《碳源对灵芝深层发酵菌丝形态及多糖及三萜抗氧化活性的影响研究-.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《碳源对灵芝深层发酵菌丝形态及多糖及三萜抗氧化活性的影响研究-.docx（20页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、摘 要灵芝是我国著名药用真菌,灵芝提取物中最关键的药效成分分别为灵芝多糖及三萜，是有效的抗肿瘤物质成分，DPPH法研究灵芝液体发酵过程多糖、三萜以及发酵液的体外抗氧化能力，结果显示：灵芝发酵过程的菌丝球大小分布较均匀，以添加麦芽糖碳源的菌丝球数量最多，麦芽糖培养基中含有98/mL个菌丝球；灵芝发酵过程的菌丝体生物量相差不大，以果糖加乳糖培养基的生物量最高，为2.54g/L；灵芝发酵过程的胞外多糖含量以果糖加乳糖培养基含量最高，为0.47g/L；灵芝发酵过程的胞内多糖含量以乳糖培养基的含量最高，为2.66g/L；灵芝发酵过程的三萜含量以葡萄糖培养基最高，为0.32%；灵芝发酵过程的DPPH抗氧化
2、性以乳糖加蔗糖培养基含量最高，为17.23%。本文可为灵芝经济有效的液体发酵提供理论参考。关键词：灵芝；液体发酵；多糖；三萜；菌丝体生物量。AbstractGanoderma lucidum is a famous medicinal fungus in China. The most important pharmacodynamic components of G. lucidum extract are Ganoderma lucidum polysaccharide and triterpenes, which are effective anti-tumor components.
3、DPPH method was used to study the antioxidant ability of polysaccharides, triterpenes and fermentation broth during liquid fermentation of G. lucidum. As a result, the number of mycelial spheres in the fermentation process of G. lucidum was the most, and 98/ mL mycelial spheres.the biomass of the ba
4、se was the heaviest ,2.54g/L; the extracellular polysaccharide content in ganoderma lucidum fermentation process was the highest in fructose and lactose medium ,0.47 g/L; the intracellular polysaccharide content in G. lucidum fermentation process was the highest in lactose medium ,2.66 g/L; the trit
5、erpenoid content in ganoderma fermentation process was the highest in glucose medium ,0.32%; the DPPH antioxidant content in the fermentation process was the highest in lactose plus sucrose medium ,17.23%. This paper can provide a theoretical reference for the economical and effective liquid ferment
