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1、2.2第三课时 动物细胞融合技术和单克隆抗体一、动物细胞融合技术1.关于动物细胞融合的说法错误的是()A.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的多核细胞称为杂交细胞B.动物细胞融合已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种的重要手段C.常用于诱导动物细胞融合的手段有聚乙二醇融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等D.细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能2.动物细胞融合和植物原生质体融合的基本原理相同,下列诱导细胞融合的方法是动物细胞融合特有的是()A.PEG融合法B.电融合法C.高Ca2+高pH融合法D.灭活病毒诱导法二、单克隆抗体的制备过程3.用a表示骨
2、髓瘤细胞,b表示B淋巴细胞,则单克隆抗体制备过程中两次筛选的目的分别为()A.从a、aa、ab、bb、b中筛选出a、aa、ab;从a、aa、ab中筛选出abB.从a、aa、ab、bb、b中筛选出ab、bb、b;从ab、bb、b中筛选出abC.从a、aa、ab、bb、b中筛选出ab;从ab中筛选出能产生特定抗体的abD.从a、aa、ab、bb、b中筛选出aa;从aa中筛选出能大量增殖的aa4.如图为单克隆抗体的制备流程示意图。下列叙述错误的是()A.甲是从已免疫的小鼠脾脏细胞中获得的致敏 B 淋巴细胞B.可用灭活的病毒诱导甲与骨髓瘤细胞融合C.乙为融合细胞,同时具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性D.表
3、示筛选出能产生特异性抗体的细胞5.青蒿素主要用于恶性疟疾的症状控制以及耐氯喹虫株的治疗。为了快速检测青蒿素,科研人员利用细胞工程技术制备了抗青蒿素的单克隆抗体,其基本操作过程如图。下列叙述错误的是()A.过程注射相应抗原后即可从小鼠脾脏中提取细胞甲B.过程可用灭活的病毒诱导融合,过程若在体内进行则操作更简单C.过程常使用选择培养基,过程常使用抗原与抗体特异性结合D.过程的筛选方法不同,细胞丙、丁遗传物质相同6.抗PD-L1单克隆抗体能与肿瘤细胞膜表面的PD-L1特异性结合,因而具有治疗某些癌症的作用。如图表示制备抗PD-L1单克隆抗体的部分流程。下列叙述不正确的是()A.分离B淋巴细胞前,需要
4、对小鼠注射PD-L1抗原B.经PEG诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞C.图中细胞群ad既能大量增殖,又能产生抗体D.图中细胞群a可用于大规模培养,生产抗PD-L1单克隆抗体7(2023烟台模拟)新冠病毒表面的刺突蛋白可特异性结合宿主细胞上的受体CD147，从而介导新冠病毒入侵宿主细胞。单克隆抗体可结合刺突蛋白，阻断刺突蛋白与CD147结合，阻止病毒继续感染新的细胞。下列叙述错误的是()A单克隆抗体的制备过程至少需要两次筛选，筛选的方法不同、目的相同B克隆化培养中用刺突蛋白筛选出的杂交瘤细胞可用于产生单克隆抗体C给重症新冠肺炎患者注射针对刺突蛋白的单克隆抗体是一种有效的治疗手段D参与构成抗体药物偶
5、联物的单克隆抗体可特异性识别抗原，从而起导向作用8(2022山东)如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是()A双抗可同时与2种抗原结合B利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞C筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原D同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞三、单克隆抗体的应用9.产生专一抗体的杂交瘤细胞,通过大规模培养,就可以获取大量的单克隆抗体。下列有关这项技术的分析,错误的是()A.单克隆抗体的优点是能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备B.单克隆抗体最广泛的
6、用途是作为“生物导弹”治疗癌症C.运用同位素标记的单克隆抗体可以定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病D.单克隆抗体的制备涉及动物细胞融合和动物细胞培养技术10.为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失的问题,研究者增加了一个步骤,除了抗原刺激之外,还用EBV(一种病毒颗粒)感染动物B淋巴细胞,并使之成为“染色体核型稳定”的细胞株。上述细胞株能够在HAT培养基中存活,但对乌本苷(Oua)敏感。如图为该实验操作示意图,下列相关分析不合理的是()A.杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降B.杂交瘤细胞还需要经过克隆化培养和抗体检测,经过多次筛选才能获得所需细胞C.骨髓瘤细胞无法在
