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1、中国测试CHINA MEASUREMENT & TESTVol.42 No.12December，2016第42卷第12期2016年12月基于化学成分临床利用量的不同产地黄柏质量评价徐玉玲, 吴南轩, 李鹏程, 伍蕊嗣, 贾裕杰, 刘 涛（成都大学药学与生物工程学院，四川 成都 610106）摘 要：采用小檗碱临床利用量对黄柏药材的质量进行再评价研究。 通过正交试验优选黄柏小檗碱最佳临床提取工艺,根据最佳提取工艺采用HPLC法测定5批不同产地黄柏小檗碱含量,然后计算其临床利用量。黄柏小檗碱最佳临床提取工艺为加药材10倍量的水提取3次,每次1.5h。贵州陕西湖北天津新疆的小檗碱临床利用量(g/1
2、00g)分别为11.10,7.30,1.35,1.30,1.40g。 该文建立的方法将中药材中的有效成分与临床实际利用情况相联系,为黄柏及其他的中药材品质评价提供新思路。关键词：黄柏；小檗碱；临床利用量；质量评价文献标志码：A 文章编号：1674-5124(2016)12-0045-04Study on quality evaluation for cortex phellodendri from different habitatsbased on the clinical dosage of chemical compositionXU Yuling，WU Nanxuan，LI Pengc
3、heng，WU Ruisi，JIA Yujie，LIU Tao（School of Pharmacy and Bioengineering，Chengdu University，Chengdu 610106，China）Abstract: Re-evaluation and restudy on the quality of cortex phellodendri were carried out basedon the clinical dosage of berberine. Optimum clinical extraction process for berberinein corte
4、xphellodendri was preferentially selected via orthogonal test，and HPLC method was adopted tomeasure the content of 5 batches of berberinein cortex phellodendri from different habitatsaccording to optimum extraction process，so as to calculate its clinical dosage. Optimum clinicalextraction process fo
5、r berberinein cortex phellodendri: add water（10 times of medicinal materials）and extract for three times（1.5h/time）. Clinical dosage（g/100g）of berberine in Guizhou，Shaanxi，Hubei，Tianjin and Xinjiang is respectively 11.10 g，7.30 g，1.35 g，1.30 g and 1.40 g. Themethod in this paper is related to the ef
6、fective components of medicinal materials and the clinicalpractice，which provides a new thought for quality evaluation and study of Chinese medicinalmaterials and cortex phellodendri.Keywords: cortex phellodendri；berberine；clinical dosage；quality evaluation收稿日期：2016-04-12；收到修改稿日期：2016-06-09基金项目：四川省千
