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1、第1页血红蛋白含有四条肽链血红蛋白含有四条肽链,每条肽链围绕一个每条肽链围绕一个亚铁亚铁血红素基团，血红素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二氧一分子氧或一分子二氧化碳，化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而呈而呈红色。红色。第2页课题课题3 3 血红蛋白提取和分离血红蛋白提取和分离专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术第3页一、基础知识一、基础知识:学生活动学生活动1:1:1 1、分离生物大分子基本思绪是什么？、分离生物大分子基本思绪是什么？2 2、不一样蛋白质特征在哪些方面存在差异？、不一样蛋白质特征在哪些方面存在差异？3 3、本课题我们将利用血红蛋白与
2、杂质蛋白哪、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面差异进行提纯？方面差异进行提纯？4 4、为何不用鸡血红细胞而用人血红细胞作为、为何不用鸡血红细胞而用人血红细胞作为试验材料？试验材料？5 5、用什么方法分离相对分子质量不一样蛋白质、用什么方法分离相对分子质量不一样蛋白质？第4页一、一、基础知识基础知识-蛋白质提取和分离原理蛋白质提取和分离原理 蛋白质提取与分离依据蛋白质物理化学性质：蛋白质提取与分离依据蛋白质物理化学性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。亲和力等千差万别。提取提取分离分离方法方法凝胶色谱法凝胶色谱法
3、 凝胶电泳法凝胶电泳法 第5页（1 1）原理：）原理：（2 2）材料）材料大分子经过多孔凝胶颗粒间隙，旅程短，流动快；大分子经过多孔凝胶颗粒间隙，旅程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒内部，旅程长，流动慢。小分子穿过多孔凝胶颗粒内部，旅程长，流动慢。多孔性多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。多孔性多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。(一一)凝胶色谱法凝胶色谱法第6页（3 3）分离过程）分离过程 混合物混合物上上 柱柱洗洗脱脱大分子流动快大分子流动快小分子流动慢小分子流动慢收收 集集大分子大分子收收 集集小分子小分子 洗脱：从色谱柱上端不停注入缓冲液，洗脱：从色谱柱上端不停注入缓冲液，促使蛋白质分子差速
4、流动。促使蛋白质分子差速流动。(一一)凝胶色谱法凝胶色谱法第7页(一一)凝胶色谱法凝胶色谱法第8页 凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：1 1、什么是凝胶？、什么是凝胶？2 2、什么是凝胶色谱法？、什么是凝胶色谱法？学生活动学生活动2:2:3、凝胶色谱法原理是什么？、凝胶色谱法原理是什么？4、请用自己话总结出凝胶色谱法分离相、请用自己话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不一样蛋白质详细过程。对分子质量不一样蛋白质详细过程。第9页第10页1 1、什么是缓冲液？、什么是缓冲液？2 2、缓冲液作用是什么？缓冲液作用是什么？学生活动学生活动3:3:3 3、缓冲液是怎样配制？你所学过人体缓
5、冲液是怎样配制？你所学过人体血液缓冲物质有哪些？血液缓冲物质有哪些？4 4、本试验加是什么缓冲液？为何要加本试验加是什么缓冲液？为何要加缓冲液？缓冲液？（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液第11页由弱酸和对应强碱弱酸盐组成。由弱酸和对应强碱弱酸盐组成。如如H H2 2COCO3 3/NaHCO/NaHCO3 3，醋酸，醋酸/醋酸钠，醋酸钠，NaHNaH2 2POPO4 4/Na/Na2 2HPOHPO4 4等等缓冲溶液洗脱剂缓冲溶液洗脱剂组成：组成：配制：配制：作用：作用：调整缓冲剂百分比，可配制不一样调整缓冲剂百分比，可配制不一样pHpH缓冲液。缓冲液。抵制外界酸碱对溶液抵制外界酸碱对溶液pHp
