动物传染病实验课教案.docx

《动物传染病实验课教案.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物传染病实验课教案.docx（11页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。

1、学习必备欢送下载试验一 病料的取材和送检目的 1.学会被检病料的实行、保存、包装和记录方法内容和方法一留意事项：1. 剖检前的检查 急性死亡，镜检末梢血中是否有炭疽菌存在；须排解炭疽；疑为炭疽制止剖检。2. 器械的消毒，操作应留意无菌。3. 合理取材（1） 首先了解该传染病的流行状况、临床病症、病理解剖检查。（2） 针对性，采集适宜的样本进展检验/全面取材，即依据不同的传染病，相应地实行该病常侵害的脏器或内容物，如败血性心、肝、脾、肺、肾、淋巴结等；肠毒血症肠内容物；神经病症脑；无法估量全面采集。（3） 微生物学检查，所采样本应未经抗菌素治疗者。4. 取材时间 越早越好，一般46h。5. 挨次

2、接种培育采样剖检病理。6. 作好个人防护与环境消毒。二病料的实行1. 组织、脏器：供病理切片 22cm2. 血液、血清：供血清学反响可参加5%石炭酸 12 滴；全血采集应参加抗凝剂。3. 脓汁、创伤感染样品4. 鼻咽分泌物5. 粪便6. 胃肠内容物三病料的保存1. 细菌检验病料_30%甘油缓冲盐水；2. 病毒检验病料_50%甘油缓冲盐水；3. 病理组织学材料_10%福尔马林溶液，1:10；24h 后换液一次。四病料的运输1. 标号(样本、包装)，记录，附病料送检单一式两份：详见教材 pag21。2. 包装容器密封、冷藏/不冷藏试验二免疫接种目的：1. 把握免疫接种的方法、步骤2. 生疏兽医生物

3、制品的保存、运输、用前检查方法内容及方法1生物制品的用前检查外包装：瓶签、密封性等；生物制品的用前检查（1） 购置专业化知名疫苗生产厂具有正式批准文号的疫苗。（2） 购置时应检查外包装、制品名称、产地、生产厂名、批号、有效期、物理性状、贮存条件等是否与说明书相符。如有瓶子裂纹、胶塞松动、油乳剂破乳、色泽及其它物理性状与说明书 不符者不得使用。生物制品的保存、运输严格依据说明书的要求进展运输、贮存和保管，特别是要求低温保存的冻干苗应更加留意原则：低温、枯燥灭活苗、免疫血清等应保存在 215，防止冻结； 弱毒苗应置于 0以下，冻结保存。免疫前留意：（1） 依据试验室监测状况，制定免疫程序，打算免疫

4、时间。（2） 免疫接种只针对安康畜群。（3） 接种前后应削减应激反响，弱毒菌苗前后各 10 天不得用抗生素和含抗生素类药物的饲料；免疫病毒活苗前后各 7 天不能用抗病毒药物，但可在饮水或饲料中添加抗生素、维生素等抗应激的物质。（4） 免疫当天制止对畜禽舍消毒。（5） 搞好器械消毒。最好用高温、蒸煮等方法消毒，不要用化学消毒剂消毒针头、注射器及其它直接接触疫苗的容器。（6） 用前检查：疫苗说明书与瓶签是否相符，检查物理性状、贮存条件等，如有瓶子裂纹、胶塞松动、油乳剂破乳、色泽及其它物理性状与说明书不符者不得使用。（7） 使用专用稀释液或清洁、不含氯等任何消毒剂的生理盐水、蒸馏水、凉开水或深井水进

5、展稀释，（8） 禁用金属容器，器皿应清洁，无洗涤剂和消毒剂残留接种方法及步骤方法：1. 饮水2. 滴眼滴鼻3. 肌肉或皮下注射4. 气雾免疫5. 翼膜刺种6. 擦肛1、饮水免疫关于饮水免疫的优缺点：A 削减应激，节约人力；但疫苗损失较多。B 雏鸡的强弱或密度会造成饮水不匀，免疫程度不齐。饮水免疫留意：（1） 接种前 24h 饮水中不能参加消毒剂。禁用金属容器，器皿应清洁，无洗涤剂和消毒剂残留。（2） 用清洁、不含氯等消毒剂和铁离子的凉开水、深井水；加12脱脂奶或参加 5 克/L 脱脂奶粉以延缓疫苗效价的衰减时间。（3） 免疫前停水h，以确保/的鸡同时饮水。（4） 确保疫苗在h 内用完。（5）