7、人计划项目(2013332)作者简介：徐玉玲(1975-),女,云南曲靖市人,高级工程师,硕士,主要从事中成药开发及再评价研究。通信作者：刘 涛(1976-),男,四川南充市人,研究员级高级工程师,博士,主要从事中成药新药开发及再评价工作。0 引 言黄柏为一种常用中药,是芸香科植物黄皮树(Phellodendron chinense Schneid.)的干燥树皮,具有清热泻火解毒退虚热之功效,小檗碱为其主要成分之一1。小檗碱为临床上常用的一种广谱抗菌药,主要用于菌痢胃肠炎痈肿等细菌性感染2。研究证明小檗碱还具有抗肿瘤抗心律失常降血糖将压等作用3。目前药材质量评价主要以化学有效成分含量为指标,但
8、一些研究发现有些有效成分在临床上利用量不高,出现了“质优用劣”的现象。 中国药典2015版doi：10.11857/j.issn.1674-5124.2016.12.010万方数据中国测试 2016年12月一部里收载的中药材有效成分含量为(过三号药典筛)药粉含量,即用部分药材含量来作为药材的整体含量,一些研究表明,取过筛后的细粉进行含量测定,所得结果并不能完全代表药材整体真实的含量。 因此刘涛等4提出用药材真实含量结合有效成分临床利用量来评价药材的质量。“中药成分临床利用量”是指药材成分在临床应用时,药材中的化学成分可被临床使用时的使用量。 基于“中药成分临床利用量”的中药材药用质量评价指标,
9、符合中医药临床应用特点,是体现中药特色的中药质量评价方法。本文对5个产地的黄柏采用小檗碱临床利用量的方法进行品质考察,对其有效成分在临床上的应用具有重要参考价值,也为其他药材的品质评价提供了一种新思路。1 仪器与试剂iChrom P5100型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司),BS-6KH型电子天平(上海友声衡器有限公司),FA2004型电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司生产)。黄柏药材购自各地大型药材市场及药房,共6个样品,经成都大学鉴定四川贵州天津陕西湖北新疆产地购买的实验药材为黄柏干燥树皮(详情见表 5)；其中四川黄柏(批号20150523)购自成都市荷花池中药材市场,用于
10、工艺条件研究。 小檗碱对照品(批号 150623-160724),由中国食品药品检定研究所提供。 乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯。2 方法与结果长期以来,人们习用水作为溶媒煎煮黄柏药材,供患者服用,因此结合临床实际应用,本实验用水作为提取溶媒,不超过3次提取次数和1.5h提取时间对黄柏药材的临床利用量进行考察。2.1 黄柏小檗碱含量测定2.1.1 色谱条件色谱柱GS-120-5-C18-AP(4.6 mm250 mm,5 m),流动相乙腈-0.1%磷酸(：,50：50)(100 mL加0.1g十二烷基磺酸钠),检测波长265nm,柱温室温,流量1mL/min。2.1.2 对照品溶液的制备精密
11、称取小檗碱适量,用2.1.1的流动相稀释成质量浓度为0.0743mg/mL的溶液,其 HPLC图谱如图1(a)所示。2.1.3 供试品溶液的制备供试品溶液 1 精密称定过三号筛的粉末约0.1 g,置于100mL容量品中,加流动相80 mL超声处理,40min冷却,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,即得。供试品溶液2 精密称定供试品溶液1制备粉碎时未过三号筛的部分药材约0.1g,置于100mL容量品中, 加流动相80mL超声处理,40min冷却,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。供试品溶液 3 精密量取 2.2.22.2.32.3.2 项下的提取2mL至50mL容量瓶中,加
12、水稀释至刻度,摇匀,再按2.1.1的色谱条件测定,其 HPLC图谱如图1(b)所示。2.1.4 精密度试验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10L, 按照2.1.1的色谱条件重复进样6次, 测定其峰面积,计算RSD为1.04%,表明仪器精密度良好。2.1.5 加样回收率试验精密吸取已知含量的黄柏提取液1mL于50mL量瓶中,精密加入对照品溶液3mL(1.01mg/mL),按2.1.3中供试品溶液2的方法制成供试品溶液,平行6份,按2.1.1的色谱条件分别测定盐酸小檗碱峰面积,结果平均回收率为98.96%,RSD为1.55%,表明本方法回收率良好。 结果见表1。2.2 正交试验设计优选提取工艺2.2.