6、ation of G. lucidum.Keywords: Ganoderma lucidum; liquid fermentation; polysaccharide; triterpene; mycelium biomass 目 录1 引 言11.1 灵芝概况11.2 灵芝的主要成分11.2.1 三萜类11.2.2 多糖类21.2.3 核苷类21.2.4 氨基酸类21.3 灵芝的药理作用21.3.1 治疗糖尿病21.3.2 保护肝脏31.3.3 抗癫痫31.3.4 内分泌与代谢系统31.3.5 呼吸系统31.4 灵芝人工栽培41.5 研究意义41.6 研究内容42 材料与方法52.1 材料
7、52.1.1 试供菌株52.1.2 主要试剂药品52.1.3 主要仪器设备52.2 方法52.2.1 培养基配制52.2.2 菌种活化72.2.3 接种与培养72.3 测定方法72.3.1 菌丝球数量测定72.3.2 生物量测定72.3.3 胞外多糖含量测定72.3.4 胞内多糖含量测定72.3.5 三萜含量测定82.3.6 抗氧化活性测定83 结果与分析83.1 菌丝球大小及数量在灵芝发酵过程的变化83.2 生物量在灵芝发酵液培养基的变化93.3 胞外多糖含量在发酵培养基的变化93.4 不同碳源培养基菌丝胞内多糖含量103.5不同培养基中灵芝菌丝体的三萜含量113.6 不同碳源培养基菌丝体多
8、糖的DPPH抗氧化性114 讨 论13参 考 文 献14致 谢16碳源对灵芝深层发酵菌丝形态、多糖及三萜合成的影响研究1 引 言1.1 灵芝概况灵芝（Ganoderma lucidum）一种食药两用真菌。其本身有很高的药用价值，也可以食用。由于灵芝为高温性菌，而且需要较高湿度，其主要分布在我国南方，如浙江、福建、广东等地。灵芝虽然分布广，但野生灵芝及其稀少1，现在大部分灵芝都是人工培养。从古至今灵芝都在各种医学宝典出现，由此看出其医学价值，因此有着“仙草”之称。灵芝在我国民间作为药材延年益寿已有两千多年历史。灵芝子实体主要成分有三萜类、灵芝多糖、活性肽及多种氨基酸等生物活性物质。对冠心病、糖尿
9、病、神经衰弱、延缓衰老等疾病有一定的疗效，还具有抗癫痫、治疗糖尿病等药理作用。1.2 灵芝的主要成分1.2.1 三萜类三萜是灵芝有效的化学成分之一，不仅具有抗肿瘤、抗HIV1及HIV1蛋白酶活性、抗组织胺释放、抗微生物等多种治疗作用，而且还具有降血糖、降血脂等多种治疗作用。目前，已知能获取三萜材料的方式有三类，第一类是野外或人工栽培的子实体，主要以人工栽培为主，野外子实体较难获得；第二类是灵芝孢子；第三类是液体发酵菌丝体和发酵液，这是目前较为常采用的方法。马林等采用HPLC测定灵芝子实体、孢子粉、菌丝体中Lucidenic acid A、ganoderic acidA、ganoderic ac
10、id B和ganoderic acid C的含量，发现灵芝子实体中4 种三萜酸含量均高于灵芝孢子粉，此法有高效快捷等优点，适用于灵芝及相关制剂的三萜类物质检查和含量测定2。1.2.2 多糖类 灵芝多糖在药理学中具有抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、抗衰老、抗菌等3-5多种功效。毒理学临床实验中也证明灵芝多糖的生物活性组分广泛，是生命活动的物质之一6，有利于人体健康，无副作用7。目前，研究人员对灵芝多糖的分离、纯化、结构进行了广泛研究，相关产品越来越多。至今仍然是国内外关注的课题8。1.2.3 核苷类 随着研究深入，多种物质被确认是灵芝主要活性成分，如多糖、三萜类以及核苷类9-10。研究显示灵芝核苷类对人
11、体有着很大作用，其可以作用于嘌呤受体，让其起到多种生理作用11-12。可采用薄层色谱对其进行鉴别，总核苷含量可以用紫外分光光度法测定。1.2.4 氨基酸类灵芝子实体由18种氨基酸组成，人体必需氨基酸的含量最高，比一般食用菌高40%13，灵芝中的氨基酸不但是体内代谢和合成的基础物质，而且药用价值很高。1.3 灵芝的药理作用1.3.1 治疗糖尿病糖尿病是由多种原因引起的全身系统代谢功能障碍的慢性疾病，其一系列的并发症对患者生活质量造成严重影响，甚至可能对其生命构成威胁。因此，糖尿病治疗及辅助治疗药物的研发成为近年来国内外学者关注的热点。现代药理研究表明，灵芝多糖降血糖作用靶点多且效果显著14。糖尿
