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1、血液分析仪临床应用血液分析仪临床应用客户技术服务部客户技术服务部吴子权吴子权第一部分第一部分 血液学基础血液学基础1.血液流经全身各脏器，是人体血液流经全身各脏器，是人体最大的循环系统；最大的循环系统；2.为全身提供氧气和营养成分；为全身提供氧气和营养成分；3.带走二氧化碳和代谢产物带走二氧化碳和代谢产物4.有动脉和静脉之分有动脉和静脉之分血液成分血液成分EDTA-K2抗凝血抗凝血血浆血浆55%水水 90%养分养分蛋白质蛋白质激素激素细胞细胞45%红细胞红细胞白细胞白细胞 血小板血小板红细胞红细胞1.红细胞为双凹圆盘状；红细胞为双凹圆盘状；2.内含血红蛋白；内含血红蛋白；3.为机体组织携带氧气
2、和养分；为机体组织携带氧气和养分；4.正常男性为：正常男性为：4.0-5.51012/L 女性为：女性为：3.5-5.01012/L细胞膜有脆性，易破碎，因而溶血剂（表细胞膜有脆性，易破碎，因而溶血剂（表面活性剂）可溶解红细胞面活性剂）可溶解红细胞血红蛋白血红蛋白1.血红蛋白为红细胞内部结血红蛋白为红细胞内部结构，具有携带氧气的位点；构，具有携带氧气的位点；2.其功能为携带氧气；其功能为携带氧气；3.当红细胞被溶解后，血红当红细胞被溶解后，血红蛋白释放出；蛋白释放出；4.正常人含量为：正常人含量为：110-170 g/L血红蛋白有粘性，容易附着血红蛋白有粘性，容易附着 血小板血小板血小板功能为
3、参与止血血小板功能为参与止血正常参考为：正常参考为：100-300 109/L 血小板由于本身的功能特性，血小板由于本身的功能特性，容易受到刺激后聚集，因而容易受到刺激后聚集，因而在临床检测中最容易受影响在临床检测中最容易受影响血小板血小板白细胞白细胞功能为抵抗机体免受感染功能为抵抗机体免受感染正常参考为：正常参考为：4-10109/L可分为可分为5个亚群，各自行使独立个亚群，各自行使独立的功能的功能具有细胞核，具有细胞核，白细胞白细胞白细胞亚群白细胞亚群1.中性粒细胞中性粒细胞2.淋巴细胞淋巴细胞3.单核细胞单核细胞4.嗜酸细胞嗜酸细胞5.嗜碱细胞嗜碱细胞12345库尔特原理库尔特原理负压负
4、压血细胞悬液外电极外电极内电极内电极小孔小孔小孔管小孔电流小孔电流样品杯小孔近观小孔近观库尔特原理三要素：库尔特原理三要素：小孔、负压、电极小孔、负压、电极检测：细胞大小和检测：细胞大小和数量数量第二部分第二部分 血细胞直方图血细胞直方图在小孔计数时仪器获得细胞的数量和大小在小孔计数时仪器获得细胞的数量和大小(体积体积)的信息的信息,再进一步分类整理再进一步分类整理,得到在各得到在各种不同体积下相应的数量种不同体积下相应的数量,反应在坐标上反应在坐标上坐标横轴表示细胞大小坐标横轴表示细胞大小,以以fl(飞升飞升)为单位为单位坐标纵轴表示相应数量坐标纵轴表示相应数量三分类之白细胞直方图三分类之白
5、细胞直方图红细胞直方图红细胞直方图典型的红细胞直方图上，可以看到两个细胞群体：典型的红细胞直方图上，可以看到两个细胞群体：1细胞主群细胞主群 从从50 fL开始，两侧对称呈正态分布的曲线，开始，两侧对称呈正态分布的曲线，又称又称“主峰主峰”2大大细细胞胞群群 在在主主群群右右侧侧，又又称称“足足趾趾部部”，是是一一些些红红细细胞胞二二聚聚体体、三三聚聚体体、多聚体的混合物。多聚体的混合物。血小板直方图（拟合曲线）血小板直方图（拟合曲线）在血小板的直方图上可见两条曲线在血小板的直方图上可见两条曲线：一条是一条是 2fl-20fl 的原始数据曲线的原始数据曲线;另一条是另一条是 0fl-70fl