13、1 因素及水平的选择以水为提取溶媒5-6,选取溶媒用量提取次数提取时间为考察因素,以提取液中小檗碱的量为考察序号 样品中含量/mg 加入量/mg 测定总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%1 3.01 3.03 6.05 100.3398.96 1.552 3.01 3.03 6.00 98.683 3.01 3.03 6.01 99.014 3.01 3.03 5.98 98.025 3.01 3.03 6.07 100.996 3.01 3.03 5.94 96.70表1 盐酸小檗碱回收率试验结果(a)对照品2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0时间/min(b)样
14、品2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0时间/min图1 黄柏小檗碱的HPLC图谱46万方数据第42卷第12期指标7-8,采用L9(34)正交表安排实验。其因素水平表如表2所示。2.2.2 正交试验设计及结果分别取9组四川黄柏药材(每组80g)按照正交试验设计表进行实验,测量提取液的体积,根据2.1.1和2.1.3的步骤进行含量测定,以小檗碱含量为指标进行分析9-10。 结果如表3所示,方差分析如表4所示。由表3可得,水的用量提取次数以及提取时间3个因素对小檗碱的提取影响程度不同,R 值大小依次为RCRBRA,提取时间对于含量的影响最大。表4可得,水的用量(A)对实验结果有显著性影
15、响,提取次数(B)和提取时间(C)对实验结果有极显著性影响,根据此分析结果,选择最佳提取工艺为A3B3C3,即用10倍药材量的水提取3次,每次1.5h。2.2.3 提取工艺验证取3组黄柏药材,12组80g,第3组160g,12组分别加入800mL水,第3组加入1600mL水,每组提取3次,每次1.5h。 测定提取液的体积,计算小檗碱的量,结果如表5所示。结果表明,3 组验证试验小檗碱的量分别为6.388 9,6.560 7,13.5901 g,表明所选择的提取工艺稳定可行。2.3 不同产地黄柏小檗碱真实含量以及临床利用量测定2.3.1 不同产地黄柏小檗碱真实含量测定按2.1.3供试品溶液制备方
16、法和2.1.1的色谱条件分别测定5批不同产地黄柏,其通过三号药典筛的粉末与未通过的部分药材的小檗碱含量,然后计算出黄柏整体药材小檗碱含量,即为药材真实含量。结果如表7所示。2.3.2 不同产地黄柏小檗碱临床利用量测定分别取每批不同产地的黄柏药材 2 组,每组水平 A加水量/倍 B提取次数/次 C提取时间/h1 6 1 0.52 8 2 13 10 3 1.5表2 黄柏小檗碱临床提取工艺正交试验因素水平序号 A B C D 小檗碱的量/g1 1 1 1 1 1.75832 1 2 2 2 4.02223 1 3 3 3 5.23284 2 1 2 3 2.77665 2 2 3 1 5.2682
17、6 2 3 1 2 5.00087 3 1 3 2 3.45288 3 2 1 3 4.37589 3 3 2 1 5.7487K1 11.0134 7.9877 11.1350 12.7753K2 13.0456 13.6663 12.5476 12.4758K3 13.5774 15.9823 13.9538 12.3852R 2.5640 7.9946 2.8188 0.3901表3 黄柏小檗碱提取工艺正交试验方差变异来源 SS f MS F P水用量 1.2207 2 0.6104 43.9402 0.05提取次数 11.2805 2 5.6402 406.0380 0.01提取时间
18、16.6443 2 8.3222 599.1089 0.01误差 0.0278 2 0.0139 1.0000表4 方差分析表编号 黄柏供试品的量/g 提取液体积/mL 小檗碱的量/g验证1 80.4 2120 6.3889验证2 80.4 2172.5 6.5607验证3 160.4 4375 13.5901表5 黄柏小檗碱提取工艺验证编号 购买地 批号 贵州省亳州市南部新区 中国毫州市京皖中药饮片厂 20150908 陕西西安市五路163号 老百姓大药房新城店 20150910 湖北东西湖区金银湖街卫生院 20150912 天津海天九州大药房 20150907 新疆和剂学旁药店 20150
19、914表6 黄柏样品来源表注：1)药材真实含量=过三号筛药粉量过三号筛药粉的含量+过三号筛药材量过三号筛药材的含量过三号筛药粉量+过三号筛药材量 100编号 批号 过三号筛药粉量/g 未过三号筛药材量/g 过三号筛的药粉含量/% 未过三号筛药材的含量/% 药材的真实含量/%贵州 20150908 2.0309 2.7543 18.7 13.55 15.7陕西 20150910 1.7869 2.9985 20.0 14.2 16.4湖北 20150912 1.6071 3.1622 3.75 3.25 3.42天津 20150907 1.0505 3.7714 2.30 1.35 1.56新疆