7、HAT培养基中存活D.杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力11.科研人员制备能产生双抗体的双杂交瘤细胞的实验过程:先制备两种杂交瘤细胞,每种杂交瘤细胞产生的抗体与抗原的结合情况如图1、2所示。然后使二者融合,经过筛选最终得到可以产生双抗体(同时抗、两种抗原,图3)的双杂交瘤细胞。抗体由两条重链和两条轻链组成,重链和轻链均分为恒定区和可变区,两条重链依赖于A1或B1进行组装(A1与B1相同),重链与轻链的组装依赖于恒定区A2、a或B2、b(a与b相同)。下列叙述错误的是()A.三种杂交瘤细胞的制备均可使用灭活病毒作为诱导剂B.三种杂交瘤细胞的筛选均需要进行克隆化培养和抗体检测C.双杂交瘤细胞
8、产生的抗体可与两种抗原同时发生特异性结合D.图3中的1、2、3、4、5、6可以分别是A2、B2、a、b、12.EV71是引发手足口病的一种人肠道病毒,VP1和VP2是EV71的两种外壳蛋白。为制备抗EV71的单克隆抗体,科研人员用小鼠进行实验,结果如图所示。下列说法错误的是()A.从EV71免疫的小鼠体内获得的不是单一抗体B.制备抗EV71单克隆抗体时,选用VP2免疫小鼠效果最佳C.制备单克隆抗体时需在已免疫小鼠的脾中获取B淋巴细胞D.抗EV71的单克隆抗体能够阻断病毒入侵正常细胞,以减弱对机体的毒害13(2023河北廊坊高三模拟) 抗体药物偶联物(ADC)通过采用特定技术将具有生物活性的小分
9、子药物连接到能特异性识别肿瘤细胞的单克隆抗体上，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC的结构及其发挥作用的机理如图所示，下列有关说法错误的是()A单克隆抗体制备过程中通常将免疫后得到的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合B用96孔板培养和多次筛选杂交瘤细胞后，在体外大规模培养可获得单克隆抗体CADC通过抗体与细胞膜上的受体特异性结合，以主动运输的方式进入肿瘤细胞DADC在肿瘤细胞里被溶酶体裂解，释放药物，使肿瘤细胞死亡14人乳头瘤病毒(HPV)是一种DNA病毒，可诱发细胞癌变。抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生。以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程如图所示。下列叙述不
10、正确的是()A在HAT培养基上存活的杂交瘤细胞既能无限增殖又可以分泌抗体B单克隆抗体的特点是灵敏度高、特异性强，可以大量制备C可用HPV衣壳蛋白检测筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞D单克隆抗体制备过程涉及的生物学原理有细胞增殖和细胞膜的选择透过性15甘草酸是中药甘草中的主要活性成分，为了快速检测甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图1。图2是科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根培育抗鼓胀病的苜蓿新品种流程图(注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R6G可阻止线粒体的呼吸作用，二者有效抑制不同植物细胞正常代谢的临界浓度不同)。请回答下列问题：(1)
11、图1中过程常用_诱导法，该诱导剂不能用于植物细胞的融合。和过程为两种筛选过程，这两种筛选的目的分别是_和_。细胞丁的特性是_。(2)图2中过程可使用_等化学法，也可使用_等物理法。图中过程愈伤组织经过_形成再生植株，这一过程的原理是_。推测在融合后只有异源融合产物能够存活的原因是_。答案1.A2.D3.C4.C5.A6.B7.A8.D9.B10.D11.D12.B13.C14.D1-5ADCCA 6-10BADBD 11-14DBCD1.A动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞,A错误。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等(