6、通常疫苗使用量比瓶签标注量应至少增加一倍。2、滴眼、滴鼻免疫雏鸡早期接种弱常用此法。该方法的优点表达在：局部免疫和体液免疫共存。滴鼻时 为了使疫苗很好地吸入，可用手将对侧的鼻孔堵住，让鸡吸进去。滴眼时，握住鸡的头部，面朝上， 将一滴疫苗滴入面朝上一侧的眼皮内，不能让其流掉。一只一只免疫，防止漏免。3、肌肉或皮下注射免疫效果准确，但有费力和产生应激等缺点。（1） 安康鸡群先注，弱鸡最终注射。（2） 肌肉注射以翅膀靠肩部、胸部肌肉为好。（3） 颈部皮下注射，远离头部。4、气雾免疫在短时间内，可使大量鸡吸入疫苗获得免疫。多用于加强免疫，本法为刺激呼吸道粘膜，所以避开在初次免疫时使用。对于有鸡毒支原体

7、感染/患其他慢性呼吸道病的鸡场可导致严峻不良反响，应慎用。气雾免疫留意（1） 用量按鸡舍设计和饲养量计算并适当增加通常加倍，稀释液每 1000 只平养鸡用量为 200400 毫升，用适当粒度3050m的喷雾器在鸡群上离鸡 0.5m 处喷雾。让鸡充分吸入空气中带疫苗病毒的雾滴。（2） 免疫前应关闭门窗和通风系统，喷雾完毕后至少保持 30 分钟然后再通风，以取得良好的免疫效果。5、刺种免疫接种针应在翼膜无血管处穿刺，病毒在穿刺部位的皮肤处增殖产生免疫。对于各种方法的免疫后应留意（1） 剩余药液及疫苗瓶应进展消毒做无害化处理，不行乱扔，以免散毒污染环境。（2） 一般57 天油苗1015 天才产生抗体

8、，故应严格掌握环境卫生，以免在产生免疫力前感染强毒导致免疫失败。（3） 留意观看鸡群反响状况，消灭特别及早实行措施。（4） 做具体记录，登记疫苗批号、使用日期、使用量等，并保存同批样品两瓶，消灭不良反响准时处理，查找缘由。试验三 炭疽试验室诊断目的：1、把握炭疽试验室诊断的方法步骤。试验材料：显微镜、载玻片、剪刀、镊子、瑞氏染液、一般琼脂平板、接种环、酒精灯、恒温培育箱、炭疽沉淀素、炭疽标准抗原、生理盐水、平皿、试管、乳头滴管、水浴锅/电炉试验动物及样本：送检病料/接种炭疽无毒芽孢弱的小白鼠试验内容：1. 形态学诊断：(1) 取病畜濒死或刚死亡动物的血液/组织涂片触片(2) 用瑞氏染色法染色(

9、3) 镜检注：瑞氏(Wright)染色法a 涂/触片自然枯燥b 瑞氏染液染 1min 加等量pH6.4 磷酸盐缓冲液晃动玻片混匀静止5 min 水洗吸干镜检2. 培育检查无菌取材接种一般培育基37,1824h观看菌落3. Ascoli 试验a. 取沉淀反响管 3 支各加 0.1ml 炭疽沉淀素血清。b. 将待检抗原沿管壁轻轻参加其中一支,使其重叠在炭疽沉淀素血清上，使上下两液间有一整齐界面。c. 另二支沉淀反响管，其中一支加炭疽标准抗原;另一支加生理盐水，作为比照，方法同上。 d.将反响管直立静置，3-5min 内判定结果。试验四 布氏杆菌病的检疫目的：1. 把握布氏杆菌病的血清学检疫方法2.