6、的拟合曲线的拟合曲线.拟合曲线拟合曲线血小板计数的干扰主要来自血小板计数的干扰主要来自:l2 2 flfl以下：噪音、电磁波的干扰以下：噪音、电磁波的干扰l20 20 flfl以上：裂红细胞以上：裂红细胞;小红细胞小红细胞;白细胞的干扰白细胞的干扰拟合曲线作用拟合曲线作用仪仪器器根根据据测测量量得得到到的的220 fL范范围围内内血血小小板板分分布布情情况况，按按照照对对数数正正态态分分布布规规律律得得到到070 fL范范围围血血小小板板分分布布情情况（正常人血小板绝大多数分布在况（正常人血小板绝大多数分布在220 fL 范围内）。范围内）。如如果果拟拟合合成成功功，血血小小板板数数量量由由拟
7、拟合合曲曲线线下下的的面面积积换换算算得得到到，即即070 fL范围的血小板数量；范围的血小板数量；如如果果拟拟合合不不成成功功，没没有有拟拟合合曲曲线线，血血小小板板结结果果只只报报告告220fL范围的血小板数量。范围的血小板数量。通常情况下是低于实际数量的通常情况下是低于实际数量的血小板曲线不拟合的原因血小板曲线不拟合的原因1.血小板原始计数小于血小板原始计数小于20 109/L；2.血小板曲线不呈现对数正态分布；血小板曲线不呈现对数正态分布；3.血小板曲线的波峰不在血小板曲线的波峰不在3fL-15fL之间；之间；4.血小板血小板PDW大于大于20%5.三次计数中任何一次没有符合上述三次计
8、数中任何一次没有符合上述4点拟点拟合条件合条件第三部分第三部分 血细胞五分类血细胞五分类库尔特库尔特VCS五分类技术五分类技术 V：体积分析：体积分析 C：细胞核型分析：细胞核型分析 S：细胞内部颗粒分析：细胞内部颗粒分析接近原态的白细胞分析接近原态的白细胞分析Scatter Pak双试剂系统的作用双试剂系统的作用lE-lyse:E-lyse:通过低渗作用溶解红细胞；通过低渗作用溶解红细胞；lS-lyse:S-lyse:终止溶解作用，使白细胞恢终止溶解作用，使白细胞恢复到接近原态复到接近原态接近原态的接近原态的WBCWBC分析分析接近原态的白细胞接近原态的白细胞进入流式通道进入流式通道进入流式
9、通道进入流式通道逐个逐个、同时同时、直接的三维检测直接的三维检测NENEDCDC MeanMean细胞的三维定位细胞的三维定位NENEOPOP MeanMeanNENE RLSRLS MeanMean细胞的三维定位细胞的三维定位细胞的三维定位细胞的三维定位三维空间的多侧面表示三维空间的多侧面表示-DF1-DF1 -体积体积(V),(V),激光散射激光散射(S)(S)嗜酸细胞嗜酸细胞中性粒细胞中性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞DF2 -体积(V),传导性(C)单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞中性粒细胞中性粒细胞嗜酸细胞嗜酸细胞嗜碱细胞嗜碱细胞网织红细胞的检测网织红细胞的检测网织红细胞是介
10、于晚幼网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之红细胞和成熟红细胞之间的不成熟红细胞间的不成熟红细胞,通常通常较成熟红细胞稍大较成熟红细胞稍大,其胞其胞质中尚残存部分嗜碱性质中尚残存部分嗜碱性物质物质(RNA,(RNA,核糖体核糖体),),经碱经碱性染料染色后可见深染性染料染色后可见深染的网状结构的网状结构,故名。故名。右图中标记右图中标记A A、B B、C C的细的细胞分别代表不同成熟度胞分别代表不同成熟度的网织红细胞的。的网织红细胞的。新亚甲蓝新亚甲蓝-VCS-VCS检测法检测法以经典的超活染料新亚甲蓝（以经典的超活染料新亚甲蓝（NMBNMB）着色）着色网织红细胞内残存的网织红细胞内残存的R