6、H干扰而保持干扰而保持 pHpH稳定。稳定。（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液第12页1 1、什么是电泳？、什么是电泳？2 2、影响电泳迁移速度原因有哪些？影响电泳迁移速度原因有哪些？学生活动学生活动4:4:4 4、电泳分离各种分子原理是什么？、电泳分离各种分子原理是什么？（三）、电泳（三）、电泳3 3、怎样消除电荷对电泳迁移速度影响？怎样消除电荷对电泳迁移速度影响？5 5、请描述电泳过程？、请描述电泳过程？第13页2 2凝胶电泳法：凝胶电泳法：（1 1）原理：）原理：不一样蛋白质带电性质、电量、形状和大小不一样，不一样蛋白质带电性质、电量、形状和大小不一样，在电场中受到作用力大小、方向、阻力不
7、一样，在电场中受到作用力大小、方向、阻力不一样，造成不一样蛋白质在电场中运动方向和运动速度不造成不一样蛋白质在电场中运动方向和运动速度不一样。一样。影响蛋白质分子运动速度原因影响蛋白质分子运动速度原因(三三)电泳电泳1.1.电泳概念电泳概念指带电粒子在电场作用下发生迁移过程指带电粒子在电场作用下发生迁移过程.第14页影响蛋白质分子运动速度原因影响蛋白质分子运动速度原因决定决定运动方向运动方向形成形成库仑力库仑力形成形成阻力阻力决定决定运动速率运动速率电荷性电荷性质质电荷量电荷量分子形分子形状状分子大小第15页在一定在一定pHpH下，使蛋白质基团带上正电或负电；下，使蛋白质基团带上正电或负电；加
8、入带负电荷多加入带负电荷多SDSSDS，形成，形成“蛋白质蛋白质SDSSDS复合复合物物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。（2 2）分离方法：）分离方法：（3 3）分离过程：）分离过程：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。(三三)电泳电泳第16页电泳检测结果电泳检测结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳第17页二、试验操作二、试验操作 蛋白质提取和分离普通分为四步：蛋白质提取和分离普通分为四步：（1 1）样品处理：包含洗涤红细胞；血）样品处理：包含洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心分离等操作搜集到红蛋白释放；离心分离等操作搜集
9、到血红蛋白溶液。血红蛋白溶液。（2 2）粗分离：透析除去分子较小杂质。）粗分离：透析除去分子较小杂质。（3 3）纯化：经过凝胶色谱法将分子量）纯化：经过凝胶色谱法将分子量较大杂质蛋白质除去。较大杂质蛋白质除去。（4 4）纯度判定：经过聚丙烯酰胺凝胶）纯度判定：经过聚丙烯酰胺凝胶电泳判定。电泳判定。第18页（一）样品处理（一）样品处理1 1、红细胞洗涤：、红细胞洗涤：目标是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠预防血目标是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠预防血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。黄色血浆；用生理盐水洗涤。2 2、血红蛋白释放：、血红
10、蛋白释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放3 3、分离血红蛋白溶液：、分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。液漏斗分出红色透明液体。4 4、透析：、透析：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PHPH为为7.07.0）透析。）透析。第19页样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度判定纯度判定 血液组成成份血液组成成份 1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞 2.释放血红蛋白释放血红蛋白 3.分离血红蛋白分离血红蛋白 4.透析血红蛋白透析血红蛋白二、试验操作
11、二、试验操作第20页血液组成成份血液组成成份阅读思索：阅读思索：1.1.血液由血液由_和和_ _两部分组成。两部分组成。2.2.血细胞中血细胞中_细胞数量最多，红细胞含量细胞数量最多，红细胞含量最高有机化合物是最高有机化合物是_。3.3.该化合物是由该化合物是由 _和和_组成，其中每个亚基中都含有一个能与组成，其中每个亚基中都含有一个能与O O2 2和和COCO2 2结合结合_基团。基团。血浆血浆血细胞血细胞红细胞红细胞血红蛋白血红蛋白2条条-肽链肽链2条条-肽链肽链 亚铁血红素亚铁血红素返回返回第21页1.1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞阅读思索：洗涤目标是什么？阅读思索：洗涤目标是什么？洗
