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1、第十七章第十七章 免疫球蛋白的检测及应用免疫球蛋白的检测及应用 医学检验系医学检验系 王洪兴王洪兴概述：人类免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。按其重链分为五类，IgG 有四个亚型，IgA 有二个亚型并有 sIgA，IgM 亦有二个亚型。Ig 主要存在于血液中，占血浆蛋白总量的 20%，也可存在于其他体液中，其含量依次为 IgG、A、M、D、E。第一节 IgG、IgA、IgM 的测定 一、单向免疫扩散法 其原理是将抗血清均匀混入琼脂，然后打孔加入待测血清（Ig），血清向四周扩散，形成可见的沉淀环，量取沉淀环直径与标准曲线，推算出抗体含量，
2、待测血清要做一定稀释。该方法是经典方法，但可能出现误差。1）待测血清或标准液溢出加样孔 2）固相抗体或抗原过量而使沉淀过大或过小，前者形成海德堡曲线，后者形成钩状效应 P54 3）加样量不足或过多，或混有气泡 4）加样孔破裂 5）琼脂板存放时间过长，水分蒸发或变形 6）琼脂半不平，厚薄不平 7）打孔后挑取琼脂将琼脂底挑取，以致待测血清底部流溢 8）扩散时置盒不水平，导致沉淀环不圆 该方法影响因素多，实验时间长，结果的重复性差，该技术设置了钩状效应校正系统。第二节 体液中 IgG、IgA、IgM 测定的临床意义 一、血清 Ig 定量的临床意义 1.低 Ig 血症 先天性低 Ig 血症 获得性低
3、Ig 血症 2.高 Ig 血症 1）多克隆 Ig 增高 2）单克隆 Ig 增高 二、尿液 Ig 定量的临床意义 免疫循环复合物沉积在肾小球基底膜并激活补体而造成肾组织损害，检测蛋白尿，结合临床对肾功能评价有一定的作用。尿液中检测游离轻链是诊断轻链病的主要手段，并对多发性骨髓瘤等疾病的分型鉴定及预后判断均有重要意义。三、脑脊液 Ig 定量的临床意义 中枢神经系统可以产生很强的免疫应答，血液中的 Ig 可渗透至 CSF，生理情况下血中通过通透性正常的血-脑屏障（blood brain barrier，BBB）而进入 CSF。IgG 易通过 BBB，IgA 略难，IgM 分子大，更难通过 BBB。当
4、脑组织或脑膜有病变时脉络丛通透性增加，BBB 发生破坏，或自身病变组织产生病理产物，进入脑脊液，使脑脊液组织发生改变。第三节 IgE 和 IgD 的测定 一、IgE 的测定方法 1、放射免疫法：固相抗-IgE+IgE+125 I 标记抗人 IgE 2、化学发光免疫分析法：固相抗-IgE+IgE+酶标抗 IgE+底物 3、乳胶颗粒免疫浊度法 4、酶免疫试验 二、IgD 的测定方法（一）测定方法 放射免疫测定法和乳胶颗粒免疫浊度法（二）临床意义：IgD 含量低，除 SmIgD 为膜表面受体外，其他生物学功能不明，在妊娠末期，大量吸烟者和 IgD 骨髓瘤患者血清中 IgD 含量升高。第四节 异常免疫
5、球蛋白的检测 一、M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤。（一）血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 区与慢 区 IgA 型多位于慢 区与 区 IgM 型多位于 2 区或 区 IgD 型多位于 区或 区 但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病时 M 蛋白呈淡染区带常在 或 区，需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时观察。（二）免疫球蛋白定量测定（三）轻链片段定量测定（四）免疫电泳及免疫固定电泳 1.免疫电泳 2.免疫固定电泳 免疫固定电泳有以下特点：1.周期短 2.敏感性高 3.分辨清晰 4.结果易于分析（五）本周蛋白的检测 即尿中游离的
6、免疫球蛋白轻链，对轻链病作出诊断，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。本周蛋白在 pH5.0 的条件下，加热至 50 60 出现沉淀，继续加热至 90 以后又重新溶解，故称凝溶蛋白。也可用抗 和 型轻链抗血清进行免疫电泳，为了提高检出率，尿标本宜先用聚乙二醇通过半透膜浓缩。二、冷球蛋白的检测与鉴定 是血液中的一种特殊蛋白质，在 4 时不溶解并自发沉淀，30易于聚合，它们固定补体产生炎症反应，类似IC引起的疾病。冷球蛋白存在于许多疾病。冷球蛋白有两种类型，单株型和混合型 1）IgG或IgM单株型冷球蛋白 2）混合型冷球蛋白。IgG、IgM、IgA
7、多株型与IgG、IgM和补体C3混合型 （一）定性分析 分离血清作二支分装，一支置 4，一支置37，直立，一般于2472小时，4一管可出现沉淀（二）定量分析 将沉淀用冷 pH7.0，0.05mol/L 磷酸盐缓冲液洗涤，然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥/巴比妥钠缓冲液中，置 37 30min，进行免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定（三）注意事项 1.部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 时发生沉淀，故取标本时要保温 2.部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀，但有的需要数天，故此应放置一周 3.正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多克隆冷球蛋白的性质，且含量低 4.冷纤维蛋白原、C 反应蛋白-蛋白复合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性，实验时应加以区别 思考题：1IgG、IgA、IgM的测定技术2体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用3IgE、IgD、的测定技术4异常免疫球蛋白的检测技术