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1、批号送检日期检测日期试验类型口初试口复试口重试重（复）试原因口初试不合格，口初试不成立，口稳定性检验1 .第一次细胞传代1.1 操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查设备：超净工作台倒置显微镜、 是否处于完好、清洁状态 是否在验证有效期内是口 否口是口 否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口 否口是口 否口消毒剂检查口 1 %。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月 日口 5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月 日口 1 %来苏儿：批号、效期有效期至：年 月日口 5%来苏儿：批号、效期有效期至：年 月 日备注操作人： 日期： 复核人:日期:1. 2操作前准备
2、工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录物料 确认按照工艺要求准备物品：501nl瓶、 100ml瓶、10ml瓶、橡胶塞、1ml吸管、 10ml吸管、无毛抹布、C级区洁净服及 口罩、吸球、不锈钢盆。灭菌批号有效期至年月日灭菌批号有效期至年月日物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数（瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配7.5%碳酸氢钠木室自配3.0 %谷氨酰胺本室自配0. 25%胰蛋白酶本室自配10000 单位 PS待检新生牛血清对照新生牛血清E-MEM培养基本室自配7.5%碳酸氢钠本室自配3.0%谷氨酰胺木室自配0. 25%胰蛋白酶本室自配10000 单位 PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清
3、细胞 种子 确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS 株）口伸展呈成纤维状口致密单层光亮透明无污染有污染口细胞死亡备注操作人： 日期：复核人:日期:4.3操作 工作时间： 年 月 日 时分至 时分工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录液体 配制生长液配制：配方：400mlE-MEM +1 % （ml/ml） （3.0% 谷氨酰胺）+l%PS+2.6% （ml/ml） + （7.5 %碳酸氢钠）+ 10% （ml/ml）新生牛血清 以配制100. 0ml生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所 需 E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS 7.5% 碳酸氢钠。用10m
4、l吸管抽取对照新生牛血 清及待检新生牛血清加入对应体积的液体 E-MEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM： ml3.0%谷氨酰胺：mlPS:ml7. 5%碳酸氢钠：_ml2、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液ml,加对照新生牛血清mlo3、待检新生牛血清细胞生长液的制备：取上述培养液ml,加待检新生牛血清mlo消化液配制：以400ml体积装量的浓度为 0.25%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（ml/ml） （7.5%碳酸氢钠）。1.计算：7.5% 碳酸氢钠二 20nli X2.0% =0. 4ml2.操作步骤：取装量为20nli的0.25%胰蛋白酶
5、 瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞 消 化、 传代 分种 与细 胞计 数L弃旧生长液，每50nli瓶中加入胰蛋白酶 消化液46ml；2 .待细胞面呈松散状时，弃掉消化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入 8ml生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞 从瓶壁上脱落悬入生长液中4 ,细胞计数5 .使用10ml吸管将细胞悬液种入含细胞生 长液3L转瓶中。是口否口是口否口是口 否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞：用含有待检血清的生长液悬浮的细胞：含待检新生牛血清分种个3L瓶。口含对照新生牛血清分种个3L瓶口培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37转瓶培 养。是口否口细胞 使用 情况细胞名称
6、使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS 株）备注操作人：日期：年 月 日复核人：日期：年 月 日操作人：复核人：检查人：日期：年月日期：年月日日期：年月日4.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需 在房间门上悬挂“待处理”标志 牌，关闭日光灯。悬挂“待处理”标志牌，关闭日光灯。合格口 不合格口按生产区清场、清洁、消 毒管理标准操作规程对操作区 域进行清洁、消毒。将不锈钢盆、桶、250nli瓶、500ml瓶、 橡胶塞、3L瓶、吸管、送到洗刷间清 洗。合格口 不合格口按要求悬挂状态标识。正确悬挂状态标识牌标识。合格口 不合格口废弃物装袋放固定位置送出。废弃