12、涤过程：洗涤过程：血液血液100mL100mL3g3g柠檬酸钠柠檬酸钠低速离心低速离心2 min2 min红细胞红细胞血血 浆浆吸出血浆吸出血浆红细胞红细胞5倍体积生理盐水倍体积生理盐水搅拌搅拌10min重复洗涤重复洗涤3 3次，直至上清液没有黄色次，直至上清液没有黄色第22页采集得到鸡血第23页首次离心后结果首次离心后结果第24页3次洗涤后结果返回返回第25页2.2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思索：阅读思索：1.释放血红蛋白过程中，在洗涤好红细胞加入了哪释放血红蛋白过程中，在洗涤好红细胞加入了哪些物质？些物质？2.为了加速释放过程，采取了什么办法？为了加速释放过程，采取了什么办法？目标分析
13、：目标分析：蒸馏水作用是蒸馏水作用是_。加入甲苯作用是加入甲苯作用是_。充分搅拌目标是充分搅拌目标是_。使红细胞大量吸水胀裂使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞细胞膜溶解红细胞细胞膜加速红细胞破裂加速红细胞破裂第26页(2)(2)血红蛋白释放：血红蛋白释放：加蒸馏水到原血液体积，再加加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积甲苯体积甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌，置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟（加速细胞破裂）分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红细胞破裂释放出血红蛋白。蛋白。第27页磁力搅拌器返回返回第28页3.3.分离血红蛋白分离血红蛋白分离过程分离过程红细胞红细胞混合液混合液高速离心高速离
14、心10min 离心离心管管滤纸滤纸过滤过滤脂类物质脂类物质烧杯烧杯第29页(3)(3)分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管将搅拌好混合液转移到离心管内，以内，以r/minr/min速度离心速度离心10 min10 min。试管中溶试管中溶液层次：液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层（无色层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第透明）；第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第淀层（白色薄层固体）；第3 3层（中下层）：层（中下层）：血红蛋白水溶液层（红色透明液体）；第血红蛋白水溶液层（红色透明液体）；第4 4层（最下层
15、）：杂质沉淀层（暗红色）。层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层红色于分液漏斗中静置片刻后，分出下层红色透明液体。透明液体。第30页甲苯层甲苯层甲苯层甲苯层（无色透明无色透明无色透明无色透明）白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体红色透明液体红色透明液体杂质沉淀层杂质沉淀层杂质沉淀层杂质沉淀层（暗红色暗红色暗红色暗红色）试管中溶液层次试管中溶液层次返回返回第31页4.4.透析血红蛋白透析血红蛋白20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液1mL1mL第32页利用透析袋
16、透析第33页透析过程透析过程返回返回第34页纯化凝胶色谱操作纯化凝胶色谱操作1.1.凝胶色谱柱制作：凝胶色谱柱制作：2.2.凝胶色谱柱装填：凝胶色谱柱装填：教材图教材图5193.3.样品加入和洗脱样品加入和洗脱第35页（二）凝胶色谱操作（二）凝胶色谱操作（1）凝胶色谱柱制作：）凝胶色谱柱制作：取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米玻璃厘米玻璃管，管，两端需用砂纸磨平。两端需用砂纸磨平。底塞制作：底塞制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安安装移液管头部装移液管头部覆盖尼龙网，再用覆盖尼龙网，再用100100目尼龙纱包好，插到玻目尼龙纱包好，插到玻璃管璃管一一端端。注意事项注意事项注意事项
