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1、五丰液相培训小结上海彩迩文生化科技有限公司目录：1.液相使用注意事项2.泵故障及处理3.泵的维护4.检测器故障及处理5.流通池的清洗维护6.过滤头的清洗7.小结安全注意事项1.1.有机溶剂易挥发，务必使环境保持通风，适时打开有机溶剂易挥发，务必使环境保持通风，适时打开排风系统，谨防高浓度有机相气体聚集对人体产生危排风系统，谨防高浓度有机相气体聚集对人体产生危害。害。2.2.处理溶剂时戴防护眼镜，以防溶剂溅到眼睛处理溶剂时戴防护眼镜，以防溶剂溅到眼睛里，如溶剂飞溅到皮肤上，应立即用大量清水里，如溶剂飞溅到皮肤上，应立即用大量清水冲洗，严重的情况应立即就医。冲洗，严重的情况应立即就医。仪器注意事项
2、3.管路中有使用PEEK树脂材料处，尽量不要使用下列流动相：二氯甲烷，三氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，二氯乙酸，二甲基亚砜等，此类流动相可以使树脂部件变脆，引起管路断裂和流动相泄露。（如果采用丙酮含量低于0.5%的水溶液作为流动相，则影响不大。）4.卤离子可以腐蚀不锈钢管路材料，因此应尽量避免诸如HCL,KCL,NaCL，NH4CL等，如必须使用，则分析结束后立即用去离子水冲洗整个管路不小于1小时。（冲洗时不要连接色谱柱）5.流动相使用前需要脱气，否则在溶剂混合或改变温度、压力时易产生气泡，从而使输液泵产生脉动，检测器产生噪音。进样针不要弄错6.液相进样针为平头进样针（外径0.75mm），切记不能错
3、拿尖头进样针，否则会损坏进样阀定子密封，造成不必要的成本。含缓冲盐流动相的问题7.使用含缓冲盐溶液的流动相分析前，先用10%甲醇水溶液（或乙腈水溶液），1ml/min的流速，将保存在甲醇（或者乙腈）中的反相色谱柱冲洗30分钟，使反相色谱柱充满10%的甲醇水溶液（或者乙腈水溶液），再更换含有缓冲盐溶液的流动相，稳定后，做样品。做完样品后，用10%甲醇水溶液（或者乙腈水溶液），泵的流速：1ml/min冲洗色谱柱30分钟。再用甲醇（或者乙腈）冲洗系统，并将反相色谱柱和系统保存在甲醇（或者乙腈）中。清洗时间至少为30分钟。高压恒流泵故障的简高压恒流泵故障的简易诊断与处理方法易诊断与处理方法仪器开机无反
4、应，显示屏不亮检查电路，电线，接头，保险丝更换显示屏或返修。泵易出问题的地方：带柱后清洗装置泵无压力1.无液体出来是否走空？观察泵头管路是否有大气泡，若有则针筒抽液；入口单向阀红宝石小球与球座之间有异物，使得小球无法正常回落球座或无法与球座严合，导致液体全部回流，此时清洗单向阀即可；吸滤头或泵头管路堵，可以断开管路，储液瓶高放，看液体是否畅 快流出，若堵，则纯水超声清洗或换。2.泵头漏液、接头漏液、排空阀未关拧紧至不漏或更换接头、管路，关排空阀，检查泵密封圈是否损坏。泵 头吸入阀宝石球与球坐粘连，吸入阀不能导通活塞向后运动泵 座排出阀关闭液流方向泵吸液过程有故障情况：吸入阀宝石球粘连泵腔体内没
5、有液体流入宝石活塞杆密封圈 排出阀导通泵 座宝石活塞杆密封圈吸入阀宝石球与球座之间有杂质，液体反向泄漏液流方向泵排液过程有故障情况：宝石球与球座之间有杂质反向泄漏液流方向反向漏液方向活塞向前运动泵压力低压力偏低小漏，找出漏点，拧紧；密封圈或柱塞杆磨损，更换密封圈、柱塞杆，无操作经验的可考虑返修；双泵的情况下可考虑是否某个泵无压力，A调100%看压力情况，再换B调100%看压力情况。压力低且不稳，流速不准泵头或管路内有气泡，逐段排查，排气泡；单向阀密封不严，清洗单向阀；密封圈或柱塞杆磨损，更换密封圈、柱塞杆或返修。可用量筒和计时器测量实际流速。泵 头吸入阀关闭泵 座宝石活塞杆密封圈排出阀导通液流