20、 20150914 1.3291 3.1974 5.95 4.70 5.07表7 不同产地黄柏小檗碱的真实含量测定结果1)徐玉玲等：基于化学成分临床利用量的不同产地黄柏质量评价 47万方数据中国测试 2016年12月100 g,分别加入 1 000 mL 水,每组提取 3 次,每次1.5h。 测定提取液的体积, 计算小檗碱的临床利用量,结果如表8所示。2.3.3 实验结果从表7中可以得知,贵州与陕西的黄柏小檗碱的真实含量最高,分别为15.7%16.4%；湖北与新疆的相差不大,分别为3.42%5.07%；天津的最低,其小檗碱真实含量为1.56%。 药材的真实含量低于过三号药典筛的粉末的含量。从表
21、8中可以得知,不同产地黄柏小檗碱的临床利用量各不相同, 临床利用量最高的是贵州,为11.10 g/100 g； 其次是陕西的黄柏临床利用量,为7.30g/100 g；天津湖北新疆的临床利用量相差不大,分别为1.30,1.35,1.40g/100g。2.3.4 结 论由表7可知,5个产地黄柏的真实含量比药典中的方法低,将会对提取转移率的计算产生一定的影响,故在计算提取转移率时,采用真实含量计算较好。 由表8可知,陕西的黄柏含量最高,但提取转移率较低,而天津的黄柏含量最低,转移率却较高,表明药材含量的高低与提取转移率并非成正比关系,因此,在“真实含量”以及提取转移率基础上提出的“中药成分临床利用量
22、”评价中药品质的方法具有一定意义。中药成分临床利用量11-12不仅可以反映药材真实含量和转移率的高低,同时对该成分在临床上实际被利用的情况具有重要参考价值,为中药材的品质评价提供了一种新思路。3 结束语本文采用小檗碱临床利用量对黄柏药材进行质量评价,测定贵州陕西湖北天津新疆等地小檗碱的真实含量和临床利用量, 建立了中药有效成分与临床实际利用的关系。 在“真实含量”以及提取转移率基础上提出的“中药成分临床利用量”评价中药品质的方法就具有一定的优势。“中药成分临床利用量”是指药材成分在临床应用时,药材中的化学成分可被临床使用时利用的量4。中药成分临床利用量不仅可以反映指标成分或有效成分含量以及提取
23、转移率的高低,同时对其在临床上实际被利用的情况具有重要参考价值,为中药材的品质评价提供了一种新的方法。参考文献1 胡宝平,税丕先.小檗碱提取工艺研究进展J.泸州医学院学报,2011,34(2)：214-216.2 胡俊青,胡晓.黄柏化学成分和药理作用的现代研究J.当代医学,2009,15(7)：139-141.3 方艺霖.含小檗碱类中药品质生物评价与控制的初步研究D.成都：成都中医药大学,2008.4 刘涛,苟小军,万德光,等.基于“中药成分临床利用率”的中药材药用品质评价模式的商建J. 中草药,2015,46(13)：1863-1866.5 邢俊波,刘云.正交设计优选黄柏中小檗碱的提取工艺J
24、.时珍国医国药,2003,14(3)：129-130.6 吴珊珊.黄柏不同规格不同炮制品内在质量研究D.成都：成都中医药大学,2014.7 李跃辉,胡薏冰,王银,等.不同产区与采收期黄柏中小檗碱与黄柏碱含量对比研究J. 中国医药导报,2014,11(11)：90-93.8 孙雪梅,卢先明,邓晶晶,等. HPLC测定黄柏不同部位中的盐酸小檗碱和盐酸药根碱J.华西药学杂志,2010,25(5)：599-600.9 林丽.黄柏炮制前后水提液的成分变化J.社区医学杂志,2014,12(21)：37-39.10 刘涛,郭晓恒,吴春梅,等.肺毒清颗粒中有效成分的含量测定及转移率考察J.中国实验方剂学杂志,
25、2013,19(10)：54-56.11 刘涛,张蕾,刘婷,等.不同产地黄芩中的黄芩苷提取转移率研究J.成都大学学报(自然科学版),2014,33(1)：7-9.12 简永耀,靳龙文.不同产地黄柏药材的质量分析J.淮海医药,2007,25(6)：566-567.(编辑：徐柳)编号 批号 药材真实含量/% 2015版药典含量测定法测定含量转移率/% 真实含量转移率/% 临床利用量/(g100g-1)贵州 20150908 15.7 60.0 70.7 11.10陕西 20150910 16.4 36.7 44.5 7.30湖北 20150912 3.42 36.0 39.5 1.35天津 20150907 1.56 55.0 83.3 1.30新疆 20150914 5.07 23.4 27.6 1.40表8 不同产地黄柏小檗碱临床利用量测定结果1)注：1)临床利用量=100g药材真实含量真实含量转移率48万方数据