17、注意事项：底塞中插入玻璃管上部不得超出橡皮底塞中插入玻璃管上部不得超出橡皮塞凹穴底面，不然难以铺实尼龙网，还会造成液体残留，蛋塞凹穴底面，不然难以铺实尼龙网，还会造成液体残留，蛋白质分离不彻底。白质分离不彻底。顶塞制作：顶塞制作：打孔打孔安装玻璃管安装玻璃管。组装：组装：将上述三者按对应位置组装成一个整体将上述三者按对应位置组装成一个整体。安装其它从属结安装其它从属结构。构。第36页装配好凝胶柱第37页返回第38页材料：交联葡聚糖凝胶材料：交联葡聚糖凝胶G-75G-75；20mmol/L20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液装填装填:2.2.凝胶色谱柱装填：凝胶色谱柱装填：步骤步骤操作要求操作要
18、求立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h洗涤平衡洗涤平衡一次性迟缓倒入；轻轻敲打一次性迟缓倒入；轻轻敲打装填悬浮液装填悬浮液凝胶颗粒洗脱液凝胶颗粒洗脱液沸水浴沸水浴 凝胶颗粒蒸馏水凝胶颗粒蒸馏水充分溶胀充分溶胀依据色谱柱体积计算凝胶用量依据色谱柱体积计算凝胶用量色谱柱垂直固定在支架上色谱柱垂直固定在支架上配制悬浮液配制悬浮液计算称量凝胶计算称量凝胶固定色谱柱固定色谱柱第39页（2 2）凝胶色谱柱装填）凝胶色谱柱装填凝胶选择：凝胶选择：凝胶选择：凝胶选择：A A、材料：、材料：交联葡聚糖凝胶（交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表、代表意义意义：“G G”表示凝胶交
19、联程度，膨胀程度及分离范围表示凝胶交联程度，膨胀程度及分离范围。7575表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。凝胶前处理：凝胶前处理：凝胶前处理：凝胶前处理：配制凝胶悬浮液：配制凝胶悬浮液：计算并称取一定量凝胶计算并称取一定量凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。凝胶色谱柱装填方法：凝胶色谱柱装填方法：凝胶色谱柱装填方法：凝胶色谱柱装填方法：A A、固定：、固定：将色谱柱装置固定在支将色谱柱装置固定在支架上。架上。B B、装填：、装填：将凝胶悬浮液一次性装填入色谱柱内，装将凝
20、胶悬浮液一次性装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。注意：注意：1 1、凝胶装、凝胶装填时尽可能紧密，以降低凝胶颗粒之间空隙。填时尽可能紧密，以降低凝胶颗粒之间空隙。2 2、装填凝胶、装填凝胶柱时不得有气泡存在：柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质洗脱因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质洗脱次序，降低分离效果次序，降低分离效果。第40页 洗涤平衡：洗涤平衡：装填完成后，装填完成后，马上用缓冲液洗脱瓶，在马上用缓冲液洗脱瓶，在50cm50cm高操作压下，用高操作压下，用300ml300ml20mmol/l20mmol/l磷酸缓冲液磷酸缓冲液
21、（pHpH为为7.07.0）充分洗涤平衡充分洗涤平衡1212小时小时。注意：注意：1 1、洗脱液、洗脱液面不要低于凝胶表面，不然面不要低于凝胶表面，不然可能有气泡混入，影响液体可能有气泡混入，影响液体在柱内流动与最终生物大分在柱内流动与最终生物大分子物质分离效果。子物质分离效果。2 2、不能、不能发生洗脱液流干，露出凝胶发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒现象颗粒现象。第41页3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱 调整缓冲液面：调整缓冲液面：调整缓冲液面：调整缓冲液面：打开下端出口，使柱内缓冲液迟缓下打开下端出口，使柱内缓冲液迟缓下降到与凝胶面平齐，关闭出口。降到与凝胶面平齐，关闭出口。滴加透析样品：
22、滴加透析样品：滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱顶端，滴加样品加到色谱柱顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁围绕移动加样，同时注意不要破样品时，吸管管口贴着管壁围绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。坏凝胶面。样品渗透凝胶床：样品渗透凝胶床：样品渗透凝胶床：样品渗透凝胶床：加样后打开下端出口，使样品渗透加样后打开下端出口，使样品渗透凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。洗脱：洗脱：洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 pH=7.0 20mmol/l20mmol/l磷酸缓冲液到适当高磷酸缓冲液到适当高度，连