12、病大鼠以链脲佐菌素诱导的型为模型，研究阐明，灵芝多糖能显著改善型糖尿病，能够降血糖和降血脂，可能与糖脂代谢密切相关15。1.3.2 保护肝脏肝损伤是世界公认的无法完全治愈的流行性疾病之一，其极有可能会进一步恶化发展成为肝癌16，因此，在临床研究灵芝多糖对保护肝损伤具有重大意义。研究灵芝多糖对抗炎、保肝的作用机制，致急性肝损伤以四氯化碳（CCl4）小鼠为对象，实验阐明抑制一氧化氮合酶（iNOS）的活性和促炎因子TNF-的形成、阻止核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）的活化来实现17-18，其保肝作用机制可能与保护细胞膜结构完整性、抗自由基脂质过氧化、显著降低天冬氨酸转氨酶（AST）和
13、血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平等有关。冯嫣19研究表明，灵芝多糖可明显改善二乙基亚硝胺（DEN）致肝组织细胞病理变化所诱导的小鼠肝损伤。Yu 等20研究表明，灵芝多糖可通过上调Bcl-2/Bax比值和Bcl-2的表达、下调Bax的表达来预防小鼠过量运动后的肝细胞死亡。因此，保肝作用是由灵芝多糖通过保护细胞膜结构完整性、抗自由基脂质过氧化、提高肝脏抗氧化能力等途径。1.3.3 抗癫痫患者的生活质量严重被癫痫反复发作所困扰，因此，加强有效物质的筛选对治疗癫痫的效果尤为重要。朱孔利等21-22研究说明，癫痫模型大鼠脑组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK14）的表达水平能被灵芝多糖显著降下，能够增强钙调
14、神经磷酸酶（CaN）和GSH-Px的活性，控制癫痫的发作。上述作用可能与灵芝多糖升高谷氨酸转运体：GLT-1（EAAT2）、GLAST（EAAT1）等的表达延长癫痫发作时间和降低神经细胞兴奋性有关23。1.3.4 内分泌与代谢系统主要体现在降血糖、保护肝脏和解肝脏毒等方面。小鼠腹腔注射赤芝多糖能促进血清、肝脏及骨髓的蛋白质与核酸的合成，增加肝匀浆细胞P450 的含量，提高肝脏的解毒功能24。1.3.5 呼吸系统灵芝具有止咳祛痰，解痉平喘的作用。研究发现，在腹腔注射灵芝发酵液有一定止咳作用，其作用是让引咳期变长，也可降低咳嗽频率25。灵芝中提取的赤芝酊、菌丝体醇不但可以使组胺引起的离体豚鼠气管平
15、滑肌收缩有解痉作用，还可以解决大部分动物“哮喘”问题，虽然不能根除，但可使潜伏期变长。随着不断深入，还发现灵芝对过敏有着一定作用，它可以使过敏慢反应物质及组胺释放。1.4 灵芝人工栽培灵芝长久以来都是通过人工栽培或者野外采集获得的。树桩栽培和代料栽培是传统人工栽培灵芝子实体的主要方法26。在树桩上接上灵芝菌丝进行培养是树桩栽培方法，因此利用阔叶的枯木、倒木代替原木。代料栽培是采用农作物进行代料，其中棉籽壳和木屑为主，且产量高，菌丝生长速度快，还能减少对环境的破坏，但是生产出的灵芝子实体产量高，个体较小27-28。代料栽培主要是室内栽培，主要利用玻璃瓶或者用无毒的塑料袋的栽培方式。人工栽培灵芝子
16、实体的优点有设备投资少、工艺简单等优点，但需大量木材，易浪费资源，且栽培时间长29。不适合于大规模工业化生产，导致培养成本增加，灵芝价格昂贵。相对灵芝液态发酵培养而言，原料来源广泛、生产进程容易控制、生产时间短等优点，因此，液态深层培养发酵是一种具有极大潜力的方法。1.5 研究意义随着液体深层发酵技术的发展,到目前为止，近代工业化食品、药品以及大型真菌已大规模采用深层培养方法。子实体中不仅有灵芝多糖的存在，多糖的主要成分是来源于灵芝液体深层发酵获得的菌丝体，发酵液富含药用价值活性成分，经过提炼和进一步加工可制成食品添加剂和保健食品，且培养原料来源广、成本低廉、生产周期短、产物高产、能更好的在工
