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1、内毒素的基础知识内毒素的基础知识仪器试剂的简单介绍及实验原理仪器试剂的简单介绍及实验原理临床检验关心的问题临床检验关心的问题132三大知识点三大知识点1892年,科学家Richard在研究霍乱弧菌的时候,发现革兰阴性菌细胞壁外膜中有一种不溶性成分,它能够引起人体发热、休克、器官损害等病理表现，因其毒性效应和性质与外毒素有显著差异，就用内毒素这一术语来描述该物质。随后多年对革兰阴性菌细胞壁外膜的超微结构技术和生物分析技术，证实内毒素是磷脂双分子层结构。内毒素发现的历史内毒素发现的历史内毒素的组成内毒素的组成O特异性抗原脂质A核心多糖内毒素的定义和危害内毒素的定义和危害内毒素（Endotoxin）
2、是革兰阴性菌细胞壁外膜的脂多糖（LPS）成分，是革兰阴性菌生长时释放或死亡后裂解出来的毒性产物，其中起主要致病作用的是非结合的游离脂多糖（FLPS）。内毒素能够直接作用于人体，激活组织内的炎性细胞和炎症因子，导致机体发热并产生全身性炎症反应，继而引起弥散性血管内凝血、休克、多脏器功能衰竭等严重的病理生理症状，危及生命。定义危害内毒素的理化性质内毒素的理化性质可滤过性：能够穿透滤过膜可滤过性：能够穿透滤过膜水水 溶溶 性：性：LPS的的O-特异性特异性Ag呈亲水性呈亲水性被吸附性：可被活性碳所吸附被吸附性：可被活性碳所吸附易被强酸、强碱和强氧化剂破坏易被强酸、强碱和强氧化剂破坏耐耐 热热 性：彻
3、底灭活需性：彻底灭活需250高温干烤一小时高温干烤一小时人体内毒素的来源人体内毒素的来源内源性途径外源性途径注射药品及溶液开放性创伤烧伤骨折感染休克大手术术后肝脏疾病仪器试剂的介绍及实验原理仪器试剂的介绍及实验原理BET-24A细菌内毒素分析仪 天津大学天大天发科技有限公司生产人体液检测专用鲎试剂盒 湛江博康海洋生物制品有限公司生产鲎鲎 20世纪六十年代，人们发现一种古老的海洋生物，被称为“海洋活化石”的鲎，它的血液与内毒素接触后会发生特异性的凝集反应，人们经过大量研究和实验从它的血液中提取出了用来检测内毒素的“鲎试剂”。鲎试剂的发明鲎试剂的发明 1968年1月Jack Levin和 Fred
4、erik B.Bang教授在美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物实验室成功分离提取鲎血细胞并研制成能够检测细菌内毒素的鲎试剂，开辟了人类认识和检测内毒素的新纪元！试剂盒特点试剂盒特点鲎试剂是唯一能够检测内毒素水平的生物试剂生物试剂采用更为准确的动态浊度法动态浊度法进行检测鲎试剂盒鲎试剂盒由鲎试剂、I号II号检测前处理液、除菌除热原试管和采血管、吸头及检测用水组成精心设置血液前处理流程前处理流程，有效去除血细胞和蛋白的干扰，准确评估待测样本中的内毒素水平采用内毒素国家工作标准品进行质控质控测评，保证检测结果准确无误采用国际通用的内毒素活性单位（内毒素活性单位（EU/ml）来准确衡量待测样本
5、中的内毒素致病效能内毒素的单位内毒素的单位EU/mlEU/ml1BET-24A采用国际通用的内毒素活性单位EU/ml来表示检测出的内毒素结果；2活性单位指的是在生物试剂在检测某些具有某些活性的生物时，它测得的是这种生物说是致病力，而不是这种生物的重量；3不同的G菌释放的内毒素活性不同，而对临床最有诊断价值的是观测到的内毒素的致病力大小，所以内毒素水平用活性单位来表示更客观，更有科学意义。实验原理实验原理 通过鲎试剂与内毒素溶液混合会发生凝集反应产生浊度变化，通过浓度时间反应曲线，得出待测样品的内毒素浓度；实验原理实验原理实验原理实验原理 鲎试剂与内毒素反应是特异性的“S”曲线，取光密度值为0.