23、接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。搜集：搜集：搜集：搜集：待红色蛋白质靠近色谱柱底端时，用试管搜集待红色蛋白质靠近色谱柱底端时，用试管搜集流出液，每流出液，每5ml5ml搜集一试管，连续搜集搜集一试管，连续搜集。（在分离过程中，。（在分离过程中，假如红色区带均匀一致移动，说明色谱柱制作成功）假如红色区带均匀一致移动，说明色谱柱制作成功）注意：注意：注意：注意：正确加样操作：正确加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁围绕移动。、使吸管管口沿管壁围绕移动。第42页3.3.样
24、品加入和洗脱样品加入和洗脱第43页3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱注意：注意：注意：注意：正确加样操作是：正确加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。、贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁围绕移动。、使吸管管口沿管壁围绕移动。第44页搜集得到纯化后血红蛋白搜集得到纯化后血红蛋白第45页注意事项注意事项1.1.红细胞洗涤：红细胞洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2.2.凝胶预处理：凝胶预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡3.3.色谱柱装填：色谱柱装填：装填尽可能紧密，
25、降低颗粒间隙；无气泡；洗脱装填尽可能紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。液不能断流。4.4.色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。为何？为何？第46页 观察你处理血液样品离心后观察你处理血液样品离心后是否分层是否分层（见教（见教科书图科书图5-185-18），），假如分层不显著，可能是洗涤假如分层不显著，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白原因。次数少、未能除去血浆蛋白原因。另外，离心另外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净红细胞，影响后续血一同沉淀，也得不到纯净红细胞，影响
26、后续血红蛋白提取纯度。红蛋白提取纯度。三、试验结果分析与评价三、试验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品处理？你能描、你是否完成了对血液样品处理？你能描述处理后样品发生了哪些改变吗？述处理后样品发生了哪些改变吗？第47页三、试验结果分析与评价三、试验结果分析与评价2 2、你装填凝胶色谱柱是否有气泡产生？你色、你装填凝胶色谱柱是否有气泡产生？你色谱柱装填得成功吗？你是怎样判断？谱柱装填得成功吗？你是怎样判断？因为凝胶是一个半透明介质，所以能够在凝因为凝胶是一个半透明介质，所以能够在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直日光灯，检验凝胶是胶柱旁放一支与凝胶柱垂直日光灯，检验凝胶是否装填得均匀。另外，
27、还能够加入大分子有色物否装填得均匀。另外，还能够加入大分子有色物质，比如蓝色葡聚糖质，比如蓝色葡聚糖或红色葡聚糖，观察色带或红色葡聚糖，观察色带移动情况。假如色带均匀、狭窄、平整，说明凝移动情况。假如色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱性能良好。假如色谱柱出现纹路或是气胶色谱柱性能良好。假如色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。新装柱。第48页 假如凝胶色谱柱装填得很成功、分离假如凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确话，能清楚地看到血红蛋白红色区操作也正确话，能清楚地看到血红蛋白红色区带均匀、狭窄、平整，伴随洗脱液迟缓