17、厂化中生产30。目前已是生物发酵工程的一种新兴产业，市场前景广阔，具有很大的优势。本实验可为灵芝在保健食品、食品添加剂、工业化液体深层发酵技术等方面提供参考。1.6 研究内容本文研究碳源对灵芝发酵过程菌丝形态、菌球、多糖以及三萜合成的影响，并对发酵液的营养成分进行分析。2 材料与方法2.1 材料2.1.1 试供菌株灵芝菌种：灵芝NA34，保存于宁德师范学院生命科学学院发酵工程实验室。2.1.2 主要试剂药品苯酚、高氯酸、硫酸、浓硫酸、95%乙醇、香草醛-冰醋酸、氢氧化钠、蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、硫酸镁、磷酸二氢钾、蛋白胨、酵母粉、土豆、琼脂、DPPH溶液。2.1.3 主要仪器设备仪器
18、名称型号生产厂家恒温摇床NRY-200上海南荣实验室设备有限公司垂直新颖双人单面净化工作台SW-CJ-2D苏州净化设备有限公司新世纪紫外可见分光光度计T6北京普析通用仪器有限公司鼓风干燥箱DHG-9070A上海飞越实验仪器有限公司电热恒温培养箱DHP-9272A上海飞越实验仪器有限公司电子天平YP802N上海精密科学仪器有限公司自动压力蒸汽灭菌锅GR85DR致微（厦门）仪器有限公司2.2 方法2.2.1 培养基配制半合成培养基：蛋白胨5g/L、葡萄糖40g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、酵母粉4g/L。PDA培养基：马铃薯200g/L、琼脂20g/L葡萄糖20g/L。多糖发酵培养
19、基（1L）：名称葡萄糖（g）果糖（g）麦芽糖（g）乳糖（g）蔗糖（g）硫酸镁（g）磷酸二氢 钾（g）蛋白胨（g）酵母粉（g）140-0.51542-40-0.51543-40-0.51544-40-0.51545-400.515462020-0.5154720-20-0.5154820-20-0.5154920-200.515410-2020-0.515411-20-20-0.515412-20-200.515413-2020-0.515414-20-200.515415-20200.51542.2.2 菌种活化将土豆煮熟，取汁，加入葡萄糖和琼脂，完全溶解后装入试管三分之一处，121下高温灭菌
20、20min，灭菌结束后取出倒斜面，将灵芝菌丝块接种母种斜面培养基上, 放置电热恒温培养箱中，25下培养5 d。 2.2.3 接种与培养培养基80mL装入250mL摇瓶，121下高温灭菌20min。超净工作台上，将活化菌种捣碎菌块5至6块接入，恒温摇床27、160 r/min振荡培养，培养4d后，用移液枪吸取10mL菌丝球，再重新接入半合成培养基，置恒温摇床27、160 r/min振荡培养，培养2d，再吸取5mL转接后的菌丝球到15种糖的液体培养基中，恒温摇床27、160 r/min振荡培养，培养4d。2.3 测定方法2.3.1 菌丝球数量测定将培养好的发酵液，吸取2mL于培养皿中，分别数出0.
21、5mm、1mm、2mm、3mm的菌丝球数量。2.3.2 生物量测定采用纱布过滤，用ddH2O清洗菌丝，收集菌丝体，放至干燥箱60恒重，精准称量。2.3.3 胞外多糖含量测定吸取1mL发酵液，加入4mL95酒精，至4冰箱隔夜，（8000r/min离心15min）弃上清，加3 mLddH2O，摇匀，接着取0.3 mL样品，加0.7 mLddH2O、0.5 mL5苯酚，混合，再加2.5mL浓硫酸，混合，将发酵液置沸水浴中15min，降温，用分光光度计测定，标准曲线计算。2.3.4 胞内多糖含量测定称取干重菌丝体0.1g，加1moL氢氧化钠1mL摇匀，60水浴加热1h，取0.2mL，加0.8 mLdd
