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1、生化与分子生物学实验的动态教学初探 摘要 生物化学与分子生物学是一门医学基础试验课程，为了进一步供应学生在试验课中的学习效果，本探讨初探生化与分子生物学试验的教学内容重新编排，发觉能更大的调动学生学习的主动性，理论驾驭与动手实力得到提高。 关键词 生物化学；分子生物学；动态教学 中图分类号 R-4 文献标识码 B 文章编号 2095-061601-150-02 现代生物化学与分子生物学技术的发展，不仅推动了分子生物学理论在广度和深度2个方面的进展1，同时以基因工程为主导的生化与分子生物学技术，也已经进入产业化阶段，
2、并推动着社会生产力的发展2。鉴于现代生物化学与分子生物学新技术的不断涌现，娴熟驾驭其试验操作技术，就成为生命科学工作者包括医疗工作者的基本素养要求，而试验教学是整个生化与分子生物学教学过程的重要环节3。本探讨通过对试验课学生反馈与课程技术探讨总结，从生化与分子生物学试验教学的培育目标动身，针对目前其次军医高校试验教学的现状，以及传统试验教学模式显露出来的弊端进行分析，提出以下试验课程改革方案。 1 跳出理论与实践分别的教学模式 新课程，新理念，要求新的学习方法。先理论后实践，围绕分子生物学技术的基本过程，以人肿瘤坏死因子在大肠杆菌中表达为主线，以“分、切、接、转、筛”五大步骤绽开。
3、第一节介绍抽提组织细胞的核酸，并以此为模板，利用聚合酶链反应或反转录PCR的方法分别其编码DNA序列，即目的基因的获得；其次节为分别纯化质粒的各种方法，即载体的获得，然后目的基因与载体分别进行限制性核酸内切酶的酶切及回收与鉴定，即“切”；第三节为目的基因与载体以连接酶连接，然后转化感受态细胞，并以质粒所带的筛选标记进行筛选，即“接”“转”与“筛”。第四节对重组子进一步筛选，通过诱导表达重组子编码的产物，然后进行分别鉴定重组蛋白质，这是依据表达产物的理化性质进一步“筛”；以及以蛋白质电泳为基础，从表达产物的分子量，免疫学性质、杀伤肿瘤细胞的生物学活性等方面进一步分析与鉴定重组表达产物，也是“筛”
4、的过程。 2 导引曲径，由理论回到试验 围绕思维目标，指引思维的“曲径”，这“曲径”事实上是指不同角度、不同层次的思维指向。教学中，让学生沿着“曲径”逐层“探幽”，促其对思维目标的深层感悟，并从中引出试验课教学的重点-试验原理及操作。 2.1 第一节课：理论教授内容：TNF家族简介 TNF配体及受体超家族基因结构特征：复习内含子，外显子，单拷贝基因，基因家族；TNF配体及受体超家族分子结构：复习蛋白质结构层次，跨膜蛋白，信号肽；TNF配体及受体超家族结构与功能关系：凋亡，坏死；信号转导的结构基础。 带着理论中存在的试验问题，回到试验中去驾驭详细的试验原理及操作。PCR原
5、理：DNA合成，3步反应循环；引物设计原理：11条，结合TNF可溶性编码序列的扩增引物讲解；PCR扩增体系：各组分，浓度，纯度要求，运用时留意点；PCR扩增条件：温度、循环次数，各种类型PCR仪简介；PCR衍生技术和用途。 2.2 其次节课：理论教授内容 质粒：概念，质粒不相容性；严紧性与松弛型质粒差别的基础；其他常用载体；限制性内切酶：、特征，型详介；酶切图谱；连接酶：T4 DNA连接酶，其他连接酶；其他工具酶；定向克隆；细胞组分。同时对应本节带出的要驾驭试验操作：质粒抽提试剂盒原理、各溶液组分和作用，操作要点；限制性内切酶反应条件，运用留意事项；凝胶回收试剂盒原理、各溶液组分和
6、作用，操作要点；连接酶反应条件，运用留意事项；电泳详解：各类电泳原理；核酸电泳操作要点，适用范围，留意事项。细胞组分分别：破裂细胞方法匀浆；化学方法：酸解，碱裂解；生物方法：各种酶解）。 2.3 第三节课：理论教授内容 外源基因导入宿主方式；感受态；重组子筛选原理。同时对应本节带出的要驾驭的试验操作：转化：操作要点：恒低温保持，复苏温度与时间；蓝白斑筛选。 2.4 第四节课：理论教授内容 蛋白质的哪些性质可作为蛋白质分别纯化的依据？重组蛋白表达的特性；抗体简介：结构，类型标记抗体）；蛋白质功能探讨策略。 同时对应本节带出的要驾驭试验操作：盐析：原理；分段盐析；离心技术详