7、物装袋放固定位置送出。合格口 不合格口5.新生牛血清支持细胞增殖试验相对生长率计算：每次传代进行细胞计数，计算待检血清与对照血清的相对生长率（RGR）。RGR=（待检血清细胞平均数/对照血清细胞平均数）X100%RGR不低于95%细胞传代RGR结论第一次细胞传代口合格口不合格第二次细胞传代口合格口不合格第三次细胞传代口合格口不合格6.新生牛血清支持细胞增殖检查判定结果:批号结论操作人：日期：年 月 日复核人：日期： 年 月 日细 胞 增 殖 检 查 记 录细胞种子确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS 株）口伸展呈成纤维状口致密单层口光亮透明口无污染 口有污染口细胞
8、死亡操作人： 日期：复核人: 日期:L3操作工作时间：年 月 日 时 分至 时 分工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录液体 配制生长液配制：配方:100mlE-MEM +1% （ml/ml） （3.0 %谷氨酰胺）+l%PS+2.6% （ml/ml）（7. 5%碳酸氢钠）+ 10% （ml/ml）新生 牛血清以配制100. 0ml生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所 需 E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS、7.5% 碳酸氢钠。用10ml吸管抽取对照新生牛 血清及待检新生牛血清加入对应体积的液 体E MEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM： ml
9、3.0%谷氨酰胺：mlPS: ml7.5%碳酸氢钠：_ml2、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液ml,加对照新生牛血清mlo3、待检新生牛血清细胞生长液的制备：取上述培养液ml,加待检新生牛血清mlo消化液配制：以20ml体积装量的浓度为 0.25%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（ml/ml） （8.0%碳酸氢钠）o1 .计算：7. 5% 碳酸氢钠二 20nli X2.0% =0. 4ml2 .操作步骤：取装量为20nli的0.25%胰蛋白酶 瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞 消 化、 传代 分种 与细 胞计 数L弃旧生长液，每50nli瓶中加入胰蛋白酶消化液46ml；2 .待细胞
10、面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消 化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加 入8nli生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使 细胞从瓶壁上脱落悬入生长液中4 .细胞计数5 .使用10ml吸管按1： 4分种率将细胞悬 液分种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入 501nl瓶中;是口否口是口 否口是口 否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞：用含有待检血清的生长液悬浮的细胞：含待检新生牛血清分种个50ml瓶，含对照新生牛血清分种个50ml瓶将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37培养。是口否口细胞 使用 情况细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS 株）操作人：日期： 复核人：日期：1.
11、4待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者年 月日口贴壁良好未贴壁口伸展呈成纤维状 口未伸展的球状口光亮透明口浑浊致密单层薄单层 口未成单层口可见较多分裂相 可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落年 月日口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状 口未伸展的球状口光亮透明口浑浊致密单层薄单层口未成单层口可见较多分裂相 可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落年 月日口贴壁良好口未贴壁口伸展呈成纤维状 口未伸展的球状口光亮透明口浑浊致密单层口薄单层 口未成单层口可见较多分裂相 口可见较少分裂相口无污染口有污染口细胞死亡口细胞脱落2.第二次细胞传代2.1操作前检查生产前检
12、查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查培养箱、超净工作台、倒置显微镜、 是否处于完好、清洁状态 是否在验证有效期内是口 否口是口 否口文件记录检杳是否为现用版本是否准备相应记录是口 否口是口 否口消毒剂检查口 1 %。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月曰口 5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月曰口 1 %来苏儿：批号、效期有效期至：年 月曰口 5%来苏儿：批号、效期有效期至：年 月曰备注操作人： 日期： 复核人:日期:2. 2操作前准备工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录物料 确认按照工艺要求准备物品：25cn)2细胞 瓶、100ml瓶、10ml瓶、橡胶塞、Ind灭菌批号有效期至年
