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1、病原生物学教研室病原生物学教研室Department of pathogenic Biology of Gannan Medical University医学微生物学医学微生物学Medical Microbiology第14章 动物源性细菌基础医学院病原生物学教研室基础医学院病原生物学教研室概述动物源性细菌是人畜共患病的病原菌,即由一种病原菌同时可引起动物和人类的某些传染病,称为人畜(兽)共患病,其中绝大多数是以动物作为传染源的称为动物源性疾病(zoonosis)主要有布氏菌,炭疽芽胞杆菌,鼠疫耶氏菌等第一节 布氏菌属(Brucella)牛布氏菌(B.abortus)羊布氏菌(B.melite
2、nsis)猪布氏菌(B.suis)犬布氏菌(B.canis形态与培养革兰阴性小球杆菌或短杆菌。大小为0.40.8m 0.51.5m。无芽胞,无鞭毛,光滑型菌有微荚膜需氧菌,牛布氏菌在初分离时需5%10%CO2。营养要求较高 生物学性状生化反应生化反应 主要布鲁斯菌的特性与鉴别菌种CO2需要脲酶试验H2S产生含染料培养基中生长 凝集试验复红(1:50000)硫堇(1:20000)抗A因子抗M因子牛 布氏 菌羊 布氏 菌不定猪 布氏 菌/抵抗力 本菌抵抗力较强。在土壤、皮毛、肉和乳制品及水中可生存数周至数月。但在湿热6010min死亡;直射日光下20min死亡;3来苏儿中数分钟死亡。对常用的消毒剂
3、也较敏感。致病性与免疫性致病性与免疫性内毒素荚膜侵袭酶 透明质酸酶 过氧化氢酶 侵袭力强,胞内寄生菌侵袭力强,胞内寄生菌致病物质致病物质 牛、羊、猪是本菌的主要自然宿主,感牛、羊、猪是本菌的主要自然宿主,感染后可引起母畜流产。染后可引起母畜流产。人类对布氏菌易感,细菌可通过消化道和人类对布氏菌易感,细菌可通过消化道和呼吸道粘膜、皮肤及眼结膜等途径传染于人,呼吸道粘膜、皮肤及眼结膜等途径传染于人,引起布氏菌病。反复呈波浪式热型,故临床引起布氏菌病。反复呈波浪式热型,故临床上称为上称为波浪热波浪热。所致疾病所致疾病免疫性免疫性 细胞免疫为主,感染后可引起感染后可引起、IV型超敏型超敏反应。病程中免
4、疫保护和病理损害往往交织反应。病程中免疫保护和病理损害往往交织存在。存在。可产生IgM和IgG型抗体,发挥免疫调理作用一般认为布鲁斯菌感染后形成的免疫是有菌一般认为布鲁斯菌感染后形成的免疫是有菌免疫。最终变为无菌免疫。免疫。最终变为无菌免疫。病原菌分离病原菌分离 血清学诊断血清学诊断皮肤试验皮肤试验 即布鲁菌素皮肤超敏反应试验(即布鲁菌素皮肤超敏反应试验(brucellin skin test)。)。皮试阳性可诊断慢性或曾患过布氏病。皮试阳性可诊断慢性或曾患过布氏病。微生物学检查微生物学检查 预防措施主要是控制和消灭牲畜布氏病,切断传预防措施主要是控制和消灭牲畜布氏病,切断传播途径和对疫区人畜
5、接种减毒活菌苗,有效期约一年。播途径和对疫区人畜接种减毒活菌苗,有效期约一年。急性病人用抗生素治疗,慢性患者可用特异性菌急性病人用抗生素治疗,慢性患者可用特异性菌苗脱敏治疗。苗脱敏治疗。防治原则防治原则第二节 炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌(B.anthracis)是动物和人类炭疽病的病原菌,是人类历史上第一个被发现的病原菌,俗称炭疽杆菌 形态与染色:炭疽芽胞杆菌是致病菌中最大的革兰阳性粗大杆菌,两端平切、排列呈竹节状、有荚膜,芽胞在有氧条件下形成,呈椭圆形,位于菌体中央 生物学性状生物学性状培养:3035 普通琼脂培养基:形成灰白色粗糙型菌落,边缘不整齐,在低倍镜下观察边缘呈卷发状 碳酸氢钠琼脂平