10、 生疏布氏杆菌病的血清学诊断的操作方法和结果的观看、判定原理：颗粒性抗原细菌等与相应的抗体混合后，在电解质的参与下经过肯定时间，抗原抗体凝集成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反响。直接凝集反响可分为玻片凝集与试管凝集。(一)平板凝集反响材料与试剂1. 玻璃板、刻度吸管2. 布氏杆菌凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阴性血清、待检血清、生理盐水。试验方法：1. 取一干净玻片，用蜡笔划成方格，编号2. 各方格分别加待检血清 0.08、0.04、0.02、0.01 lm3. 比照：阳性-阳性血清；阴性-阴性血清4. 用牙签混匀，摊开直径 1cm 左右编号待检1待检血清ml 0.08待检2

11、0.04待检30.02待检40.01阳性比照 阴性比照标准抗原ml 0.030.030.030.030.030.03阳性血清 阴性血清0.030.035. 将凝集抗原摇匀，垂直滴一滴( 0.03ml )于各格血清上6. 静置 3-4 分，再拿起玻板轻轻转动，按以下标准记录反响结果：+ 消灭大的凝集块，液体完全清亮透亮，即100%凝集+有明显凝集片和颗粒，液体几乎完全透亮，即75%+ 可以观察颗粒，液体不甚透亮，即50%凝集+仅仅可以观察颗粒，但液体混浊，即25%凝集-液体均匀混浊，无凝集现象7. 结果判定：(二)试管凝集反响材料与试剂1. 试管、试管架、刻度吸管、恒温箱2. 布氏杆菌凝集抗原、

12、布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阴性血清、布氏杆菌待检血清、生理盐水。试验方法1. 每份血清用 4 支试管，别取比照管 3 支，共 7 支。2. 稀释血清和参加抗原的方法如下：各管按下表所示参加 0.5%石炭酸生理盐水，后加 0.2ml 被检血清至第 1 管中，混匀，吸出1.5ml 弃去，再吸 0.5ml 至第 2 管，混匀，吸 0.5ml 至第 3 管，依次至第 4 管，混匀，吸弃 0.5ml， 第 5 管中不加待测血清，第 6 管中加 1:25 稀释的布氏杆菌阳性血清 0.5ml，第 7 管中加 1:25 稀释的阴性血清 0.5ml。3. 各管参加抗原后，七管同时混匀，37 410h，取

13、出后室温 1824h，观看并记录结果4. 确定血清凝集价时，应当消灭+以上凝集现象的最高稀释度为准。24 小时后观看结果+ 消灭大的凝集块沉于管底，液体完全清亮透亮，即100%凝集+有明显凝集片和颗粒沉于管底，液体几乎完全透亮，即 75%+可以观察颗粒沉于管底，液体不甚透亮，即50%凝集+仅仅可以观察颗粒，液体混浊，即25%凝集-液体均匀混浊，无凝集现象判定标准：牛、马和骆驼凝集价 1：100 以上；猪、山羊、绵羊和狗 1：50 以为上阳性。牛、马和骆驼 1：50；猪、羊等 1：25 为可疑。试验五 鸡城疫的免疫监测目的:1. 把握鸡城疫血清学诊断和免疫监测的方法2. 了解鸡城疫血清学诊断免疫

14、监测的判定标准血凝试验AI和血凝抑制试验HI微量法试验原理HA城疫病毒纤突上含有血凝素，能不同程度地凝集某些动物的红细胞HI城疫病毒+红细胞 红细胞凝集城疫病毒+抗体 抗原抗体复合物+红细胞 红细胞不凝集材料与试剂1. V 型血凝板、加液枪、刻度吸管2. 城疫抗原、阳性血清、阴性血清、待检血清、生理盐水、1%的红细胞。HA方法：一血凝试验HA：取 96 孔板，按以下步骤操作：1、第一排 1-12 孔各加生理盐水 50ul，其次排 1-12 孔加生理盐水 50ul 为红细胞比照；2、吸 50ul 病毒液于第一排第 1 孔，混匀后取 50ul 至第 2 孔，依次稀释至第 12 孔，弃去 50ul，

