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1、ICS 65.020.20 B05DB 14山 西 省 地 方 标 准DB 14/ T9132014绿叶葱类蔬菜中多菌灵、吡虫啉等农药 多残留的测定 高效液相色谱法1112- 30 实施2014 -2014 - 30 发布山 西 省 质 量 技 术 监 督 局发 布DB14/ T 9132014目 次前言 III1 范围 12 规范性引用文件 13 原理 14 试剂和材料 15 仪器设备 26 分析步骤 26.1 试样制备 26.2 提取 36.3 净化 36.4 色谱参考条件 36.5 色谱分析 47 结果计算 48 精密度 49 色谱图 4附录 A (资料性附录) 6IDB14/ T 91
2、32014前 言本标准按GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由山西省农业厅提出并归口。本标准起草单位：山西省农产品质量安全检验监测中心、运城市农产品质量安全检验监测中心。本标准主要起草人：阎会平、苏菊萍、吴铁茜、王洁莲、董燕飞、张璇、张建新、张子伦、田子卿、 常宏、何锦惠。IIDB14/ T 9132014绿叶葱类蔬菜中多菌灵、吡虫啉等 7 种农药残留量的测定 高效液相 色谱法1 范围本标准规定了用高效液相色谱测定绿叶葱类蔬菜中多菌灵、吡虫啉、嘧霉胺、除虫脲、灭幼脲、辛 硫磷和阿维菌素七种农药残留量的原理、试剂和材料、仪器设备、操作步骤、结果计算和精密度。本标准适用于韭菜、葱、蒜
3、薹等绿叶葱类蔬菜样品中七种农药残留量的测定。 本标准方法检出限为0.006 mg/kg0.07 mg/kg,详见附录A。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复性与 再现性的基本方法GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8855 新鲜蔬菜和水果的取样方法3 原理样品中多菌灵、吡虫啉等七种农药用乙腈提取，提取溶液经氨基柱净化，使用带紫外检测器的
4、高效 液相色谱仪进行检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682中规定的一级水。4.1 乙腈，色谱纯。4.2 甲醇，色谱纯。4.3 二氯甲烷，色谱纯。4.4 氯化钠，140烘烤 4h。4.5 固相萃取柱，氨基柱（Aminopropy），6 mL，500 mg。4.6 滤膜，0.2 m,有机溶剂膜。4.7 铝箔。4.8 N-丙基乙二胺，粒径（40m -60 m）。1DB14/ T 91320144.9 石墨化碳黑，粒径（120m -400 m）。4.10 农药标准品见表 1：表 1 7 种农药标准品序号中文名英文名浓
5、度（mg/L）溶剂1吡虫啉imidacloprid1000甲醇2多菌灵carbendaziml1000甲醇3嘧霉胺pyr imethanil1000甲醇4除虫脲diflubenzuron1000甲醇5灭幼脲chlorbenzuron1000甲醇6辛硫磷phoxim1000甲醇7阿维菌素avermectin1000甲醇4.11 农药标准溶液配制4.11.1 单一农药标准溶液准确移取一定量（精确至0.01 mL）的农药标准溶液,用甲醇做溶剂，配制成100 mg/L的单一农药标 准储备液，贮存在-18以下的冰箱中。使用时根据各农药在对应检测器上的响应值，吸取适量的标准 储备液，用甲醇+水=3+2稀释
6、配制成所需的标准工作液。4.11.2 农药混合标准溶液根据各农药在仪器上的响应值，逐一准确吸取一定体积的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中， 用甲醇稀释至刻度配制成农药混合标准储备液，使用前用甲醇+水=3+2稀释成所需质量浓度的标准工作 液。5 仪器设备5.1 高效液相色谱仪，可进行梯度淋洗，配紫外检测器。5.2 粉碎机。5.3 匀浆机。5.4 氮吹仪。5.5 旋转蒸发仪。5.6 分析天平。5.7 离心机。6 分析步骤6.1 试样制备2DB14/ T 9132014按GB/T 8855抽取蔬菜样品，取可食部分，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入粉碎机粉碎，制成 待测样。放入分装容器中，于-20-
7、16条件下保存，备用。6.2 提取称取25.00 g试样放入烧杯中，加入50.0 mL乙腈，在高速匀浆机中以 (9000 r/min10000 r/min） 匀浆2 min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5 g7 g氯化钠的具塞量筒中，收集滤液40 mL50 mL,密闭， 剧烈振摇1min,在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。6.3 净化从具塞量筒中吸取20.0 mL上层乙腈溶液，加入有N-丙基乙二胺0.1 g和石墨化碳黑0.1 g的离心管 中，以5000 r/min离心5 min，移取上清液10.00 mL在40 下旋蒸至近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷= （5+95）溶解残渣，盖