6、板:有毒株在碳酸氢钠琼脂平板:有毒株在5%CO5%CO2 2环境环境中孵育中孵育48h48h,由于产生荚膜而形成粘液型,由于产生荚膜而形成粘液型菌落,用接种环挑取时可见拉丝状。菌落,用接种环挑取时可见拉丝状。抵抗力 芽胞对外界因素的抵抗力强:芽胞对外界因素的抵抗力强:在室温干燥环境中能存活在室温干燥环境中能存活2020余年,在皮革余年,在皮革中能生存数年。牧场一旦被污染,传染性可维中能生存数年。牧场一旦被污染,传染性可维持持20203030年。煮沸年。煮沸10min10min,干热,干热140 3 h140 3 h才能才能破坏芽胞。芽胞对化学消毒剂的抵抗力也很强;破坏芽胞。芽胞对化学消毒剂的抵
7、抗力也很强;对碘较敏感,对碘较敏感,1 1:25002500碘液经碘液经10 min10 min即可破即可破坏芽胞。坏芽胞。本菌对青霉素、红霉素、氯霉素均敏感。本菌对青霉素、红霉素、氯霉素均敏感。抗原结构抗原结构1 1炭疽毒素炭疽毒素 由保护性抗原(由保护性抗原(PAPA)、致死因子()、致死因子(LFLF)和)和水肿因子(水肿因子(EFEF)三种蛋白质组成的复合物。炭疽毒素)三种蛋白质组成的复合物。炭疽毒素具有抗吞噬作用和免疫原性。其相应抗体对宿主有一具有抗吞噬作用和免疫原性。其相应抗体对宿主有一定的保护作用。定的保护作用。2 2荚膜抗原荚膜抗原 具有抗吞噬作用,与毒力有关。无种属特具有抗吞
8、噬作用,与毒力有关。无种属特异性。异性。3 3芽胞抗原芽胞抗原 由芽胞的外膜、皮质等组成的芽胞特异性由芽胞的外膜、皮质等组成的芽胞特异性抗原,具有免疫原性和血清学诊断价值。抗原,具有免疫原性和血清学诊断价值。与其他芽胞杆菌、与其他芽胞杆菌、1414型肺炎球菌多糖抗原、人类型肺炎球菌多糖抗原、人类A A血型物质有共同成分,能发生交叉反应。血型物质有共同成分,能发生交叉反应。4 4菌体抗原菌体抗原 为多糖抗原,由于耐热,此抗原在病畜皮为多糖抗原,由于耐热,此抗原在病畜皮毛或腐败脏器中虽经长时煮沸仍可与相应抗体发生沉毛或腐败脏器中虽经长时煮沸仍可与相应抗体发生沉淀反应,称为淀反应,称为AscoliA
9、scoli热沉淀反应。热沉淀反应。致病物质致病物质 荚膜荚膜 具有抗吞噬作用,有利于细菌在机体组织内繁殖与扩散。具有抗吞噬作用,有利于细菌在机体组织内繁殖与扩散。炭疽毒素炭疽毒素 保护性抗原(保护性抗原(PAPA)致死因子(致死因子(LFLF)水肿因子(水肿因子(EFEF)毒性作用主要是直接损伤微血管毒性作用主要是直接损伤微血管的内皮细胞,使血管通透性增加,的内皮细胞,使血管通透性增加,有效循环血量不足,微循环灌注有效循环血量不足,微循环灌注量明显减少,血液呈高凝状态,量明显减少,血液呈高凝状态,易形成感染性休克和弥散性血管易形成感染性休克和弥散性血管内凝血(内凝血(DICDIC)致病性与免疫
10、性致病性与免疫性所致疾病所致疾病 主要通过接触病畜及其皮毛等:主要通过接触病畜及其皮毛等:皮肤炭疽皮肤炭疽:细菌由手、颈、颜面部小伤口侵入,最多见。:细菌由手、颈、颜面部小伤口侵入,最多见。经经121236h36h局部出现水泡、脓疱,最后坏死溃疡,形成特有的局部出现水泡、脓疱,最后坏死溃疡,形成特有的 黑色焦痂,故名炭疽,轻者黑色焦痂,故名炭疽,轻者2 23 3周治愈,重者死于败血症;周治愈,重者死于败血症;肠炭疽肠炭疽:食入未煮熟的病畜肉类、病畜奶或污染食物引起。:食入未煮熟的病畜肉类、病畜奶或污染食物引起。出现连续性呕吐、肠麻痹及血便,以全身中毒为主,出现连续性呕吐、肠麻痹及血便,以全身中