11、NARNA漂洗红细胞内血红蛋白漂洗红细胞内血红蛋白(酸性试剂酸性试剂)用用VCSVCS三维技术，检测网织红细胞三维技术，检测网织红细胞网织红细胞网织红细胞VCS三维散点图分析三维散点图分析网织红细胞检测注意点网织红细胞检测注意点使用抗凝血，样本采集后使用抗凝血，样本采集后8小时内完成检测小时内完成检测加入染液（加入染液（A液）后室温下作用液）后室温下作用5-60分钟分钟取取2ul，加入，加入2ml漂洗液（漂洗液（B液）后勿混匀，等液）后勿混匀，等待待30秒钟秒钟30秒钟一到，立即进样检测秒钟一到，立即进样检测网织红细胞检测的重复性不太理想（半自动）网织红细胞检测的重复性不太理想（半自动）第四部
12、分第四部分 血细胞参数介绍血细胞参数介绍WBC、NE%、NE#、LY%、LY#、MO%、MO#、EO%、EO#、BA%、BA#；RBC、Hgb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RDWPLT、MPV、PCT、PDWRET%、RET#、MRV、MI白细胞系列参数白细胞系列参数WBC：白细胞数量，正常人参考为：白细胞数量，正常人参考为4-10 109/LNE%：中性粒细胞百分比，正常参考为：中性粒细胞百分比，正常参考为50%-75%NE#：中性粒细胞绝对值：中性粒细胞绝对值LY%：淋巴细胞百分比，正常参考为：淋巴细胞百分比，正常参考为20%-40%LY#：淋巴细胞绝对值淋巴细胞绝对值MO%：单核细
13、胞百分比，正常参考为：单核细胞百分比，正常参考为3%-10%MO#：单核细胞绝对值：单核细胞绝对值EO%：嗜酸细胞百分比，正常参考为：嗜酸细胞百分比，正常参考为0.5%-5%EO#：嗜酸细胞绝对值：嗜酸细胞绝对值BA%：嗜碱细胞百分比，正常参考为：嗜碱细胞百分比，正常参考为0-2%BA#：嗜碱细胞绝对值：嗜碱细胞绝对值红细胞系列参数红细胞系列参数RBC：红细胞数量，正常参考男性为：红细胞数量，正常参考男性为4.0-5.5 1012/L 正常参考女性为正常参考女性为3.5-5.0 1012/LHgb：外周血中血红蛋白浓度，正常参考为：外周血中血红蛋白浓度，正常参考为110-160 g/LHct：
14、血细胞压积，也可指红细胞压积，正常参考为：血细胞压积，也可指红细胞压积，正常参考为0.35-0.50MCV：平均红细胞体积，正常参考为：平均红细胞体积，正常参考为80-100 fLMCH：平均红细胞血红蛋白含量，指平均每个红细胞含的血：平均红细胞血红蛋白含量，指平均每个红细胞含的血红蛋白量，正常参考为红蛋白量，正常参考为27-34 pgMCHC：平均红细胞血红蛋白浓度，指红细胞中血红蛋白浓度，：平均红细胞血红蛋白浓度，指红细胞中血红蛋白浓度，正常参考为正常参考为320-360 g/LRDW：红细胞分布宽度，正常参考为：红细胞分布宽度，正常参考为11.5%-15%血小板系列参数血小板系列参数PL