28、流出；带均匀、狭窄、平整，伴随洗脱液迟缓流出；假如红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离效假如红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离效果不好，这与凝胶色谱柱装填相关。果不好，这与凝胶色谱柱装填相关。3 3、你能观察到蛋白质分离过程中，红色区、你能观察到蛋白质分离过程中，红色区带移动吗？请描述红色区带移动情况，并据此判带移动吗？请描述红色区带移动情况，并据此判断分离效果？断分离效果？三、试验结果分析与评价三、试验结果分析与评价第49页知识总结知识总结血血红红蛋蛋白白提提取取和和分分离离蛋白质分子差异性蛋白质分子差异性凝胶色谱法凝胶色谱法原原 理理分离过程分离过程凝胶电泳法凝胶电泳法缓冲溶液缓冲溶液组组
29、成成作作 用用蛋白质蛋白质提取分离提取分离样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度判定纯度判定第50页教学反馈教学反馈 1凝胶色谱法是依据（凝胶色谱法是依据（）分离蛋白质有效方法。）分离蛋白质有效方法。A分子大小分子大小B相对分子质量大小相对分子质量大小C带电荷多少带电荷多少D溶解度溶解度2缓冲液作用是：在一定范围内，抵制外界影响来维持缓冲液作用是：在一定范围内，抵制外界影响来维持（）基本不变。）基本不变。A温度温度BpHC渗透压渗透压D氧气浓度氧气浓度3电泳是指带电粒子在电场作用下向着与其所带电荷（电泳是指带电粒子在电场作用下向着与其所带电荷（）电极移动。）电极移动。A相同相同B相反相
30、反C相对相对D相向相向4.哺乳动物和人成熟红细胞中（哺乳动物和人成熟红细胞中（）与氧气运输相关。）与氧气运输相关。A血红蛋白血红蛋白B肌红蛋白肌红蛋白C肌动蛋白肌动蛋白D肌球蛋白肌球蛋白BBBA第51页5 5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）含量最多。）含量最多。A A白细胞白细胞 B B血小板血小板 C C红细胞红细胞 D D淋巴细胞淋巴细胞6 6为预防血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为预防血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（）。）。A.NaCl B.A.NaCl B.甲苯甲苯 C.C.蒸馏水蒸馏水 D.D.柠檬酸钠柠檬酸钠7 7将搅拌好混
31、合液转移到离心管中，离心后，能将搅拌好混合液转移到离心管中，离心后，能够显著看到试管中溶液分为够显著看到试管中溶液分为4 4层，其中第层，其中第3 3层是层是（）A A无色透明甲苯层无色透明甲苯层 B B脂溶性物质沉淀层脂溶性物质沉淀层 C C血红蛋白水溶液血红蛋白水溶液 D D其它杂质暗红色沉淀物其它杂质暗红色沉淀物CDC第52页练习巩固练习巩固1 1、伴随人类跨入蛋白质组时代，对蛋白、伴随人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质研究和应用越来越深入，首先要做一质研究和应用越来越深入，首先要做一步是步是A A 搞清各种蛋白质空间结构搞清各种蛋白质空间结构B B 搞清各种蛋白质功效搞清各种蛋白质功效C
32、C 搞清各种蛋白质合成过程搞清各种蛋白质合成过程D D 取得高纯度蛋白质取得高纯度蛋白质第53页2 2、用凝胶色谱法分离蛋白质过程中，关、用凝胶色谱法分离蛋白质过程中，关于蛋白质叙述，正确是于蛋白质叙述，正确是A A 相对分子质量较小蛋白质行程大于相相对分子质量较小蛋白质行程大于相对分子质量较大蛋白质对分子质量较大蛋白质B B 相对分子质量较小蛋白质行程小于相相对分子质量较小蛋白质行程小于相对分子质量较大蛋白质对分子质量较大蛋白质C C 相对分子质量较小蛋白质行程等于相相对分子质量较小蛋白质行程等于相对分子质量较大蛋白质对分子质量较大蛋白质D D 二者根本无法比较二者根本无法比较第54页3 3
33、、使用、使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不一样聚丙烯酰胺电泳过程中，不一样蛋白质电泳迁移率完全取决于蛋白质电泳迁移率完全取决于A A 电荷多少电荷多少 B B 分子大小分子大小C C 肽链多少肽链多少 D D 分子形状差异分子形状差异4 4、在采血容器中加入柠檬酸钠目标是、在采血容器中加入柠檬酸钠目标是A A 调整调整pH B pH B 维持红细胞能量供给维持红细胞能量供给C C 预防微生物生长预防微生物生长 D D 预防血液凝固预防血液凝固第55页5 5、一分子血红蛋白最多可携带、一分子血红蛋白最多可携带 O O2 2分子数和分子数和COCO2 2分子数分别是分子数分别是A 4A 4、2 B 42 B 4、4 4 C 2C 2、1 D1 D、1 1、1 16 6、记住样品处理中血红蛋白溶液离心后分、记住样品处理中血红蛋白溶液离心后分层次序层次序自上而下自上而下是：是：有有机溶剂机溶剂-脂脂类物质类物质-血血红蛋白溶液红蛋白溶液-红红细胞破碎物沉淀细胞破碎物沉淀第56页