11、毒为主,2 23d3d死死 于毒血症;于毒血症;肺炭疽肺炭疽:吸入含有大量病菌芽胞的尘埃可发生,又称羊毛工人病。:吸入含有大量病菌芽胞的尘埃可发生,又称羊毛工人病。表现呼吸道症状,很快出现全身中毒症状。表现呼吸道症状,很快出现全身中毒症状。免疫性免疫性 感染炭疽(包括隐性感染和显性感染)或接种感染炭疽(包括隐性感染和显性感染)或接种疫苗后,均可获得持久的免疫力。疫苗后,均可获得持久的免疫力。免疫作用主要与抗毒素及吞噬细胞的吞噬作用免疫作用主要与抗毒素及吞噬细胞的吞噬作用增强有关。增强有关。直接涂片镜检直接涂片镜检:见到有荚膜的典型竹节状:见到有荚膜的典型竹节状G+G+大杆菌,大杆菌,结合临床症
12、状可作出初步诊断。结合临床症状可作出初步诊断。分离培养分离培养 血琼脂平板血琼脂平板和和碳酸氢钠琼脂平板碳酸氢钠琼脂平板标本标本 观察菌落特征,并做青霉素串珠试验、动物试验、观察菌落特征,并做青霉素串珠试验、动物试验、噬菌体裂解试验等鉴定。噬菌体裂解试验等鉴定。AscoliAscoli试验试验 免疫荧光法检查病人的荚膜抗体,用免疫荧光法检查病人的荚膜抗体,用ELISAELISA检查保护性抗体。检查保护性抗体。微生物学检查微生物学检查性状炭疽芽胞杆菌其他需氧芽胞杆菌 荚膜+-动力-+溶血不溶血或微溶血多为迅速而明显溶血肉汤生长絮状沉淀,上层清晰沉淀,均匀浑浊,有菌膜青霉素串珠试验+-噬菌体裂解试
13、验+-NaHCO2琼脂平板粘液型菌落粗糙型菌落动物致病力试验+-炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别 预预防防人人类类炭炭疽疽病病的的关关键键是是加加强强家家畜畜的的管管理理及及其其炭炭疽疽病病的的防防治治,对对易易感感家家畜畜进进行行预预防防接接种种。病病畜畜应应严严格格隔隔离离或或处处死死深深埋埋。死死畜畜严严禁禁剥剥皮皮或或煮煮食食,必必须须焚焚毁毁或或深深埋埋于于2m2m以以下下并并加加大大量量石石灰灰。对对可疑污染的动物皮毛、用具等必须彻底消毒处理。可疑污染的动物皮毛、用具等必须彻底消毒处理。对对易易感感者者,主主要要是是牧牧民民、屠屠宰宰牲牲畜畜
14、人人员员、兽兽医医、制制革革工工人人等等应应进进行行特特异异性性预预防防,用用炭炭疽疽减减毒毒活活疫疫苗苗或或炭炭疽疽纯纯化化菌菌苗苗,皮皮上上划划痕痕、皮皮下下注注射射或或气气溶溶胶胶吸吸入入接接种种,一一般般接接种种后后半半月月产产生生免免疫疫力,可维持力,可维持1 1年。年。治疗炭疽病以青霉素为首选,四环素、氯霉素、强力霉素、治疗炭疽病以青霉素为首选,四环素、氯霉素、强力霉素、磺胺药物等也有效。也可采用抗生素、磺胺药物及抗炭疽血清磺胺药物等也有效。也可采用抗生素、磺胺药物及抗炭疽血清的综合疗法。的综合疗法。防治原则防治原则第三节第三节 鼠疫耶鼠疫耶氏菌菌(Y.pestis)烈性传染病,历
15、史上曾发生过三次世界性大流行。人类鼠疫是被疫鼠的鼠蚤叮咬而受染,19891998年世界各地报告鼠疫病例共5440余例,死亡681人 形态与染色形态与染色 生物学性状生物学性状培养特性培养特性 营养要求不高:营养要求不高:固体培养基:形成无色透明、中央厚而致密、周固体培养基:形成无色透明、中央厚而致密、周 围菲薄而不整齐边缘的细小菌落。围菲薄而不整齐边缘的细小菌落。肉汤培养基:肉汤培养基:“钟乳石钟乳石”状发育,此特征具有鉴状发育,此特征具有鉴别别 意义。意义。抗原构造抗原构造 1 1F1F1抗原抗原 荚膜抗原,具有抗吞噬作用;荚膜抗原,具有抗吞噬作用;刺激机体产生抗体(保护性抗体)刺激机体产生