15、T：血小板数量，正常参考为：血小板数量，正常参考为100-300 109/LMPV：平均血小板体积，正常参考为：平均血小板体积，正常参考为6.5-12.5fLPct：血小板压积，正常参考为：血小板压积，正常参考为0.108%-0.271%PDW：血小板分布宽度，正常参考为：血小板分布宽度，正常参考为11.5%-18%网织红细胞系列参数网织红细胞系列参数RET%：网织红细胞百分比，正常参考为：网织红细胞百分比，正常参考为0.5%-2.5%RET#：网织红细胞绝对值：网织红细胞绝对值MRV：平均网织红细胞体积，正常参考为：平均网织红细胞体积，正常参考为100-125fLMI：网织红细胞不成熟度，即
16、不成熟网织红细胞占所有网：网织红细胞不成熟度，即不成熟网织红细胞占所有网织红细胞的比率，正常参考为织红细胞的比率，正常参考为0.2-0.4第五部分第五部分 HMX常见的旗标和代码常见的旗标和代码旗标旗标(数值后数值后):R 结果需复核*R 计数受干扰H 结果高于参考范 围上限L 结果低于参考 范围下限代码代码(替代数值替代数值):-三次计数比统一.不完全计算+结果超出操作范围:流式通道堵塞?数据无效白细胞计数值后出现白细胞计数值后出现*R的的临床意义临床意义说明白细胞在说明白细胞在35fl处的检测受到干扰处的检测受到干扰.在白细胞计数孔有在白细胞计数孔有35fl大小的颗粒通过大小的颗粒通过并被
17、当作白细胞计数并被当作白细胞计数,且超过一定数量且超过一定数量,触发报警触发报警在白细胞直方图上看在白细胞直方图上看,曲线在曲线在35fl处上抬处上抬正常情况正常情况异常情况异常情况导致导致*R出现的可能原因出现的可能原因小白细胞小白细胞有核红细胞、抗溶红细胞有核红细胞、抗溶红细胞红细胞聚集红细胞聚集,大血小板大血小板,血小板聚集血小板聚集溶血剂输送系统故障溶血剂输送系统故障RDWRDW后出现后出现 R R 的临床意义的临床意义红细胞计数时仪器红细胞计数时仪器计数计数 24fl 360fl的的颗粒颗粒,绘出直方图绘出直方图,正正常红细胞直方图应常红细胞直方图应为两端封闭为两端封闭、单峰、单峰、
18、呈高斯分布的曲线呈高斯分布的曲线.RDW.RDW反应红细胞大反应红细胞大小分布的偏离情况小分布的偏离情况,其意义相当于其意义相当于 CV%CV%(变异系数变异系数).).导致的原因导致的原因：输血输血红细胞凝集红细胞凝集红细胞碎片红细胞碎片大血小板大血小板血小板凝集成块血小板凝集成块处理方法：处理方法：涂片镜检红细胞是涂片镜检红细胞是否大小不一否大小不一PLT结果后出现结果后出现 R旗标的旗标的临床意义临床意义仪器进行血小板计数时仪器进行血小板计数时,计数计数 2fl 20fl的血的血小板数量小板数量,再拟合出一条再拟合出一条 0fl 70fl的曲线的曲线,目目的是为了排除计数干扰的是为了排除
19、计数干扰.但条件不满足时仪但条件不满足时仪器不能给出拟合曲线器不能给出拟合曲线,这时候血小板数值后这时候血小板数值后出现出现 R.导致血小板后出现导致血小板后出现 R 的原因的原因小红细胞或红细胞碎片小红细胞或红细胞碎片;白细胞碎片白细胞碎片;大血小板大血小板,血小板凝集血小板凝集;血小板大小不一血小板大小不一(输血后输血后);电磁波或噪音干扰小孔计数电磁波或噪音干扰小孔计数处理方法处理方法1.1.手工涂片镜检手工涂片镜检,如发现小红细胞如发现小红细胞,细胞碎片细胞碎片等异常细胞等异常细胞,则手工计数血小板则手工计数血小板;2.2.如果大血小板影响到白细胞或红细胞数值如果大血小板影响到白细胞或
