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1、超高效液相色谱在中药研究中的应用 高效液相色谱法在中药分析中的应用 摘 要：目的：综述近年超高效液相色谱（UPLC）在中药探讨中的应用。方法：查阅、分析、归纳有关文献。结果：超高效液相色谱是近年来发展的以超高速度、超高分别度、超高灵敏度为特点的新型液相色谱技术。结论：超高效液相色谱为中药探讨供应了新手段和新思路，具有广袤的前景。关键词：超高效液相色谱；UPLC；液相色谱技术；中药；应用中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1017-2349（2022）06-0073-03超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography，UPLC）系指一种采纳
2、小颗粒填料色谱柱（粒径小于2m）和超高压系统（压力大于105kPa）的新型液相色谱技术，能显著改善色谱峰的分别度和检测灵敏度，同时大大缩短分析周期，因此特殊适用于微量困难混合物的分别和高通量探讨。Waters推出的ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统在2003年3月8日12日举办的匹斯堡展会上一经露面便马上引起了轰动，这项被媒体称为令人“比预想的还要精彩”的产品最终获得了2004年度的新产品金奖。2004年3月，Waters公司领先推出了第一台商品化的超高效液相色谱系统（ACQUITY，UPLC TM）。自问世以来，超高效液相色谱发展很快，现已胜利应用于农药残留物检测、水质和环境监
3、测、化妆品质量限制、药物及制剂的分析检测和质量限制、中药困难组分分析及代谢组学等领域12。现对超高效液相色谱在中药探讨中的应用进行综述。1 在中药提取工艺方面的应用李耿等3运用超高效液相色谱（UPLC），采纳析因试验设计，考察了丹参饮片在不同加水倍数、煎煮时间、煎煮次数下的煎出液中丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛等多种成分的含量改变规律。试验结果表明随着煎煮时间的延长，丹参中的主要水溶性有效成分丹酚B的含量会而逐步降低；而同时，丹参素和原儿茶醛的含量则持续增加。该探讨得出如下结论：丹参酮类成分水煎煮很难溶出，丹参中的丹参素和原儿茶醛主要是来源于丹参酚酸类成分在较高温度下的逐步降解，测定或提取丹参中丹
4、酚B等水溶性成分不宜采纳长时间、高温煎煮的方式，丹参临床应用时应留意避开久煎。为今后更好利用丹参这一传统中药供应了很好的科学依据。曹悦等4运用UPLC，对中药龙胆的提取工艺进行了探讨，该探讨采纳L9（34）正交表支配试验，Shimadzu C18（3075 mm，17 m）色谱柱，流淌相为乙腈-04%磷酸（VV=55945），流速080 mL/min，检测波长235，270 nm，柱温为40 。通过分析正交试验设计法的结果，在运用甲醇作为溶剂、提取时间为30 min时，超声提取和回流提取两种方法所测定的两个指标性成分的含量基本一样，但考虑到回流的操作相对困难，而且一旦超出规定的回流时间，两类成
5、分含量损失较大，缘由是两类成分均为裂环烯醚萜苷类化合物，受热易分解，因此选择了耐用性较好的超声提取方法，并且在操作中严格限制温度。2 在中药含量测定方面的应用雷萍等5采纳UPLC检测法，分别测定了多种虫草产品中腺苷和虫草素的含量。在最优化条件下，以ACQUITY UPLC C18为色谱柱，流淌相为乙腈和水，等度洗脱，各组分在4 min内可基本实现基线分别。各组分浓度与峰面积在1175g/mL范围内呈良好线性，检测下限（S/N=3）分别为010 g /mL和012 g/mL。殷书梅等6采纳超高压高效液相检测法，测定复方南星止痛膏中马兜铃酸A的含量，在Waters UPLC的高灵敏度色谱条件下，信
