《细胞质RNA提取实验.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞质RNA提取实验.docx（1页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、细胞质RNA提取实验材料与仪器RNAPBS细胞裂解液SDS蛋白酶K酚氯仿异戊醇无水乙醇离心机培养箱步骤1 .对于单层培养细胞(1)每10 cm培养皿培养的细胞，用冰冷PBS洗涤3次。(2)每次1ml然后用小体积PBS刮下细胞，转移至冰浴的离心管中。(3) 300 g离心5 min,弃上清,继续冰浴。2 .对于悬浮培养细胞(1 ) 300 g离心5 min,弃上请。(2)细胞以1/2原体积的冰冷重悬，再离心后弃上清。3 .重悬细胞于3753冰冷的细胞裂解缓冲液，并置冰浴5 min。4 .于4在微量离心机中离心2 min,将上清移至一个洁净的已加有5(11 20%SDS 的管中，立即在旋涡混合器上
2、振荡。5 .力口入2.5m20 mg/ml蛋白酶K, 37温育15 min。6 .加入400 M酚/氯仿/异戊醇抽提，在旋涡混合器上振荡用微量离心机离心， 上清移至干净的离心管中，重复抽提1遍。7 .再以400m氯仿/异戊醇抽梗，上层水相转移至干净的离心管中。8 .力口入401113 mo1/1乙酸钠缓冲液(pH7.5),再加无水乙醇，混匀后在干冰/ 乙醇中沉淀1530 min或-20过夜。9 .用微量离心机4离心15 min加入1 ml 75%乙醇/25% 0.1 mol/1乙酸钠(pH5.2) 冼涤沉淀。10 .干燥后用100Pd处理过的水重溶沉淀，取IOrIRNA稀释于1 ml水中，测 A280和A260,其与的RNA可在-70C贮存。