22、H2O，再加0.5 mL5苯酚，混合，再加2.5mL硫酸，混合，做对照，置沸水中15 min，冷却，用分光光度计测定，根据标准曲线计算。2.3.5 三萜含量测定称取干重后菌丝体0.1g，加2.5 mL95乙醇，30摇床3h，再取0.2mL，水浴60干燥，再加0.8 mL高氯酸溶液和0.5 mL香草醛-冰醋酸溶液，摇匀，水浴6015 min后，降温，最后加冰醋酸溶液2 mL，静置，以乙醇蒸干的作为对照，用分光光度仪测吸光度值，根据标准曲线计算。2.3.6 抗氧化活性测定准确称取0.039gDPPH固体，加100mL95乙醇,混匀，4冰箱保存备用。吸取1mL发酵液，加入4mL95%乙醇，4冰箱过夜
23、，8000r/min离心5min，弃上清，留沉淀，加3 mLddH2O，振荡混匀，再取样品，加2mlDPPH，静置30min,做对照组，用分光光度计测定，标准曲线计算。3 结果与分析3.1 菌丝球大小及数量在灵芝发酵过程的变化在15种培养基中菌丝球大小及数量的变化见表3-1所示，可看出0.5mm菌丝球大小变化最小，最稳定，均保持在20个以内；其次是3mm菌丝球，变化略高于0.5mm菌丝球；2mm菌丝球大小变化较大，最大与最小之间存在较大差值；而1mm菌丝球大小改变量最不稳定，差值最大，如麦芽糖加蔗糖培养基菌丝球数量最多，葡萄糖加麦芽糖培养基菌丝球数量最少。表3-1 菌丝球在灵芝发酵培养基的变化
24、3mm（个）2mm（个）1mm（个）0.5mm（个）总数（个）葡萄糖205910710196果糖10561199194麦芽糖1278855180乳糖1270904176蔗糖1161963171葡萄糖+果糖301002910169葡萄糖+麦芽糖17854817167葡萄糖+乳糖16696315163葡萄糖+蔗糖15104394162果糖+麦麦芽糖23625413152果糖+乳糖2267526147果糖+蔗糖2171384134麦芽糖+乳糖1077432132麦芽糖+蔗糖8654017130乳糖+蔗糖10683561193.2 生物量在灵芝发酵液培养基的变化图3-1所示，菌丝体生物量在灵芝发酵液培
25、养基的变化，可看出培养后，灵芝发酵生物量样品组与对照生长趋势无明显变化，但对照组的菌丝体生物量稳定性高于样品组的菌丝体生物量。图3-1 生物量在培养基发酵的变化3.3 胞外多糖含量在发酵培养基的变化图3-2可看出添加不同碳源的培养基，发酵液多糖含量相近，但对照组略高于样品组，以添加乳糖加蔗糖的培养基，其胞外多糖含量最低。图3-2 胞外多糖含量在灵芝发酵培养基的变化3.4 不同碳源培养基菌丝胞内多糖含量不同碳源培养基菌丝体中胞内多糖见图3-3所示，不同碳源的培养基，菌丝多糖含量变异大，其中以乳糖培养基胞内多糖含量最高，葡萄糖加乳糖培养基的胞内多糖含量最低。图3-3 胞内多糖含量在灵芝发酵培养基的
26、变化3.5不同培养基中灵芝菌丝体的三萜含量不同碳源培养基中灵芝菌丝体的三萜含量如图3-4所示，看出发酵过程菌丝三萜的含量相近，以麦芽糖培养基的三萜含量最低，果糖培养基的三萜含量最高。图3-4 三萜含量在灵芝发酵不同培养基的变化3.6 不同碳源培养基菌丝体多糖的DPPH抗氧化性不同碳源培养基菌丝体多糖的DPPH抗氧化性见图3-5所示，可看出DPPH均在麦芽糖加蔗糖培养基最低，但两者最大处不同，前者最大在葡萄糖培养基，后者则在果糖培养基。两者变化接近。图3-5 DPPH抗氧化性在灵芝发酵的变化4 讨 论灵芝液体深层发酵技术，在某些局部性降低采收野生灵芝和人工栽培，此方法成了国内外关注的焦点，当前，
27、灵芝液体发酵研究大多集中在优化培养条件、选育优良菌株、改良发酵工艺和筛选发酵培养基等，极大提高液体发酵收集灵芝菌丝的技术水平。尽管如此，还依然存在着问题：如灵芝发酵过程的菌丝形态的多变性，其又对发酵液粘度以及传质产生影响；此外，大多数发酵利用添加有大量金属离子如Mg2+等以及其它不可食用成分，发酵结束后发酵液难于有效利用，不宜应用于食品及保健品的研究。目前，人们对灵芝有益效化学成分的不断深入探索，不仅仅是灵芝对某些疾病和保健功效的研究，而是将灵芝的防病功能为主要对象，灵芝的产品不仅仅也只是应用于食品和药用，还更深入了饮料行业等。因此，人们对于灵芝栽培的方法还应不断扩增，也需进一步改技术，深层培
