，差异无显著性意义。(见表21，22，23，24)表21各组局部疼痛刺激反应治疗前、治疗后评估注：与空白组比较P005，具有方差齐性。方差分析：F=3644，P=0015005，差异无统计学有意义，LTB4含量有升高趋势；敷药组与模型组比较，P=0036005，差异无统计学有意义，LTB4含量有降低趋势；敷药组与推拿组比较，P=00100
39、05，差异无统计学有意义。敷药组、膏摩组与空白组比较，均P005，差异无统计学有意义。(见表25和附录，图23)425 CTXII含量因敷药组2号及8号样本所测数据异常偏低，为避免误差，予以剔除。各组数据经正态性检验，均服从正态性分布；方差齐性检验：Levene统计量=O709，P=0592005，具有方差齐性。方差分析：F=8597，P=0000005，差异无统计学有意义，CTXII含量有升高趋势；膏摩组与模型组比较，P=0294005，差异无统计学有意义，CTX-II含量有升高趋势；推拿组与敷药组比较，P=00120。05，差异无统计学有意义。(见表25和附录，图24)表25各组滑膜组织中
40、LTB4、CTXII含量测定(X士S)24南京中医药大学硕士学位论文注：与空白组比较，幸P005，差异无显著性意义。(见表27和附录，图26)表27 IL1免疫组化表达半定量分析注：与空白组比较，+P005。镜下观察细胞浆着色，浅黄色为+，黄色为+，棕色为+。43实验结论羌活膏外敷可以显著降低木瓜蛋白酶诱导的兔膝关节炎性滑膜炎模型中的LTB4含量，对CTXII含量有降低趋势；单纯推拿可以明显改变木瓜蛋白酶诱导的兔膝关节炎性滑膜炎模型中的CTX-II含量，对LTB4含量有升高趋势；可以发现羌活膏外敷和推拿手法的治疗有拮抗作用。膏摩是羌活膏结合推拿手法的治疗手段，其对膝关节骨性关节炎的作用机制可能
41、是羌活膏和推拿手法的共同作用。病理观察和IL1的免疫组化半定量分析结果显示，单纯推拿治疗可以改善模型兔膝关节滑膜组织的炎性反应，而羌活膏外敷组和膏摩组则没有明显改变，甚至有部分加重表现，考虑与实验中发生的过敏反应相关。南京中医药大学硕士学位论文第三部分讨论1膝关节骨性关节炎动物模型的选择膝关节骨性关节炎是一种发病机制复杂且具有高发病率和致残率的退行性病变。随着我国社会老龄化的加速，该病已经成为一个重要的公共卫生问题。目前临床对该病治疗的各种手段均存在不同的缺陷，因此选择合适的动物模型研究该病就显得尤为重要。膝关节骨性关节炎的动物模型主要有三类：自发性模型、诱导性模型和转基因模型。自发性模型是指
42、动物在生长过程中会出现骨性关节炎的组织学改变，主要包括S己ort小鼠、C57BL小鼠、C57黑鼠和Hartley豚鼠等形成的模型。优点是：接近原发性膝关节骨性关节炎的发病机制和疾病的病变进程；缺点是：与人类膝关节骨性关节炎相比有差异，主要表现在关节软骨变化。诱导性模型是指通过手术或非手术方法造成动物的膝关节发生骨性关节炎样变化。手术方法包括Hulth法、前交叉韧带横断和(或)半月板切除法、关节刻痕法、骨内高压法、卵巢切除法等。手术方法具有造模成功率高，稳定性好，应用广泛等优点；而同时手术中可能出现局部组织创伤，甚至发生感染以及手术过程中的出血、炎症等则是手术方法的缺点，这些对膝关节骨性关节炎的
43、关节软骨和滑膜在早期的代谢可能产生影响。非手术方法主要有关节制动法和关节腔内注射法。关节制动的优点是：没有创伤，可以较好造出模型；缺点是：造模时间较长。关节腔内注射常用药物有木瓜蛋白酶、II型胶原蛋白酶、菲律宾菌素、碘醋酸盐、透明质酸酶等。其优点是：操作相对简单，造模时间短，可以保持完整的关节囊；缺点是：仍有感染可能性，且所造模型与人类膝关节发生骨性关节炎的病变进程有少许差异。转基因模型是指运用转基因技术剔除小鼠Col2al、Col9al等基因，造成关节软骨的骨性关节炎样改变的模型。其优点是：无创伤，减少动物痛苦，适合研究发病的起始机制和关节软骨的改变，并为药物筛选试验和治疗提供方案；缺点是：因为物利，间的差异，并不能与人类关节软骨的变化完全一致，且转基因技术至今尚不十分成熟，造模成功率低。研究发现，很多动物如马、猴、羊、狗、兔、大鼠、小鼠、豚鼠、鸡、鹰和鸽子等均能诱导出膝关节骨性关节炎，选择合适的动物模型，关系到最终能否成功的完成研究。鼠类模型人类骨性关节炎相比，虽然在关节软骨退变的组织学特征方面相似，但其关节的几何形状稍不同，软骨中也不存在硫酸角质素，