12、教材第48页),C正确。细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能;同时这一技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种的重要手段(教材第48页),B、D正确。2.D灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合特有的方法,D符合题意。3.Ca表示骨髓瘤细胞,b表示B淋巴细胞,细胞融合后可能会产生5种类型的细胞,其中有两种没有融合的细胞,即a、b,两种自身融合细胞,即aa、bb,还有一种是两种细胞的融合细胞,即ab,第一次筛选是筛选出杂交瘤细胞ab,但并不是所有的杂交瘤细胞都能产生特定的抗体,第二次筛选是筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞ab。易错警示单克隆抗体制备中两次筛选的作用第一次
13、筛选时,在特定选择培养基上被筛选出的是杂交瘤细胞,被淘汰的有4种细胞未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B淋巴细胞自身融合细胞及骨髓瘤细胞自身融合细胞。第二次筛选时,需用抗体检测,筛选出的是能产生特定抗体的杂交瘤细胞。4.C题图分析:表示动物细胞融合过程,常用的方法有PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法等;表示筛选出能产生特异性抗体的细胞,B、D正确。甲是从已免疫的小鼠脾脏细胞中获得的B淋巴细胞,A正确。乙为融合细胞,筛选后的丙为杂交瘤细胞,其具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性,C错误。5.A过程注射相应抗原后,机体会产生免疫反应,产生具有免疫能力的B淋巴细胞后,才可以从小鼠脾脏中提取细胞甲,
14、A错误;过程是诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合,常用灭活的病毒,过程是提取单克隆抗体,可在体内进行,操作更简单,B正确;过程通常使用选择培养基筛选出杂交瘤细胞,过程通常使用抗体检测和克隆化培养,获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞,C正确;由选项C可知,过程的筛选方法不同,细胞丙、丁的遗传物质相同,D正确。6.B在分离B淋巴细胞前,需要对小鼠注射PD-L1抗原进行免疫,使小鼠产生已免疫的B淋巴细胞,A正确;经PEG诱导后融合的细胞用特定的选择培养基筛选得到的细胞为杂交瘤细胞,B错误;图中细胞群ad表示杂交瘤细胞,其特点是既能大量增殖,又能产生抗体,C正确;图中加入PD-L1抗原后,细胞群a处呈现阳性,
15、则细胞群a可用于大规模培养,生产抗PD-L1单克隆抗体,D正确。7.答案A解析单克隆抗体的制备至少需要两次筛选，第一次筛选是用选择培养基，得到杂交瘤细胞(去掉未融合的细胞以及自身融合的细胞)；第二次筛选是用抗原抗体特异性结合的原理，筛选出能够产生所需抗体的细胞群，因此两次筛选的方法和目的都不同，A项错误。刺突蛋白为新冠病毒表面的抗原，能与相应抗体发生特异性结合，因此克隆化培养中用刺突蛋白筛选出的杂交瘤细胞即为能大量增殖又能产生所需抗体的杂交瘤细胞，可用于生产单克隆抗体，B项正确。给重症新冠肺炎患者注射针对刺突蛋白的单克隆抗体后，单克隆抗体可与刺突蛋白结合，进而阻止新冠病毒表面的刺突蛋白与宿主细
16、胞上的受体CD147特异性结合，从而抑制新冠病毒入侵新的宿主细胞，因此是一种有效的治疗手段，C项正确。抗体与抗原能特异性结合，因此参与构成抗体药物偶联物的单克隆抗体可特异性识别抗原，从而起导向作用，D项正确。8.解析根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A项正确；根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物(特定抗原与特定抗体结合)运送至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B项正确；由于双抗是由两种不同的抗原制备的单克隆抗体重新偶联制成的，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来进行抗原抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C项正确；同时