13、月日吸管、10ml吸管、分装管道、无毛抹 布、吸球、不锈钢盆、桶。C级区洁净 服及口罩、灭菌批号有效期至年月日物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数量（瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配7.5%碳酸氢钠本室自配3.0%谷氨酰胺本室自配0. 25%胰蛋白酶本室自配10000 单位 PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞 种子 确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS 株）口伸展呈成纤维状致密单层光亮透明口无污染 口有污染口细胞死亡备注操作人： 日期： 复核人:日期:2.3操作工作时间：年 月 日 时 分至 时 分工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录液体 配制生长
14、液配制：配方：100mlE-MEM +1% （ml/ml） （3.0% 谷氨酰胺）+KPS+2.6% （ml/ml） （7.5% 碳酸氢钠）+ 10% （ml/ml）新生牛血清 以配制100. 0ml生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所 需 E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS . 7.5% 碳酸氢钠。用10ml吸管抽取对照新生牛血 清及待检新生牛血清加入对应体积的液体 E-MEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM：ml3.0%谷氨酰胺：mlPS: ml7.5%碳酸氢钠：ml2、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液ml,加对照新生牛血清ml
15、o3、待检新生牛血清细胞生长液的制备：取上述培养液ml,加待检新生牛血清mlo消化液配制：以20ml体积装量的浓度为 0.25%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（ml/ml） （7.5%碳酸氢钠）。1.计算：7. 5% 碳酸氢钠二 20ml X2.0% =0. 4ml2.操作步骤：取装量为201nl的0.25 %胰蛋白酶 瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞 消 化、 传代L弃旧生长液，每25cn）2瓶中加入胰蛋白酶 消化液46ml；2,待细胞面呈松散状时，弃掉胰蛋白酶消是口否口是口否口分种 与细 胞计 数化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入 8nli生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细胞
16、从瓶壁上脱落悬入生长液中4 .细胞计数5 .使用10ml吸管按L 4分种率将细胞悬液 分种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入3L瓶 中；是口否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞： 用含有待检血清的生长液悬浮的细胞：含待检新生牛血清分种个25cllI?瓶，含对照新生牛血清分种个25cm2瓶培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37培养。是口否口细胞 使用 情况细胞名称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS 株）备注操作人： 日期：复核人： 日期：2.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需 在房间门上悬挂“待处理”标志 牌，关闭层流罩，日光灯。悬挂“待处理”标
17、志牌，关闭层流罩， 日光灯。合格口不合格口按生产区清场、清洁、消 毒管理标准操作规程对操作区 域进行清洁、消毒。将不锈钢盆、桶、250ml瓶、500nd瓶、 橡胶塞、吸管、送到洗刷间清洗。合格口不合格口按要求悬挂状态标识。正确悬挂状态标识牌标识。合格口不合格口废弃物装袋放固定位置送出。废弃物装袋放固定位置送出。合格口不合格口操作人： 日期：复核人： 日期:检查人： 日期:2. 5待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落口未成单层
18、年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相 口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口未成单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相 口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口可见较少分裂相口有污染口细胞脱落口未成单层3.第三次细胞传代3.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况生产环境检查操作间名称：细胞制备间 环境温度1526 相对湿度3070%是口否口是口否口设施、设备检查培养箱、洁净工作台、倒置显微镜、 是否处于完好、清洁状态 是否在验证有效期内是口 否口是口