28、养发酵和工艺提取还需要进一步的改进。等灵芝的产量充足后，以后我们深入研究灵芝的化学及药理成分，并寻找具有药用作用的物质基础，开发灵芝新剂型创造更多的价值，降低灵芝价格，推动市场前景，为人类服务。灵芝有着非常广泛的用途尤其对抗肿瘤方面有着一定的作用，这使得人们对它投以更多的关注，随着社会飞速发展和医疗水平不断提升，利用灵芝对病情预防以及治疗有着非常好的前景，相信在不久的将来，灵芝对临床的应用会有不可估量的突破，会为人类的健康提供更大的帮助。 参 考 文 献1 张贵君主编.中药鉴定学M.科学出版社, 20022 林忠平，林志彬.灵芝M.2版.北京科学出版社，1985：1,79.3 LIN Z B.
29、Cellular and molecular mechanisms of immuno-modulation by Ganoderma lucidumJ. Journal of Pharma-ceutical Sciences，2005，99（2）：144-153.4 LIU Z G，XIN J，ZHENG S S，et al. Ganoderma lucidum polysaccharides encapsulated in liposome as an adjuvant to promote Th1-bias immune responseJ. Carbohydrate Polymers，
30、2016，142：141-148.5 L X C，CHEN D，YAN L C，et al. Comparative studies on the immunoregulatory effects of three polysaccharides using high content imaging systemJ. International Journal of Biological Macromolecules，2016，86：28-42.6 何慧，谢笔钧，吕玉华，等.发酵灵芝粉中肽类化合物的分离 及其生物活性研究J.华中农业大学学报，1997,16(5):4167 ZHANG J J，
31、GAO X，PAN Y G，et al. Toxicology and im-munology of Ganoderma lucidum polysaccharides in Kunming mice and Wistar ratsJ.International Journal of Biological Macromolecules，2016，85（4）：302-310.8 郝瑞芳，李荣春.灵芝多糖的药理和保健作用及应用前景 J.食用菌学报，2004，11(4):5762.9 陈 静( Chen J) ，夏永辉( Xia YH) ，梁 玲( Liang L).灵芝有效成分生物活性作用的研究进
32、展J云南中医中药杂志( Yunnan J Tradit Chin Med Mater Med) ，2009，30(1) : 61 63.10 李抒诗( Li SS) ，于丽薇( Yu LW) 灵芝中的化学成分及其药物作用和保健价值J 国医药指南( Guide Chin Med) ，2009，7(4) : 108 109.11 Ralevic V，Burnstock G Receptors for purines and pyrimidinesJ. Pharmacol Rev，1998，50(3) : 413 492.12 Jacobson KA，Jarvis MF，Williams M Pur
33、ine and pyrimidine(P2) receptors as drug targetsJJ Med Chem，2002，45(19) : 4 057 4 093.13 林志彬.灵芝抗肿瘤活性和免疫调节作用的研究进展J.北京大学学报(医学版)，2002，34(5):493498.14 刘亚萍,张泽生,李雨蒙,等.灵芝多糖降血糖机制的研究进展J.食品研究与开发,2018,39（2）:215-218.15 朱科学,聂少平,宋丹,等.黑灵芝多糖对型糖尿病大鼠血糖、血脂及肠系膜上动脉病变改善作用J.食品科学,2013,34(23):300-304.16 陈玉胜，陈全战.灵芝多糖对CCl4诱导的