6、02点时作为反应终点时间，内毒素的浓度与反应时间成反比BETBET检测标本范围检测标本范围 尿 液胸腔积液血 液脑脊液透析液和透析用水腹腔积液检测内毒素的方法检测内毒素的方法定性检测凝胶法定量检测光度（浊度）法显色（比色）法动态浊度法终点浊度法动态显色法终点显色法几种检测方法的比较几种检测方法的比较 凝胶法检测的特点凝胶法检测的特点“限量”检测，是一种传统经典的检测方法；凝胶法是以试管内反应物凝胶牢固程度为判断标准，易受人为因素影响；限量检查的最低检测限仅为0.035EU/ml，因供试品稀释倍数所限，容易被供试品干扰，误差大。因此，凝胶法不适合在临床用于体液的细菌内毒素检查；显色法检测的特点显
7、色法检测的特点显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒素浓度。 此法试剂较昂贵，操作较复杂，在一定范围之内灵敏度、特异性较高，但检测范围窄；动态浊度法检测的特点动态浊度法检测的特点动态浊度法动态浊度法检测的特点检测的特点利用细菌内毒素在与鲎试剂形成凝利用细菌内毒素在与鲎试剂形成凝胶过程中浊度动态变化定量测定细胶过程中浊度动态变化定量测定细菌内毒素水平菌内毒素水平 动态浊度法法检测范围宽，检测范动态浊度法法检测范围宽，检测范围为围为 0.005EU/ml 0.005EU/ml 100EU/ml100EU/m
8、l，应，应用范围广用范围广对样本的内毒素含量可以定量检测对样本的内毒素含量可以定量检测，标准化程度高，适合用于临床体，标准化程度高，适合用于临床体液细菌内毒素引起发热及重症疾病液细菌内毒素引起发热及重症疾病的早期诊断检测的早期诊断检测发热原因的快速辅助诊断（ 1小时）内毒素定量检测的临床意义内毒素定量检测的临床意义早期判断革兰阴性菌的感染情况（G菌所致）重症疾患的早期诊断帮助临床医生快速合理筛选适当的抗生素判断抗感染治疗效果及预后肠源性内毒素血症的预判及评估恶性肿瘤恶性肿瘤感染感染结缔组织结缔组织GG+发热原因的快速辅助诊断发热原因的快速辅助诊断病毒病毒真菌等真菌等细菌细菌帮助临床医生快速筛选
9、合理抗生素帮助临床医生快速筛选合理抗生素G内毒素头孢菌素类头孢菌素类喹诺酮类喹诺酮类碳氢霉烯类碳氢霉烯类氨基糖甙类氨基糖甙类内毒素检测与微生物培养的关系内毒素检测与微生物培养的关系内毒素检测内毒素检测微生物培养微生物培养确定菌种确定菌种菌种确定精确确定指导用药指导用药检测速度检测速度1h 快37天，慢评估病情轻重评估病情轻重重疾早期预警重疾早期预警阳性率阳性率80%20%内毒素与血培养的结果比较内毒素与血培养的结果比较 科室科室 内毒素结果内毒素结果(EU/ml)血培养结果血培养结果 脑外科脑外科 0.4808大肠埃希菌 ICU 0.2136大肠埃希菌 ICU 0.5904鲍曼不动杆菌 ICU
10、 0.1408鲍曼不动杆菌肾内科肾内科13.4727大肠埃希菌 肝移植科肝移植科 2.1大肠埃希菌肝移植科肝移植科16.8792大肠埃希菌内毒素超标内毒素超标,血培养阳性血培养阳性内毒素与痰培养的结果比较内毒素与痰培养的结果比较 科室科室内毒素结果内毒素结果(EU/ml)痰培养结果痰培养结果脑外科脑外科3.0096肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌 脑外科脑外科3.2064肺炎克雷伯菌脑外科脑外科 11.2776铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌 肾内科肾内科 1.8264肺炎克雷伯菌铜绿假单胞菌肾移植科肾移植科10.204阴沟肠杆菌ICU8.0672大肠埃希菌肝移植科肝移植科2.79鲍曼不动杆菌BETBET和
11、和PCTPCT( (降钙素原降钙素原)的区别的区别PCT本身无致病作用，而LPS能直接导致人体发热及产生炎症反应PCT也是在以LPS为首的炎症因子作用下刺激机体靶细胞产生PCT仅能判断是否是细菌感染，BET能判断是否为G菌感染，检测更精准对于某些肿瘤患者、新生儿及接受移植手术患者而言，如感染则检测PCT有制约，而BET对此毫无制约分段区间的解释分段区间的解释00.035EU/ml 无明显内毒素血症0.035 0.1EU/ml 临床观察期0.1 1.0EU/ml 内毒素血症大于1.0EU/ml 重度内毒素血症BETBET测得值的影响因素有那些测得值的影响因素有那些外源性的内毒素侵入外源性的内毒素侵入患者肝功能患者肝功能血细胞及免疫系统血细胞及免疫系统患者肠道的屏障功能患者肠道的屏障功能G感染及使用抗生素杀灭感染及使用抗生素杀灭G内毒素的释放内毒素的释放