《细胞的原代培养原理 PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞的原代培养原理 PPT课件.ppt（39页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、细胞的原代培养细胞的原代培养(Cellprimaryculture)实验 十一背景资料背景资料原代培养原代培养(primary culture)：从从生物体生物体取材进行培养，中途不分割培取材进行培养，中途不分割培养物、不更换培养物的生长器皿。养物、不更换培养物的生长器皿。细胞的生长条件：细胞的生长条件：无菌无菌 温度温度 pH 渗透压渗透压 氧气氧气 营养及生长调节因子营养及生长调节因子背景资料背景资料培养细胞的培养细胞的生长类型生长类型贴附型贴附型成纤维细胞型细胞成纤维细胞型细胞上皮型细胞上皮型细胞游走型细胞游走型细胞多形型细胞多形型细胞悬浮型悬浮型 1 1、成纤维细胞型：、成纤维细胞型：
2、胞体呈胞体呈梭型梭型或或不规则三角形不规则三角形，中央有卵圆形，中央有卵圆形 核，胞质突起，生长时呈核，胞质突起，生长时呈放射状放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起 源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管 内皮等常呈本型状态。内皮等常呈本型状态。培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为 成纤维细胞。成纤维细胞。背景资料背景资料2 2、上皮型细胞：、上皮型细胞：细胞呈细胞呈扁平不规则多角形扁平不规则多角形，中央有圆形核，细，中央有圆形核，细 胞彼此紧密相连成单层膜
3、。生长时呈胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生 物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮 型形态。型形态。背景资料背景资料3 3、游走细胞型：、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。定，有时难以和其他细胞相区别
4、。4 4、多型细胞型：、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，统归于此类。的形态，统归于此类。背景资料背景资料悬浮型：悬浮型：胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这 类细胞容易大量繁殖。类细胞容易大量繁殖。见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及 白血病细胞。白血病细胞。背景资料背景资料原代细胞培养的一般方法原代细胞培养的一般方法:植块培养法植块培养法(explant culture)分离分离(散散)细胞培养法细胞培养法 (dissociated
5、cell culture)背景资料背景资料一、一、心肌细胞、表皮细胞的培养心肌细胞、表皮细胞的培养二、淋巴细胞的培养二、淋巴细胞的培养心肌细胞、表皮细胞的原代培养心肌细胞、表皮细胞的原代培养实验目的实验目的 了解细胞体外培养的原理、基本方了解细胞体外培养的原理、基本方 法，掌握无菌操作方法及注意事项。法，掌握无菌操作方法及注意事项。学习观察体外培养细胞的形态及生长学习观察体外培养细胞的形态及生长 状况。状况。实验原理实验原理 来自机体的细胞、组织、器官；来自机体的细胞、组织、器官；类似体内的体外环境；类似体内的体外环境；人工培养条件下生存、生长、繁殖。人工培养条件下生存、生长、繁殖。主要仪器：
6、主要仪器：纯水仪；离心机；纯水仪；离心机；CO2培养箱；培养箱；电热干燥箱；高压蒸汽消毒锅；过滤器电热干燥箱；高压蒸汽消毒锅；过滤器及及0.22 0.22 m m滤膜；滤膜；超净台；眼科剪、镊；培养瓶；青霉素超净台；眼科剪、镊；培养瓶；青霉素瓶；平皿；吸管；移液管；血球计数板瓶；平皿；吸管；移液管；血球计数板实验用品实验用品 实验用品实验用品 实验材料：实验材料：7 71212日龄的鸡胚日龄的鸡胚实验用品实验用品 实验试剂：实验试剂：（1）M199 培养液培养液（2）小牛血清小牛血清（3）青、链霉素青、链霉素（4）Hanks液液（5）5NaHCO3（6）2 2碘酒碘酒（7）75酒精酒精实验步骤