6、方向（压力下降）密封圈泄漏产生的故障现象：密封圈与宝石杆之间存在间隙，导致漏液和压力下降泵腔体活塞向前运动泵压力高不接柱子压力高不接柱子压力高管路堵塞，逐段排查堵塞点在哪里，冲洗疏通或更换。管路堵塞，逐段排查堵塞点在哪里，冲洗疏通或更换。接柱子压力高接柱子压力高流速是否偏高，柱温是否过低，是否在走梯度，色谱柱柱头筛板堵流速是否偏高，柱温是否过低，是否在走梯度，色谱柱柱头筛板堵塞。塞。色谱柱若堵得实在没法用了，可考虑拆下柱头筛板超声清洗，拆柱子时手不色谱柱若堵得实在没法用了，可考虑拆下柱头筛板超声清洗，拆柱子时手不要直接接触柱子，谨防柱内填充受热而爆出，反相柱（填充粒径大于要直接接触柱子，谨防柱
7、内填充受热而爆出，反相柱（填充粒径大于1.8um1.8um）也可考）也可考虑低流速反冲色谱柱，注意：无论是拆筛板还是反冲都有可能对柱子产生重大影响，虑低流速反冲色谱柱，注意：无论是拆筛板还是反冲都有可能对柱子产生重大影响，必须先阅读说明书或咨询色谱柱厂家后再酌情考虑是否操作。必须先阅读说明书或咨询色谱柱厂家后再酌情考虑是否操作。其他：压力传感器失灵其他：压力传感器失灵返修。返修。压力不稳梯度压力变化为正常现象。泵头、单向阀或系统内有气泡，排气泡、流动相脱气。单向阀损坏，更换。泵密封损坏，更换。压力在一定范围内上升下降，排除其他原因后，考虑阻尼器失灵，联系厂家确认后，返修。泵的日常维护 在使用有
8、缓冲盐溶液的流动相后，需要对柱塞杆、密封圈等部件及时清洗，因为在柱塞杆来回运动过程中不可避免地会渗透出部分缓冲溶液，液体挥发干后或遇到有机相会析出，导致柱塞杆和密封圈磨损。所以配有自动柱后清洗功能的仪器则通过电磁阀调节清洗流量，用10%异丙醇水溶液（0.45um滤膜过滤过）进行清洗，若是手动清洗，则分析结束后，用注射器吸取30ml的10%异丙醇水溶液注射清洗两次，以延长元件使用寿命。如果一定需要拆下泵清洗，则需要将泵头内的柱塞杆缩进去再拆泵，以保护柱塞杆，拆时，手指按着泵头，左右螺丝对称拧松，轻轻拿下，清洗完成后，原样装回，再同样操作拆另外一个泵。超声清洗单向阀时，请竖直超声，否则有超散单向阀
9、的风险。柱塞杆密封圈是高压恒流泵易损件之一，在使用中发现实测流量低于设定值，差值逐渐增大，压力波动大而难于达到高压，密封圈泄漏传感器报警等，检查没有其他外部原因适，须及时更换受损的密封圈。清洗泵头时用清洁绸布或棉球沾蒸馏水或溶剂轻轻擦去泵头、泵座的表面、孔上脏物。请勿用硬物划伤柱塞杆、孔周围表面而破坏密封性。两种柱后清洗模式：手动柱后清洗手动柱后清洗自动柱后清洗自动柱后清洗 输入单向阀的拆卸从输入单向阀上拧下不锈钢输液管手拧接头。用8mm的扳手旋松并取下输入单向阀。输出单向阀的拆卸 用5/16”的扳手将不锈钢单向阀输出管接头从单向阀上拧下，另一头从排空阀上拧下。（单向阀输出管有左右之分，建议分
10、开拆卸，并做好相应标记）用8mm的扳手逆时针方向旋松并取下单向阀。泵头的拆卸 分别拆下单向阀输入、输出管和输入、输出单向阀 用配套的内六角扳手均匀地旋松泵头上二个螺钉(对左侧螺钉旋松约1/4 圈，换到右侧螺钉旋松约1/4 圈)，左右交替均衡旋下二个螺钉。注意：请勿单独旋下一侧螺钉。使泵头倾斜折断柱塞杆。拆之前请将柱塞杆缩至最里面。用手托住泵头缓慢旋下二个螺钉。平稳地取下泵头放在瓷盘内滤纸上，防止零件丢失。输入单向阀输入单向阀输出单向阀宝石球座宝石球球阀 p 恒流泵中气泡的排除（1）首先，检查流动相储液瓶中的溶剂过滤头是否阻塞。具体做法：将输入三通器上的溶剂塑料连接管的卸下，将流动相储液瓶置于高
11、位，利用压差使溶液流出。如果溶剂流的很顺畅，说明溶剂过滤头是好的。如果是一滴一滴的流出，则说明过滤头阻塞，需要超声清洗，复原。（2）将仪器所配的注射器及塑料连接管插到放空阀的导管上，逆时针旋放开空阀旋钮12圈，抽液5-10mL，将泵的流速设定在每分钟一毫升的流速。启动泵，观察塑料连接管的流动溶液是否还有气泡。如没有气泡说明从过滤头到放空阀这一段已将气泡排除。（3）将泵关闭，关闭放空阀旋钮，放空泵输出口，将泵的流速设定在3-5mL每分钟，将泵内的阻尼器和压力传感器的气泡赶出，流出溶液10-15mL后将泵关闭。连接上色谱柱，将流速设定在每分钟一毫升，启动泵，观察压力及压力脉动。（4）应用快速降压法