20、红细胞数值,重新复核重新复核;3.3.如果出现卫星血小板如果出现卫星血小板,将标本以枸橼酸钠将标本以枸橼酸钠抗凝抗凝,检测血小板数值检测血小板数值,但最终数值须乘以但最终数值须乘以1.1(10%1.1(10%稀释比例稀释比例).).+出现的临床意义出现的临床意义+(+(代码代码)：结果超出仪器的操作范围：结果超出仪器的操作范围 对白细胞而言计数值大于对白细胞而言计数值大于 99.999.910109 9/L/L；对红细胞而言计数值大于对红细胞而言计数值大于7.007.0010101212/L/L；对血小板而言计数值大于对血小板而言计数值大于 99999910109 9/L./L.处理方法处理方
21、法：用用ISOTON IIIISOTON III液稀释标本至线性范围内再测液稀释标本至线性范围内再测 注注:1.:1.先做一空白循环以防止携带污染先做一空白循环以防止携带污染 2.2.不能报告白细胞分类结果不能报告白细胞分类结果检查仪器稀释液和溶血剂输送系统有无故障检查仪器稀释液和溶血剂输送系统有无故障代码代码-出现的临床意义出现的临床意义-出现代表三次计数不统一出现代表三次计数不统一可能导致的原因可能导致的原因：小孔堵塞或部分堵塞小孔堵塞或部分堵塞;标本有凝块或丝状纤维蛋白标本有凝块或丝状纤维蛋白;白细胞聚集白细胞聚集,红细胞凝集红细胞凝集;大血小板大血小板,血小板凝集血小板凝集;标本稀释后
22、未气泡混匀标本稀释后未气泡混匀.处理方法：处理方法：参照维修手册清洗小孔参照维修手册清洗小孔;查看标本有无凝块查看标本有无凝块,涂片镜检有无细胞聚集涂片镜检有无细胞聚集;检测标本混匀系统检测标本混匀系统.代码代码.出现的临床意义出现的临床意义.出现表示数据不完整,不完全计数通常当一个参数由于三次计数不统一或超过范围得不到确切数值时,其衍生参数后将出现 ,如WBC+,则其衍生参数NE#、LY#、MO#、EO#、BA#后将出现.也可表示吸样错误也可表示吸样错误.出现也可表示吸样错误出现也可表示吸样错误,当发生吸样错当发生吸样错误时误时,所有参数的结果后都会带有所有参数的结果后都会带有.导致的可能原
23、因有导致的可能原因有：样本有凝块样本有凝块,堵塞吸样针堵塞吸样针;样本量不够样本量不够;样本的样本的RBCRBC和和HGBHGB浓度过低浓度过低(严重贫血病人标严重贫血病人标本本),),血样探测器检测失败血样探测器检测失败;仪器吸样系统堵塞仪器吸样系统堵塞.发生吸样错误的处理方法发生吸样错误的处理方法1.1.查看样本有无凝块查看样本有无凝块,如果有重取标本如果有重取标本,没有没有则重新检测则重新检测,再出现如上问题则涂片镜检有再出现如上问题则涂片镜检有无凝块或细胞聚集无凝块或细胞聚集;2.2.检测标本量是否够检测标本量是否够;3.3.对于严重贫血病人样本采用手动进样方式对于严重贫血病人样本采用
24、手动进样方式.4.4.检测仪器吸样系统检测仪器吸样系统,如发生堵塞则清洗如发生堵塞则清洗.代码代码:出现的临床意出现的临床意义义在白细胞五项分类及网织红细胞计数中在白细胞五项分类及网织红细胞计数中,当流式通道堵塞产生当流式通道堵塞产生:代码代码.在散点分布图上可有三种堵塞报警在散点分布图上可有三种堵塞报警：-FC,-FC,流式通道完全堵塞流式通道完全堵塞(无检测无检测););-PC1,-PC1,流式通道检测时间延长流式通道检测时间延长;-PC2,-PC2,流式通道检测时间缩短流式通道检测时间缩短.导致导致 PC/:的原因的原因-FC-FC：完全堵塞：完全堵塞;-PC1-PC1：流式通道或标本通