7、解：转速，离心力；密度梯度离心；差速离心；温度，真空度；层析：分子筛；其他方法；方法的选择；SDS-PAGE；Western-blot分析：操作要点；活性测定：分子相互作用分析；酶活性分析，细胞功能分析，动物模型分析。 2.5 第五节课：总复习 分子克隆原理与流程总结；基因功能探讨策略：表达；表达调控；产物结构，理化性质鉴定，相互作用，功能探讨。 3 开放教学，注意思索 在教学中采纳的是以小组为单位进行探讨，开展试验探究活动，以培育学生的探究实力。每节理论与操作课完成后预留部分时间，让学生带着思索回顾内容，在探讨中，每个成员是同等的，可以自由地发表个人的见解，通过探讨可
8、以集思广益，相互合作，加速学问的同化。 3.1 第一节课思索题 PCR时降低退火温度对反应有何影响？PCR时延长变性时间对反应有何影响？PCR时循环次数是否越多越好？为什么？PCR时假如出现非特异性带，可能有哪些缘由？如要阐述某蛋白质分子的结构与功能，应如何绽开？ 3.2 其次节课思索题 质粒的基本性质有哪些？质粒载体与自然质粒相比有哪些改进？在碱法提取质粒DNA操作过程中应留意哪些问题？假如一个DNA酶解液在电泳后发觉DNA未被切动，你认为可能是什么缘由？琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？设计试验来推断双酶切时，证明2个限制性内切酶都起到了作用。 3.
9、3 第三节课思索题 制备感受态细胞的原理是什么？假如试验中比照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何说明这种现象？在用质粒载体进行外源DNA片段克隆时主要应考虑哪些因素？ 4 探讨 生物化学与分子生物学是一门基础试验学科4，学生经过对理论学习对生化与生物化学的探讨内容及探讨手段有了深化的理解，此时须要更进一步的深化，通过对试验操作技能的学习与驾驭，能够利用分子生物学手段解决实际的试验问题。 本试验课程改革正处于一个初步探究的阶段，通过学生的反馈调查，新教学方法受到了同学们的欢迎，总体上体现在：留意力更加集中，运用了理论与试验操作结合学习，减轻了学生纯理论学习的
10、枯燥乏味的“填鸭式”教化；带着问题学习技术，本教学摒弃了传统上孤立的纯试验技术学习，而是采纳带着问题，解决问题，围绕分子生物学技术的基本过程，以人肿瘤坏死因子在大肠杆菌中表达为主线，以“分、切、接、转、筛”五大步骤绽开；刚好温故，经过理论与操作技能的学习，还预留部分时间让学生对思索题进行探讨，有利于集思广益，相互合作，加速学问的同化。 总之，通过对生化试验教学的改革，学生对生化试验产生了深厚的爱好，参加试验的自觉性和主动性得到有效提高，提高了试验教学质量。 参考文献 1 曹朝晖，龙石银，胡小波，等把握专业特色提高生物化学试验教学质量J.医学教化探究，2022，7：374-375 2 吴小梅，苏
11、建友，周亚军，等.关于提高医学生物化学试验教学质量的思索J.交通医学，2022，22：209-210 3 卜友泉，廖飞，王咏梅，等.生物化学试验教学改革初探J.山西医科高校学报，2022，10：573-573 4 杨红，刘国安，曾家豫.生物化学试验教学改革探究与实践J.高等理科教化，2022，78：58-61 9例有尿潴留症状；局麻组仅有1例恶心和1例尿潴留症状患者。明显削减了围手术期并发症，尤其是尿潴留的发生；生理干扰小、平安范围大、平安性好，对不适合硬膜外麻醉或全麻的老年患者和并存有心、肺疾患的患者，可提高手术耐受性，拓宽了手术适应证；无硬膜外麻醉或全麻等二次创伤，术后苦痛小；操作简便，对
12、专业麻醉人员要求低。 本组资料显示，局麻镇痛效果与硬膜外麻醉无差别，而且术后并发症明显削减，尤其是术后并发症的发生率明显少于硬膜外麻醉。所以，局部浸润麻醉是择期腹股沟疝无张力修补术最佳的麻醉方式，值得临床探讨和推广。 参考文献 1 王康，王波，胡阳，等.腹股沟疝无张力修补术的麻醉选择J.临床外科杂志，2022，14：45-46. 2 马颂章.无张力疝修补手术的一些问题J.中国好用外科杂志，2001，21：67 3 黄建，刘永强，谢伟.局麻和硬膜外麻醉下腹股沟疝无张力修补手术的比较分析J.中国普外基础与临床杂志，2022，14：312-315 第8页 共8页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页第 8 页 共 8 页