34、急性肝损伤小鼠的抗炎和保肝活性J.食品科学,2017,38（17）:210-215.17 黄昭琴.灵芝多糖对鹅膏毒肽所致肝损伤的保护作用研究D.长沙：湖南师范大学,2015.18 赵泽飞,赵咏桔,顾明君,等.灵芝多糖在Graves 病小鼠模型中对甲亢及甲亢肝脏功能损伤的影响J.上海交通大学学报（医学版）,2013,33（5）：607-610.19 冯嫣.灵芝多糖对DEN诱导的小鼠肝脏组织形态和原癌基因及抑癌基因的影响D.晋中：山西农业大学,2013.20 YU R,MAS,WU H. Polysaccharides from Ganoderma lucidum supplementation
35、prevents exhaustive exercise-in-ducedapoptosis in mice liverJ. Adv Mater Res,2013. DOI：10.4028/21 朱孔利，谢莉莉，刘辉.灵芝多糖对癫痫大鼠大脑皮质和海马MAPK14、CaN和GSH-Px表达的影响J.上海中医药大学学报，2015,29（5）：65-68.22 朱孔利，谢莉莉，刘辉.灵芝多糖对癫痫大鼠脑中谷氨酸转运体的影响J. 长春中医药大学学报,2015,31（6）:1104-1106.23 ZHOU S，WANG SQ，SUN CY，et al. Investigation into anti-
36、epileptic effect and mechanisms of Ganoderma lucidum polysaccharides in in vivo and in vitro modelsJ. Proc Nutr Soc，2015. DOI:10.1017/S0029665115000804.24 林志彬 , 张志玲.灵芝的药理研究J. 药学学报,1979,14(3): 183.25 林志彬 , 吴玉成.灵芝的药理研究 J. 北京医学院学报 , 1978, 4(7): 216.26陶文沂.药食用真菌生物技术M.北京:化学工业出版社,2007.27 张伦,黄筑,王冲等.多孢灵芝品种选育
37、及其栽培技术J.种子,2014,33（4）:98-101 28 张华东.灵芝栽培技术J.农村新技术,2013（2）:13-1429 唐力,邢继强,韩玉泽,等.不同产地灵芝中多糖含量的比较J.黑龙江医药科学,1999,22（3）:25-2530 林东星.灵芝辅助治癌探讨J.中国食用菌,2000,19(1):3-5.致 谢时光荏苒，岁月如梭。不知不觉我已在宁德师范学院度过四年时光，现如今已经临近毕业大关，不由的思绪万千。回首过去，四年的学习生涯，不仅让我收获了宝贵的知识，而且还收获了珍贵的友谊，认识了许多良师益友。在这段难忘的岁月里，首先衷心感谢我的导师刘盛荣教授，我的毕业论文是在刘盛荣教授的悉心
38、指导下完成的，盛荣老师从论文选题、文献综述、开题报告和正文的写作中，都给予我许多宝贵的意见，全程指导我的实验，当我的实验遇到瓶颈时，老师总是及时的对实验问题进行分析、讨论，并且总是在百忙之中抽空一遍又一遍修改我的论文，给予了我极大的帮助。老师渊博的知识、发散的思维、创新的能力，给我留下了深刻的印象，并使我受益匪浅。另外，老师一丝不苟的作风，科学严谨的态度，踏踏实实的精神，都对我产生很大的影响，值得我学习。在论文完成之际，在此向导师表示崇高的敬意和衷心地感谢!感谢生命科学学院提供优良的研究条件，感谢在这四年中给予我诸多帮助和教诲的老师们表达谢意，是他们的认真教导，我才能掌握专业知识完成这篇论文。感谢父母对我的支持，为我提供这么好的学习环境，给我强大的精神后盾，让我得以学有所成！感谢宿舍的舍友和实验室的同伴给予我完成实验课题的帮助，感谢16食品科学与工程2班的同学们，在这四年学习生活中给予我的帮助与关心。最后，特别感谢评审论文和答辩委员会的全体专家老师，感谢你们对论文的指导和提出宝贵的意见，祝你们工作顺利，桃李满天下！16