7、实验步骤 一、培养前的准备工作一、培养前的准备工作（1）清洗与消毒清洗与消毒（2）配制溶液配制溶液（3）预热溶液预热溶液（4）紫外线消毒紫外线消毒（5 5）洗手和着装洗手和着装（6）进入无菌室进入无菌室 实验步骤实验步骤 二、植块培养法培养鸡心肌细胞二、植块培养法培养鸡心肌细胞（1）配培养液：配培养液：含抗生素的含抗生素的M199基础培养液基础培养液 9 ml小牛血清小牛血清 1 ml 过滤过滤除菌。除菌。实验步骤实验步骤（2）获取心脏：获取心脏：消毒鸡蛋消毒鸡蛋取出鸡胚，取出鸡胚，Hanks液洗涤。液洗涤。取出心脏，取出心脏，Hanks液清洗。液清洗。实验步骤实验步骤（3）处理心脏处理心脏漂
8、洗心脏，剪成约漂洗心脏，剪成约1mm3大小的小块。大小的小块。将组织块排放在培养皿中，贴壁将组织块排放在培养皿中，贴壁培养培养实验步骤实验步骤 三、植块培养法培养鸡表皮细胞三、植块培养法培养鸡表皮细胞 从鸡胚体表撕取表皮，剪成组织块进行培养。从鸡胚体表撕取表皮，剪成组织块进行培养。具体实验操作过程与心肌细胞的培养相同。具体实验操作过程与心肌细胞的培养相同。严格无菌操作。严格无菌操作。植块培养时注意黏附，加液量不植块培养时注意黏附，加液量不 可过多或过少，过多，会漂浮；可过多或过少，过多，会漂浮；过少，会干死。过少，会干死。注意事项注意事项四、观察培养结果四、观察培养结果 培培养养23天天，细细
9、胞胞从从植植块块向向外外迁迁移移，随随着着培培养养时时间间延延长长，在在植植块块周周围围形形成成一一圈圈细细胞胞“晕晕”，称称之为生长晕之为生长晕(growth hallow)(growth hallow)。实验步骤实验步骤 淋巴细胞的培养淋巴细胞的培养(Lymphocyte culture)(Lymphocyte culture)实验目的实验目的 学习悬浮细胞的培养方法学习悬浮细胞的培养方法 细胞活力检查细胞活力检查 悬浮细胞的形态特征观察悬浮细胞的形态特征观察实验原理实验原理 外周血淋巴细胞表面具有有丝分裂原受体，外周血淋巴细胞表面具有有丝分裂原受体，当在培养液中加入有丝分裂原当在培养液中
10、加入有丝分裂原PHAPHA时，可与淋时，可与淋巴细胞表面的相应受体结合使其激活，从而巴细胞表面的相应受体结合使其激活，从而促进淋巴细胞增殖。促进淋巴细胞增殖。主要仪器：主要仪器：纯水仪、离心机、纯水仪、离心机、CO2培养箱、培养箱、电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器及及0.22 0.22 m m滤膜、滤膜、超净台、培养瓶、离心管、吸管、移液超净台、培养瓶、离心管、吸管、移液管、血球计数板、一次性注射器管、血球计数板、一次性注射器实验用品实验用品 实验用品实验用品 实验材料：实验材料：（肝素）抗凝血（肝素）抗凝血n注注射射器器中中吸吸入入0.1 ml 180 I
11、Uml肝肝素素钠钠溶溶液，鸡翅下静脉采血液，鸡翅下静脉采血5 ml。实验试剂：实验试剂：（1）RPMI1640培养液培养液（3）肝素钠（）肝素钠（180IUml）（5）PHA（2mg/ml）（7）5NaHCO3（9）2 2碘酒棉球碘酒棉球（11）1%台盼蓝台盼蓝实验用品实验用品（2）小牛血清小牛血清（4）青、链霉素青、链霉素（6）Hanks液液（8）1N盐酸盐酸（10）75酒精棉球酒精棉球实验步骤实验步骤（1）配培养液：配培养液：RPMI1640基础培养液基础培养液80小牛血清小牛血清20肝素（肝素（180IUml）3.6IU/mlPHA（2mg/ml）40 g/ml青、链霉素青、链霉素100
12、IU/ml100 g/ml调调pH至至6.87.2，0.22 m滤膜滤膜过滤除菌。过滤除菌。实验步骤实验步骤（2 2）采血：肝素抗凝，静脉采血。）采血：肝素抗凝，静脉采血。（3 3）分离淋巴细胞）分离淋巴细胞 （4 4）洗涤淋巴细胞）洗涤淋巴细胞 （5 5）细胞计数、细胞活力检查）细胞计数、细胞活力检查（6 6）稀释培养）稀释培养 实验步骤实验步骤（7）结果：结果：培养培养3 3天后观察结果。天后观察结果。细胞细胞计数：计数：淋巴细胞增殖情况。淋巴细胞增殖情况。注意事项注意事项 1.过滤消毒过滤消毒2.淋巴细胞的分离淋巴细胞的分离3.洗涤：洗涤：Hanks液、液、RPMI1640培养液培养液4ml各洗涤一次。各洗涤一次。4.计数：计数：浓度浓度3-5105个个/ml，1ml/10ml瓶。瓶。5.5.培养培养实验报告实验报告 1.1.简述体外培养细胞的形态特征。简述体外培养细胞的形态特征。2.2.淋巴细胞分离液的作用？淋巴细胞分离液的作用？3.3.细胞培养获得成功的关键要素是什么？细胞培养获得成功的关键要素是什么？4.4.实验结果：实验结果：培养后淋巴细胞增加的数量、培养后淋巴细胞增加的数量、提高百分率提高百分率。Thanks!