12、赶出气泡：用小堵头将泵的流动相输出口堵上，将流速设定在1毫升/分，将柱前压力升至20Mpa左右，将排空阀快速打开，重复23即可。紫外检测器故障的简易诊紫外检测器故障的简易诊断与处理方法断与处理方法1.吸光度与样品池光强度值出现脉冲式波动。原因：有气泡通过或附着在流通池，流动相过滤脱气，冲洗流通池；若波动小且无规则，则可能是氘灯突然闪一下导致。2.基线噪声。原因：流通池中有气泡或污染，可不接柱子大流速冲洗，压力不超过3MPa；环境温度或气流不稳，需保持环境稳定；氘灯年限已到；接地线是否正常。3.基线漂移。原因：池窗污染，冲洗去污或更换新；池体有小气泡，冲洗除气泡；检测器温度变化，控制温度稳定；池
13、内原先流动相未置换完全，等待置换完全。4.光强度下降，噪声大。原因：氘灯发光能力下降，需更换；若只是样品池光强度下降，则样品池污染，需冲洗去污。5.出现负峰：检测器输出信号的极性相反；样品的吸收小于流动相，流动相不纯；样品溶剂干扰；示差折光检测器中样品的折射率较低；进样中带入气泡。流动相输入输液单元色谱柱高压恒流输出液晶显示器键 盘 主 机 板串行接口板USB接口RS232接口RS485接口样品注入氘灯电源样品输出进样器光栅检测器清洗：流通池内有气泡或污染物会影响吸光度测量，出现噪声增大、基线漂移严重的现象。需要冲洗流通池，去除气泡或污染物。1.用纯甲醇作流动相，流速1.0，波长：254nm，
14、记录样品池和参比池光强度值，供冲洗后进行比较。2.关闭泵和检测器，将注射器连接件连接到流通池输入口，在注射器中吸入异丙醇，将异丙醇注入流通池，清洗流通池（可反复数次）。3.在注射器中吸入流动相，注入流通池中，进一步清洗流通池（可反复数次）4.打开检测器，观察光强度值变化和冲洗效果，若光强明显改善，则可将管路重新连接好。5.若上述处理仍无法清除污染，则需送厂处理或更换新的流通池，注：流通池更换需整体拆下，整体安装，非专业人员严禁拆开流通池部件。检测器维护注意事项1.每天分析完后要冲洗整个管路，保持流通池干净，定期用强溶剂反相冲洗检测器（断开柱子），以清洗流通池。2.流动相要脱气，防止气泡滞留在流
15、通池内，影响分析结果。3.注意氘灯的保养，不分析时请关氘灯，以延长氘灯使用寿命，最好在需关灯时间超过4小时才关灯，因为频繁地开关等同样缩短使用寿命。滤头问题 流动相过滤头在日常使用过程中可能会被大家所遗忘，平时流动相都会用0.45um滤膜过滤，所以仪器有问题时也不太可能会第一时间想到它。其实，滤头作为液相系统的第一道大门是很重要的一部分。滤头在使用过一段时间后可能会变脏，尤其是在水相或含有缓冲盐溶液的流动相里，从而导致泵吸不上液，泵压力高，吸入泵内的液体含有气泡等。滤头清洗 判断滤头是否脏或堵，先目视是否有异物，再断开与泵连接的管路，储液瓶高放，看液体是否畅快流出。如果过滤头已经堵塞，则没有溶
16、剂或只有很少的溶剂滴出，此时需要清洗滤头了。不锈钢过滤头（五丰、岛津、waters）清洗时可以用甲醇、异丙醇或纯水超声清洗，而安捷伦的滤头由于是玻璃或陶瓷材料制成，超声可能损坏玻璃过滤头的过滤板，推荐用稀硝酸（35%左右）浸泡，浸泡大约一个小时后，再用水洗净过滤头。洗干净的滤头先用针筒往里打满流动相，再接到管路上，防止残留空气在里面。注意事项1.流动相一定要0.45um滤膜过滤、超声后使用。水要使用超纯水或二次蒸馏水，有机相尽量选择高品质色谱级试剂。2.当使用水或缓冲盐做流动相时，一定要经常更换流动相，水最好每天更换，至少两天换一次，缓冲盐最好现配现用。如果不及时更换容易变质的流动相，很容易滋生微生物，这样会影响基线的稳定，甚至发生过滤头堵塞。3.定期（2个星期左右，视使用情况而定）清洗一下滤头。结束感言结束感言 虽然培训的时间较短，但是培训老师丰富的经验和大量的实例分析让我们学员收益良多，根据授课老师所讲内容结合平时工作中遇到问题，总结了这份小结，虽然是五丰液相培训，但其中的原理和故障处理还是有可借鉴之处，大家可以参考一下，如内容上有不准确的地方欢迎指出，大家相互交流心得体会。液相色谱仪是精密的微量分析仪器，要使其功能充分发挥离不开大家悉心的呵护。