17、注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D项错误。9.B单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备,因此被广泛用作诊断试剂(教材第50页),A正确,B错误;利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术,可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病(教材第50页),C正确。10.D若丢失的染色体上含有与抗体产生相关的基因,则杂交瘤细胞可能因染色体的丢失导致抗体产生能力下降,A正确;据题图可知,EBV转化细胞与骨髓瘤细胞融合后在添加Oua的HAT培养基上筛选,EBV转化细胞与骨髓瘤细胞均死亡,可推知骨髓瘤细胞无法在HAT培养基中
18、存活,C正确; EBV的作用是使B淋巴细胞“染色体核型稳定”,该杂交瘤细胞不具有持续产生抗EBV抗体的能力,D错误。11.D诱导动物细胞融合常用的方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等,因此三种杂交瘤细胞的制备均可使用灭活病毒作为诱导剂,A正确。根据单克隆抗体的制备过程可知,三种杂交瘤细胞的筛选均需要进行克隆化培养和抗体检测,B正确。图3抗体是双杂交瘤细胞产生的双抗体,可与两种抗原同时发生特异性结合,C正确。图3是双抗体,可变区的重链1和2对应A2或B2,若1是A2,则2为B2;根据图1、2信息可知:a与A2在可变区结合, b与B2在可变区结合,图3中3与1(A2)在可变区结合5,则3
19、对应a,5对应;4与2(B2)在可变区结合6,则4对应b,6对应,因此1、2、3、4、5、6分别对应A2、B2、a、b、,D错误。12.BEV71免疫的小鼠血清中的抗体不是单一抗体,判断依据是EV71免疫的小鼠血清可以结合EV71、VP1和VP2多种抗原,A正确;第3组血清抗体与EV71特异性结合强度较弱,则制备抗EV71单克隆抗体时,不能选用VP2免疫小鼠,B错误;制备单克隆抗体时需在已免疫小鼠的脾中获取B淋巴细胞,C正确;抗EV71的单克隆抗体与病毒特异性结合,能够阻断病毒入侵正常细胞,以减弱对机体的毒害,D正确。13C利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，杂交瘤细
20、胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体，A正确；单克隆抗体制备过程中至少经过两次筛选，一次是用特定的选择培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞，杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，即用96孔板培养和多次筛选杂交瘤细胞后，可获得既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，B正确；ADC通过胞吞的方式进入肿瘤细胞，溶酶体使其裂解，释放药物，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，C错误，D正确。14D单克隆抗体的制备过程主要运用的细胞工程技术包括动物细胞培养和动物细胞融合，原理依次是细胞增殖、细胞膜的流动性，D错误。15.答案(1)灭活病毒筛选出杂交瘤细胞筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞既能产生所需抗体又能无限增
21、殖(2)聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2高pH融合法离心法、电融合法再分化植物细胞的全能性异源融合产物因代谢互补可恢复生长并获得再生能力解析(1)由图1可知，过程为促进动物细胞融合的过程，常用灭活病毒诱导法，灭活病毒作用于细胞膜上的糖蛋白，使细胞互相融合。因为动物细胞膜有很强的细胞识别能力，而植物细胞不存在这种能力，所以灭活病毒诱导法不适用于植物。细胞融合后要进行两次筛选，即图1中的和过程，第一次筛选把杂交瘤细胞选出来，第二次筛选把能产生所需抗体的杂交瘤细胞选出来。骨髓瘤细胞可以无限增殖，而细胞甲(即能产生所需抗体的B淋巴细胞)无法增殖，所以需要两者融合，两者融合后经过筛选获得的细胞丁既能产生所需抗体又能无限增殖。(2)图2中过程诱导原生质体融合，可用聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2高pH融合法等化学法，也可采用离心法、电融合法等物理法诱导融合。图2中过程愈伤组织经过再分化形成再生植株，这一过程的原理是植物细胞的全能性。根据题意，IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R6G可阻止线粒体的呼吸作用，由于异源融合产物因代谢互补可恢复生长并获得再生能力，因此在融合后只有异源融合产物能够存活。学科网（北京）股份有限公司