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1、ICS65.020.40B61DB23黑龙江省地方标准DB23/T23232019软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程2019-03-19发布2019-04-18实施黑龙江省市场监督管理局发布DB23/T23232019前言本标准依据GB/T1.12009的编写规则起草。本标准由黑龙江省林业和草原局提出并归口。本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业监测规划院。本标准主要起草人：田新华、李京、周伟政、张玲、卢慧颖、李艳霞、张妍妍、张建瑛、姜天瑞、温爱亭、李念森、黄俊杰、毛洪波、于腊梅、于晓杰、韩贤波、白吉福、徐英华。IDB23/T23232019软枣猕猴桃组培快繁育苗技术规程1范围本标准
2、规定了软枣猕猴桃（ActinidiaargutaPlaneh.）组培快繁育苗技术的仪器设备、环境和设备消毒、培养基制备、外植体培养、炼苗与移栽、生产档案。本标准适用于软枣猕猴桃组培快繁育苗。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6001育苗技术规程LY/T1882林木组织培养育苗技术规程DB23/T1589蓝靛果种苗组培快繁技术规程3仪器设备应符合DB23/T1589的规定。4环境和设备消毒4.1接种室消毒接种前用紫外灯照射30min。4.2培养室消毒每
3、周用臭氧消毒40min。4.3超净工作台的消毒接种前用紫外灯照射30min并用70酒精擦拭台面，定期清洗超净工作台过滤膜。4.4接种器具的消毒使用前将枪式镊子、解剖剪、培养皿、解剖刀进行高温蒸汽消毒；接种过程中采用酒精灯灼烧消毒。5培养基制备5.1母液配制按照LY/T1882的规定执行。5.2培养基配制1DB23/T23232019按照LY/T1882的规定执行。诱导培养基：MS培养基+6-BA0.5mg/L+ZT1.0mg/L；继代增殖培养基：MS培养基+6-BA1.0mg/L+ZT0.5mg/L；生根培养基：MS培养基+IBA0.2mg/L。5.3培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌，在压力0.10
4、5MPa、温度121条件下灭菌20min。锅内的灭菌物以不超过锅容量的3/4为宜。5.4培养基保存灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下宜在7d内使用，24条件下14d内使用。培养基应保存于洁净环境中，避免阳光直射。6外植体培养6.1外植体的选择选择生长健壮、无病的植株作为采样母株，剪取当年生的半木质化的茎段作为外植体，采样时间宜选择晴天或露水干后。6.2外植体灭菌先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗30min后，将外植体放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶放入超净工作台，打开消毒瓶倒入0.1%升汞并摇晃，浸泡消毒3min取出，用无菌水冲洗5次；再用无菌水浸泡40min，用无菌滤纸吸
5、干外植体表面的水分。6.3外植体接种与诱导培养将培养瓶的封口膜取下，瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将表面消毒后的外植体用手术剪刀剪去两端，剪取长约1.0cm左右的带有单个腋芽的茎段接种于诱导培养基。每个培养瓶放3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养35d后进行继代增殖培养。6.4继代增殖培养外植体经诱导培养生成丛生芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养35d后再进行继代增殖培养。6.5生根培养选取培养瓶中长度1.5cm2.0cm生长健壮的芽接种至生根培养基中，组培苗生长过程中在基部会出现浅绿色嫩根，培养35d后平均生根数3条以上，根长在1.0cm以上
6、即可炼苗。6.6组培苗培养条件培养室的温度控制在242，相对空气湿度控制在70%80%，光照强度为2000Lux3000Lux，光照时间为12h/d。7炼苗与移栽2DB23/T232320197.1组培苗炼苗将装组培苗的培养瓶从培养架上轻轻取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在2025，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，封口炼苗3d5d。封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5cm高的自来水，温度控制在2025，炼苗1d2d后即可移栽。7.2移栽用手指或镊子轻轻取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，速蘸0.5%高锰酸钾溶液消毒，移栽至装有黑壤土和粗河沙（混合比例为2：1）的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为35cm50cm，育苗盘四壁高度不能低于7cm，装入育苗盘中的基质厚度不应小于5cm。7.3移栽苗管理育苗期保持育苗基质见干见湿，育苗水分管理按照GB/T6001的规定执行。温室空气湿度应保持60%左右，温度控制在2025。8生产档案应建立生产档案，内容包括：培养基制备、外植体的选择、外植体灭菌、外植体接种与诱导培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗与移栽。3