25、道部分堵塞导致：流式通道或标本通道部分堵塞导致分类时间延长分类时间延长;-PC2-PC2：红细胞未完全溶解导致分类时间缩：红细胞未完全溶解导致分类时间缩短短,或鞘液系统问题或鞘液系统问题.临床上高胆固醇和高甘临床上高胆固醇和高甘油三酯血症油三酯血症、血红蛋白病、药物治疗后、进、血红蛋白病、药物治疗后、进行性肝病等都可导致行性肝病等都可导致 PC2.PC2.出现出现PC/:的的处理方法处理方法1.手工涂片进行白细胞分类;2.用乳胶和 5C质控清洗流式通道;3.查看ScatterPak液有否过期,检查 ScatterPak 液输送系统有无故障.血常规样本的制备血常规样本的制备抗凝剂的使用问题抗凝剂
26、的使用问题长期放置对分类的影响长期放置对分类的影响样本本身的干扰问题样本本身的干扰问题检测温度的影响检测温度的影响第六部分第六部分 临床应用问题探讨临床应用问题探讨血常规样本的制备血常规样本的制备静脉采血、并立即和抗凝剂充分混匀静脉采血、并立即和抗凝剂充分混匀抗凝剂浓度必须适宜抗凝剂浓度必须适宜试管必须洁净，最好为一次性真空采血管试管必须洁净，最好为一次性真空采血管通常样本采集后通常样本采集后24小时内完成常规检测小时内完成常规检测做网织红细胞检测必须在做网织红细胞检测必须在8小时内完成小时内完成样本必须室温下放置样本必须室温下放置抗凝剂的使用问题抗凝剂的使用问题抗凝剂推荐使用抗凝剂推荐使用E
27、DTA-K2或或Na2抗凝剂浓度为抗凝剂浓度为15g/dL，取，取20ul可抗凝可抗凝1.5-2.0ml静静脉血脉血血细胞遇到抗凝剂会出现短时间的收缩，再逐渐平血细胞遇到抗凝剂会出现短时间的收缩，再逐渐平衡，恢复原来大小，通常这一时间为几分钟，极少衡，恢复原来大小，通常这一时间为几分钟，极少数样本需要几十分钟数样本需要几十分钟如果抗凝剂浓度过高，将使平衡时间延长，影响检如果抗凝剂浓度过高，将使平衡时间延长，影响检测测样本长期静置对分类的影响样本长期静置对分类的影响标本静立标本静立34小时以上小时以上标本静立导致细胞分层，产生特殊微环境标本静立导致细胞分层，产生特殊微环境重新混合后细胞需重建平衡
28、，通常需要重新混合后细胞需重建平衡，通常需要30分钟分钟纠正的方法：间隔性混匀纠正的方法：间隔性混匀30分钟后再测分钟后再测样本本身的干扰问题（样本本身的干扰问题（I）一一.细胞聚集细胞聚集红细胞聚集：常见于温度低时患者血样发生自身冷凝红细胞聚集：常见于温度低时患者血样发生自身冷凝集，通常将血样集，通常将血样37摄氏度温育摄氏度温育15分钟后再检测，可消分钟后再检测，可消除除血小板聚集：常见于采血不顺利、抗凝不充分、试管血小板聚集：常见于采血不顺利、抗凝不充分、试管质量差质量差二二.低能量白细胞低能量白细胞 指衰老或生理异常白细胞，这些白细胞在经历指衰老或生理异常白细胞，这些白细胞在经历E-l
29、yse和和S-lyse作用后通常不能或不能很快恢复到原态，影作用后通常不能或不能很快恢复到原态，影响分类响分类样本本身的干扰问题（样本本身的干扰问题（II）三三.药物、激素影响的样本药物、激素影响的样本如长期化学药物治疗、孕妇等如长期化学药物治疗、孕妇等四四.一些特殊的不分类的样本一些特殊的不分类的样本如肝病、慢性肾病、黄疸、新生儿等血样本，将不分如肝病、慢性肾病、黄疸、新生儿等血样本，将不分类，并报警类，并报警PC2原因可能是红细胞表面负电荷增多，对原因可能是红细胞表面负电荷增多，对S-lyse溶血剂溶血剂具有抵抗作用，导致不分类并报具有抵抗作用，导致不分类并报PC2处理方法：稀释后重新检测，取分类结果处理方法：稀释后重新检测，取分类结果检测温度的影响检测温度的影响低于低于20摄氏度时，仪器出现不分类摄氏度时，仪器出现不分类原因为低温影响溶血剂的作用原因为低温影响溶血剂的作用处理方法：处理方法：提前开机预热提前开机预热加热加热Pak试剂包试剂包