16、抗体(保护性抗体)2 2V V和和W W抗原抗原 同一质粒编码。同一质粒编码。与毒力有关,能抑制吞噬细胞的吞噬作用。与毒力有关,能抑制吞噬细胞的吞噬作用。3 3外膜蛋白外膜蛋白 与与V-WV-W基因在同一质粒上;基因在同一质粒上;这些蛋白能使细菌突破机体的防御机制。这些蛋白能使细菌突破机体的防御机制。4.4.鼠毒素鼠毒素 是一种外毒素,为蛋白质,具有抗原性。是一种外毒素,为蛋白质,具有抗原性。1 1g g即可使鼠致死,可引起局部坏死和毒血症。即可使鼠致死,可引起局部坏死和毒血症。但对人的损伤作用不清楚。但对人的损伤作用不清楚。抵抗力抵抗力 对理化因素抵抗力较弱。湿热对理化因素抵抗力较弱。湿热7
17、0708010 min8010 min或或1001 min1001 min可杀死该菌。在干燥痰中可存活可杀死该菌。在干燥痰中可存活3 37d7d,在,在蚤粪和土壤中能存活半年至蚤粪和土壤中能存活半年至1 1年以上。年以上。5%5%来苏、来苏、0.1%0.2%0.1%0.2%升汞在升汞在20 min20 min内可将痰液中病菌杀死。内可将痰液中病菌杀死。致病物质致病物质 毒毒力力强强,几几个个细细菌菌即即可可使使人人致致病病,其其致致病病作作用用与与F1F1抗抗原原、V V抗抗原原的的抗抗吞吞噬噬作作用用以以及及鼠鼠毒毒素素和和内内毒毒素素的的毒毒性性作作用用有关。有关。致病性与免疫性致病性与免
18、疫性所致疾病所致疾病 鼠疫是自然疫源性传染病。鼠疫是自然疫源性传染病。传播方式:鼠传播方式:鼠 鼠蚤鼠蚤 鼠。鼠。临床类型:临床类型:腺鼠疫:剧烈的出血坏死性淋巴结炎,多在腹股沟。腺鼠疫:剧烈的出血坏死性淋巴结炎,多在腹股沟。肺鼠疫:吸入染菌尘埃,易暴发流行,死亡率高。肺鼠疫:吸入染菌尘埃,易暴发流行,死亡率高。败血症型鼠疫:(原发性败血症型鼠疫:(原发性/继发性)最严重,死亡率可高达继发性)最严重,死亡率可高达100%100%。死者皮肤常呈黑紫色,故有死者皮肤常呈黑紫色,故有“黑死病黑死病”之称。之称。人人人人呼吸道呼吸道/人蚤人蚤 免疫性免疫性 鼠疫病后能获得持久免疫力,很少再感染。鼠疫病
19、后能获得持久免疫力,很少再感染。体液免疫:体液免疫:针对针对F1 抗原、抗原、V-W抗原的抗体,具有调抗原的抗体,具有调 理吞噬、凝集细菌和杀菌作用;理吞噬、凝集细菌和杀菌作用;细胞免疫:由于鼠疫耶尔森菌主要在吞噬细胞内繁细胞免疫:由于鼠疫耶尔森菌主要在吞噬细胞内繁 殖,因此抗感染能力依赖于细胞免疫和殖,因此抗感染能力依赖于细胞免疫和 吞噬细胞对病菌的消灭。吞噬细胞对病菌的消灭。直接涂片镜检:革兰染色、美蓝染色,观察形态和染色直接涂片镜检:革兰染色、美蓝染色,观察形态和染色 特性。特性。分离培养分离培养 血琼脂平板血琼脂平板 可疑菌落可疑菌落标本标本 作涂片染色、噬菌体裂解试验、血清凝集试验等
20、进作涂片染色、噬菌体裂解试验、血清凝集试验等进 一步鉴定。一步鉴定。免疫荧光试验用于快速诊断。免疫荧光试验用于快速诊断。微生物学检查微生物学检查 鼠疫是烈性传染病,传染性极强,因此须在指定的具有严密鼠疫是烈性传染病,传染性极强,因此须在指定的具有严密防护措施的实验室并严格按照操作规程进行。防护措施的实验室并严格按照操作规程进行。灭鼠灭蚤是切断鼠疫传播环节、消灭鼠疫的根本措施。灭鼠灭蚤是切断鼠疫传播环节、消灭鼠疫的根本措施。鼠疫菌苗有活菌苗、死菌苗和化学菌苗三类。接种途径鼠疫菌苗有活菌苗、死菌苗和化学菌苗三类。接种途径有皮下、皮内、皮上和气雾等,一般在接种后有皮下、皮内、皮上和气雾等,一般在接种后101015 d15 d产产生免疫力,维持约生免疫力,维持约1 1年。年。此外,应加强国境、海关检疫。此外,应加强国境、海关检疫。治疗目前采用磺胺、氯霉素、氨基糖苷类抗生素单独或治疗目前采用磺胺、氯霉素、氨基糖苷类抗生素单独或联合应用,疗效均佳。抗鼠疫血清也有一定疗效。联合应用,疗效均佳。抗鼠疫血清也有一定疗效。防治原则防治原则