6、噪比为31时马兜铃酸A的最低检出限01 g；3批制剂成品及中间体中均未检出马兜铃酸A；3批细辛药材中检出微量马兜铃酸A，平均含量为196g/g，推算至每克制剂中含马兜铃酸A约为005g，远低于口服制剂药品中马兜铃酸A含量不得高05g/g的标准。唐军等7采纳超高压高效液相检测法测定血栓通注射液中5种皂苷成分的含量，三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd在95 min内即达到良好分别，最低定量限和最低检测限可分别达05 ng和02 ng，平均回收率均大于950%。此外，超高效液相色谱在中药含量测定方面的探讨还有诸多的报道819。3 在中药代谢方面的应用薛璟等20采纳大鼠在体肠灌流试验，利
7、用UPLC法测定雷公藤甲素的量，分别探讨汲取部位和药物浓度对雷公藤甲素汲取的影响。试验结果表明4、83、20 pmol/L雷公藤甲素灌流液在各肠段的有效渗透系数和10 cm肠段汲取一百零一分比（10 cm% ABS）依次为：十二指肠结肠空肠回肠，各肠段之间无显著性差异（P005）。不同质量浓度（420 mol/L）的雷公藤甲素在肠道内的汲取无显著性差异（P005）。潘坚扬等21采纳UPLC-MS/MS分析方法测定大鼠灌胃给药和静脉赐予丹参素后不同时间点的血药浓度，进而探讨丹参素在大鼠体内的药动学特征及口服生物利用度。试验结果表明，丹参素的口服生物利用度为953%，口服生物利用度较差，其半衰期无
8、明显差异。徐丽等22利用大鼠在体小肠灌流技术，UPLC-MASS测定大戟95%醇提物，大戟95%醇提物与大枣水提物混合溶液随灌流时间的改变。试验解除了部分与解毒减毒作用无关的成分，将发生改变的成分归类，缩小了找寻毒性成分的范围，降低了盲目性，为更深层次的探讨奠定了基础。4 在中药指纹图谱方面的探讨李存满等2324利用UPLC，对不同产地白花蛇舌草及其伪品水线草的总提物及其非强极性组分特征图谱进行相像度考察和主成分分析，试验结果表明，不同产地白花蛇舌草原药材包括比照药材利用总提物特征图谱进行分析，尽管能得到肯定的聚类效果，但并不是很明显。而将其中的强极性组分有效去除，再对非强极性组分进行特征图谱
9、统计分析时，不同产地不同品种的原药材聚类效果很好。叶文文等25利用UPLC，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（10 mm50 mm，17m），乙腈-水二元梯度洗脱模式，流速为01 ml?min-1，紫外检测波长42 nm，建立了32 批不同产地白术样品的UPLC指纹图谱。白术药材有32个共有峰，多数峰可达到较好的分别，各批次白术药材间共有峰的相对保留时间RSD均90%。刘少华等26利用超高效液相色谱对12批陕西商洛药材基地产丹参药材进行测定，标定共有峰，并通过国家药典指纹图谱相像度计算软件中“中药色谱指纹图谱相像度评价系统A 版”，计算出其相像度均在095以上。刘梅等27利用U
10、PLC，建立丹参药材中水溶性成分丹酚酸类和脂溶性成分丹参酮类的UPLC指纹图谱方法，在15min内得到丹参药材水溶性和脂溶性成分的指纹图谱，峰容量85。并采纳液质连用技术（HPLC-DAD-ESI/MSn）鉴定了其中的20个特征峰，适合于丹参药材及其制剂的指纹图谱探讨和质量限制。汤芳玲等28利用UPLC，通过检测10 批小叶黑柴胡药材，建立其UPLC指纹图谱，共标定了28个共有指纹峰，依据聚类分析结果，可将药材质量分为2大类，8个相像度较高的药材分为一类，相异度高的2、5号药材分为另一类。该方法稳定、重复性好，可用于小叶黑柴胡药材的质量限制。 第7页 共7页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页第 7 页 共 7 页