19、否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口否口是口否口消毒剂检查口 1 %。新洁尔灭：批号、效期有效期至年 月 日口 5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至年 月 日口 1 %来苏儿：批号、效期有效期至年 月 日口 5%来苏儿：批号、效期有效期至年 月 日备注操作人： 日期： 复核人:日期:3. 2操作前准备工艺步骤操作标准及工艺要求过程记录物料 确认按照工艺要求准备物品：50ml瓶、100mL 瓶、10ml瓶、橡胶塞、1ml吸管、10ml吸 管、无毛抹布、吸球、不锈钢盆、桶、C 级区洁净服及口罩、物品在灭菌有效期内：是口 否口灭菌批号：有效期至：年月日灭菌批号：有效期至：年月日物料名称来
20、源规格（ml/瓶）批号领入数量 （瓶）有效期至E-MEM培养基本室自配7.5%碳酸氢钠本室自配3.0%谷氨酰胺本室自配0. 25%胰蛋白酶本室自配10000 单位 PS本室自配待检新生牛血清对照新生牛血清细胞 种子 确认细胞名称代次瓶型数量（瓶）日龄生长情况人胚肺二倍体细胞（2BS 株）口伸展呈成纤维状口致密单层光亮透明无污染口有污染口细胞死亡备注操作人： 日期： 复核人:日期:3.3操作 工作时间：年 月 日 时分至 时分工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录液体配制生长液配制：配方：100mlE-MEM +1% （ml/ml） （3. 0% 谷氨酰胺）+l%PS+2.6% （ml/ml） （
21、7.5% 碳酸氢钠）+ 10% （ml/ml）新生牛血清 以配制100. 0ml生长液为例。按配方计算出配置一定体积的生长液所 需 E-MEM、3.0%谷氨酰胺、1%PS、7.5% 碳酸氢钠。用10ml吸管抽取对照新生牛血 清及待检新生牛血清加入对应体积的液体 E-MEN培养基中，盖橡胶塞摇匀待用。1、不含血清MEM培养液配制：E-MEM：ml3.0%谷氨酰胺：mlPS: ml7.5%碳酸氢钠：ml2、对照新生牛血清细胞生长液的配制：取上述培养液ml,加对照新生牛血清mlo3、待检新生牛血清细胞生长液的制备：取上述培养液ml,加待检新生牛血清mlo消化液配制：以20ml体积装量的浓度为 0.2
22、5%胰蛋白酶为基质液，加入2.0%（ml/ml） （7.5%碳酸氢钠）。1.计算：7.5% 碳酸氢钠= 20nli X2.0% =0. 4ml2.操作步骤：取装量为20ml的0.25%胰蛋白酶 瓶，每瓶按上述同样的方法配制。细胞 消 化、 传代 分种 与细 胞计 数L弃旧生长液，每50ml瓶中加入胰蛋白酶 消化液46ml；2 .待细胞面呈松散状时，弃掉消化液；3 .将消化好的细胞加入生长液，每瓶加入 200nli生长液悬浮细胞，摇动细胞瓶，使细 胞从瓶壁上脱落悬入生长液中4 .细胞计数5 .使用10ml吸管按L 4分种率将细胞悬液 分种于生长液瓶中，振荡摇匀后加入50mL 瓶中；是口否口是口
23、否口是口否口细胞计数：用含有对照血清的生长液悬浮的细胞：用含有待检血清的生长液悬浮的细胞： 含待检新生牛血清分种个50nli瓶口含对照新生牛血清分种个50ml瓶口培养将细胞瓶内细胞悬液摇匀，置37培养。是口否口操作人：复核人：检查人：日期：年月日日期：年月日日期：_年月日细胞 使用 情况细胞铭称使用数（瓶）剩余数量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍体细胞（2BS 株）备注操作人： 日期： 复核人:日期:3.4清场操作:清场要求清场过程确认结果在生产完成后清场操作前需 在房间门上悬挂“待处理”标志 牌，关闭层流罩，日光灯。悬挂“待处理”标志牌，关闭层流罩， 日光灯。合格口不合格口按生产区清场、清洁、消 毒
24、管理标准操作规程对操作区 域进行清洁、消毒。将不锈钢盆、桶、250ml瓶、500ml瓶、 橡胶塞、3L瓶、吸管、送到洗刷间清 洗。合格口不合格口按要求悬挂状态标识。正确悬挂状态标识牌标识。合格口不合格口废弃物装袋放固定位置出。废弃物装袋放固定位置送出。合格口不合格口3. 5待检血清传代细胞观察观察日期细胞生长情况操作者复核者年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊口薄单层口未成单层口可见较少分裂相有污染口细胞脱落年月H口贴壁良好口伸展呈成纤维状光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁未伸展的球状口浑浊口
25、薄单层口未成单层口可见较少分裂相有污染口细胞脱落年月日口贴壁良好口伸展呈成纤维状口光亮透明口致密单层口可见较多分裂相口无污染口细胞死亡口未贴壁口未伸展的球状口浑浊薄单层口未成单层口可见较少分裂相有污染口细胞脱落4.第三次细胞传代后细胞计数4.1操作前检查生产前检查项目生产前检查内容检查情况设施、设备检查设备名称：超净工作台、倒置显微镜、转瓶机 是否处于完好、清洁状态。是否在验证内。是口否口是口否口文件记录检查是否为现用版本是否准备相应记录是口 否口是口 否口消毒剂检查口 1 %。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月曰口 5%。新洁尔灭：批号、效期有效期至：年 月曰口 1 %来苏儿：批号、效期有效期至：年 月曰口 5%来苏儿：批号、效期有效期至：年 月曰备注操作人： 日期：复核人:日期:4. 2操作前准备工艺 步骤操作标准及工艺要求过程记录物料 确认按照工艺要求准备物品：250nli瓶、 3L瓶、500ml瓶、10ml瓶、橡胶塞、 1ml吸管、10ml吸管、无毛抹布、吸 球、不锈钢盆、桶。灭菌批号：有效期至：年月日灭菌批号：有效期至：年月日物料名称来源规格（ml/瓶）批号领入数量（瓶）有效期至