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1、2022年发热患者血检疟原虫血片制作及染色过程回顾性分析 【摘要】 为了提高疟原虫检出率， 选取本院发热患者末梢血制成厚薄血片进行染色镜检， 通过对血片的制作加以标准化， 染液严格按标准配置， 并对染色各步骤严格限制， 做出的血片染色良好， 背景清楚， 极大便利了疟原虫检查， 提高了疟原虫检查的工作效率。 【关键词】 疟原虫；血片；染色 DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2022.22.194 疟疾是由疟原虫寄生于人体、经蚊传播的寄生虫病， 临床表现以周期性发冷、发热、出汗和脾大、贫血为特征。为按期实现本县消退疟疾任务目标， 落实好各项防治措施， 依据山东省全球基金疟疾项目两
2、年工作安排和山东省消退疟疾实施方案的要求， 结合本县实际防控， 制定了详细的技术方案， 对全县各医疗卫生单位的检验人员进行了全员培训， 现将血片制作及染色过程中的留意事项总结如下。 1 血片制作之前， 肯定要将玻片清洗干净， 玻片的清洁与否影响血片的质量。新载玻片常有游离碱质， 应用清洗液或10%盐酸或铬酸洗液浸泡24 h， 然后再彻底清洗， 晾干， 最终用干净松软的棉巾将玻片擦净晾干1。已用过的载玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中12 d， 或浸泡于煮沸的5%肥皂水1 h左右， 再移到新配置的洗涤剂溶液中12 h， 再用热水将肥皂和血膜洗去， 用清水反复冲洗， 然后擦干或烤干备用2。 2 将血片分为
3、6等份， 第1、2格贴标签及编号备用， 厚血膜涂在第3格中心， 薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部3。用推片的左下角， 从取血部位刮取45 l血量， 使血滴与平置的载玻片接触， 用推片的一角将血由内向外旋转24圈， 涂成厚薄匀称， 直径为0.81.0 cm左右的圆形厚血膜， 过厚易于脱落， 过薄达不到检出率的要求。 制薄血膜时， 用推片一端边缘的中点， 从取血部位取11.5 l血量， 使血滴与平置的载玻片接触， 待血液沿推片边缘绽开约2 cm长度时， 使推片与载玻片呈3045， 匀称而快速的轻轻从右向左推成舌状薄膜， 制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞， 细胞之间相互接触而不相互重叠， 每张
4、载玻片上分别做1个薄血膜和1个厚血膜。至此， 1份完整的血检疟原虫的血片制作完成。薄血膜中疟原虫形态完整， 被感染红细胞未被破坏， 简单识别和鉴别虫种， 但原虫密度低时简单漏检。厚血膜由于原虫集中易检获， 检出率是薄血膜的1525倍， 但制片过程中红细胞溶解， 原虫形态有所变更， 虫种鉴别较困难。 3 将制作好的血片放在阴凉干燥处自然晾干， 室温大约在2530左右， 干燥4 h左右后， 用甲醇固定薄血膜， 厚血膜端稍高于薄血膜端， 让甲醇从薄血膜流下， 让薄血膜自然晾干。甲醇固定完薄血膜后， 再对厚血膜进行溶血。用蒸馏水23滴， 匀称覆盖在厚血膜上12 min， 滴蒸馏水时要轻轻的滴， 待厚血
5、膜中心的红色随水晃动时， 轻轻冲洗去厚血膜上的蒸馏水， 待厚血膜自然干燥后染色。夏天标本尽可能在2448 h内固定染色， 冬天也不能超过73 h。放置时间越久， 血膜越不易溶血脱色， 染色效果也差。 4 吉氏染液的配置 取吉氏粉10 g， 甘油500 ml， 将吉姆萨粉10 g置于研钵中， 加入少量甘油当心充分研磨， 溶解缓慢， 应边加边磨， 至500 ml甘油加完研磨匀称为止。然后倒入1010 ml的容量瓶中4。每次加入少量甲醇至研钵中， 多次洗涤研钵中的残留液， 至洗净为止， 洗液均并入容量瓶中。最终加全部剩余甲醇正好稀释至1010 ml刻度， 塞紧瓶塞， 充分摇匀， 置于5560 水浴中
6、或温箱内24 h， 或室温内35 d。期间常常用力摇动此溶液几分钟。然后可储存至玻璃瓶中塞紧备用。伊红在水溶液中遇到美兰或天青即可相互化合而产生沉淀， 从而失去染色实力， 因此， 吉氏母液肯定不能进水。 5 将染色储备液加入蒸馏水作1：201：15稀释混合匀称后， 将适量染液覆盖厚薄血膜， 染色2030 min， 轻轻漂洗掉染液即可。然后将染色后的玻片用清水冲洗干净后， 将它放在阴凉干燥处晾干即可。至此， 一张完整的合格的血片制作完成5。 6 血片染色好坏除了玻片是否清洁， 血片制作质量和染色技术等有关外， 还受到以下几个因素的影响。 6. 1 染料和溶剂的质量以及染液的新旧。必需用分析纯的甲
7、醇和中性甘油， 而且配置时所用的器具必需干净而无水分。假如试剂不纯， 常使配置的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。新配置的染液染色效果较差， 染液存放时间越长， 染色力越强。盛放染液的瓶子应加塞密闭， 以防吸潮而影响染液质量。 6. 2 染液的稀释浓度及稀释后运用时间。染液的浓度高， 则着色快而深， 颜色常偏碱。染液浓度低， 则着色慢而浅， 颜色偏酸。稀释后的溶液必需当时运用， 一般在30 min内染色力最强。 经过对发热患者进行涂片镜检， 也得出了许多心得体会， 对血片制作染色过程中的温度、染液浓度、染色时间的长短、及染液浓度的配制和时间的相关性等方面的技巧有了肯定的驾驭。因此， 在全省的疟疾防
8、治工作中本县具备了强有力的技术支持， 建立了健全的防疟队伍， 从而为早日实现中国消退疟疾行动安排中的目标要求， 尽每一位医务工作者最大的努力。 参考文献 1于立勇， 鲁玲， 周映儿. 637例发热病人疟原虫片复检质量分析.中国地方病防治杂志， 2022， 29：276-277. 2谢轶青， 邹永根， 冷瑞珍， 等.血涂片检查疟原虫的质量评价.中国热带医学， 2004， 4：760-761. 3张小萍， 金小林， 高琪， 等.江苏省不同地区的疟疾监测.中国寄生虫防治杂志， 2001， 14：84-86. 4吴英松， 李明， 董文其， 等.恶性疟原虫乳酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定.中国寄生虫学与寄生虫病杂志， 2001， 19：80-83. 5李锦辉， 黄亚铭， 郭传坤， 等.广西三个虐区县抗疟措施质量与效果调查.中国热带医学， 2022， 7：590-592. 收稿日期：2022-01-12 第5页 共5页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页第 5 页 共 5 页