8、上铝箔，待净化。将氨基柱用5.0 mL甲醇+二氯甲烷= 5+95预淋洗条件化，当溶 剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化溶液，用指形管收集洗脱液，用6.0 ml甲醇+二氯甲 烷= 5+95洗杯后过柱，并重复一次。将指形管置于50 氮吹仪上，氮吹蒸发至近干，用甲醇+水=3+2 准确定容至2.50 mL，在混合器上混匀后，用0.2 m滤膜过滤，待测。6.4 色谱参考条件6.4.1 色谱柱：C18 柱（3.0 mmI.D250 mm，5 m）或相当者。6.4.2 柱温：40 。6.4.3 溶剂梯度及流速见表 2：表 2 溶剂梯度及流速时间 min水%甲醇%乙腈%流速 mL /min0.006
9、524.510.50.710.006524.510.50.712.003049.021.00.722.003049.021.00.724.001063.027.00.733.001063.027.00.735.006524.510.50.76.4.4 检测波长见表 3：3DB14/ T 9132014表 3 各时间段检测波长时间 min检测波长 nm0.02755.024510.027518.025421.528028.02456.5 色谱分析分别吸取20.0 L标准混合溶液和净化后的样品溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液 峰面积与标准溶液峰面积比较定量。7 结果计算试样中被测农药残
10、留量以质量分数w计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示,按公式（1）计算。w = P （1）式中: 标准溶液中农药的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； A 样品溶液中被测农药的峰面积；AS 农药标准溶液中被测农药的峰面积；V1 提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；V2 吸取用于检测的提取溶剂的总体积，单位为毫升（mL）； V3 样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；M 试样的质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字，当结果大于1 mg/kg时保留三位有效数字。8 精密度本标准精密度数据是按照GB/T 6379.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值以95%的可信度来计 算。本方法的精
11、密度数据参见附录A。9 色谱图4DB14/ T 9132014标准溶液色谱图韭菜加标样品色谱图蒜苔加标样品色谱图大葱加标样品色谱图1吡虫啉；2多菌灵；3嘧霉胺；4除虫脲；5灭幼脲 ；6辛硫磷；7阿维菌素5DB14/ T 9132014附录 A(资料性附录)从实验室间试验结果得到的统计数据 表 A.1 七种农药检测参考数据序号中文名英文名保留时间 min检出限 mg/kg1吡虫啉imidacloprid4.640.012多菌灵carbendaziml6.720.073嘧霉胺pyr imethan il16.960.0064除虫脲diflubenzuron19.010.045灭幼脲chlorben
12、zuron19.900.036辛硫磷phoxim22.300.057阿维菌素avermectin29.590.01表 A.2 七种农药精密度数据表（单位 mg/kg）序号农药名称质量 浓度重复性 限 r再现性 限 R质量 浓度重复性 限 r再现性 限 R质量 浓度重复性 限 r再现性 限 R1吡虫啉0.050.00470.0150.10.0150.0171.00.0170.0182多菌灵0.10.0180.0190.50.0160.021.00.0180.0183嘧霉胺0.050.0130.0130.10.0180.0191.00.0180.0194除虫脲0.050.00360.00430.10.00340.00361.00.00370.00455灭幼脲0.050.2920.340.10.280.311.00.290.326辛硫磷0.050.0150.0180.10.0190.021.00.0180.027阿维菌素0.050.0120.0190.10.00820.0181.00.00940.018_6