15、 各孔经倍比稀释后稀释度依次为 2-12-12 。3、第一排 1-12 孔及其次排 1-12 孔各加 1%鸡红细胞 50ul，微型震荡器震荡 2min 混匀。4、室温静置 10-30 分，观看结果。5、结果判定：红细胞比照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI 效价，用 2n 表示。结果判定：以消灭完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度。留意:由于城疫病毒含有神经氨酸酶，它能破坏红细胞外表的血凝素受体，使凝集的病毒从红细胞上解脱下来，所以要准时观看结果。HI方法二血凝抑制试验HI：取一 96 孔板，按以下步骤操作：1、4 个单位抗

16、原的制备：按HA 试验测出的病毒血凝价乘 4 即为 4 个单位血凝素的稀释度。2、待检血清的稀释：第一、二、三排 1-12 孔各加生理盐水 50ul，于第一排第 1 孔中参加 50ul 待检血清，反复吹吸 3-5 次混匀后，取 50ul 至第 2 孔混匀，吸取 50ul 至第 3 孔,依次稀释至第12 孔，弃去 50ul，经倍比稀释，血清的稀释度为 2-12-12 。3、第一、二排 1-12 孔各加 4 个单位血凝素 50ul，微量震荡器震荡 2min 混匀；4、室温静置 20min；5、第一、二、三排 1-12 孔各加 1%鸡红细胞 50ul，微量震荡器震荡 2min 混匀混匀。6、室温静置

17、 10-30 分，观看结果；结果判定以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制HI滴度。鸡群 HI 滴度的凹凸在肯定程度上反映了免疫保护水平的凹凸。鸡群HI 滴度的凹凸在肯定程度上反映了免疫保护水平的凹凸。 HI 滴度在 1：24 的鸡群保护率约为 50%；在 1：24 以下的非免疫鸡群约为 10%，免疫鸡群约为 40% ；HI 滴度在 1：2610 的鸡群保护率达 90%以上。假设鸡群消灭 1：211 或以上的HI 滴度，说明鸡群已发生城疫野毒的感染。试验六 鸡传染性法氏囊病的抗体检测目的：生疏和把握鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。原理：可溶性抗原和抗体的可以在琼脂凝胶中集中，当抗

18、原、抗体相遇时发生特异性结合，在最适处发生沉淀，此沉淀物因颗粒较大而不集中，形成肉眼可见的白色沉淀带。材料与试剂一般琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、V 型血凝板、玻璃板、生理盐水鸡法氏囊阳性血清、法氏囊标准抗原、待检卵黄抗体/血清方法1. 琼脂板的制备：1g 优质琼脂溶于含 0.1%石炭酸的 8%氯化钠溶液 100ml。用时倒在平皿内或置于玻片上，琼脂厚度 2.53mm。2. 打孔：用打孔器在琼脂平板上打孔，中心 1 个孔,四周 6 个孔，形成梅花形图案。要求：孔径 4mm，孔距 3mm。3. 挑出孔内琼脂。4. 封底：在火焰上缓缓加热，使孔底的琼脂略熔化封底，避开加样后液体从孔底渗漏。

19、5. 卵黄液进展倍比稀释。V 型板先在第一排每孔加生理盐水 50 l，再在第一孔加 50 l 的卵黄液, 反复吹吸 3 次后，吸50 l 混和液参加第 2 孔，吹吸混匀，依次倍比稀释至第4 孔最终一孔吸 50 l 弃去，这样1 至 4 孔的抗体稀释倍数依次为 1:2、1:4、1:8 和 1:16。6. 加样：在中心孔加法氏囊标准抗原约 50 l。第 1 孔加法氏囊标准阴性血清；第 2 孔加法氏囊标准阳性血清。3、4、5、6 孔分别加原液、1:2、1:4、1:8、1:16的待检卵黄液。每孔以加满为度。7. 加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，在37下自由集中 24-48 小时。结果判定：

20、假设待检血清与抗原孔之间消灭白色沉淀线，则表示阳性，假设不消灭沉淀线，为阴性。假设用于检测血清效价，则以消灭沉淀线的血清最高稀释倍数表示2n。用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。留意事项1. 做好标记，防止挨次混乱。2. 挑剔琼脂时留意不要挑破琼脂边缘。3. 加样时，留意不要产生气泡，以加满为度。否则影响反响结果。试验七 鸡马立克氏病的血清学诊断一、MD 诊断依据MD 是高度接触传染性的，在商业鸡群中几乎是无所不在，但在感染鸡中仅有一小局部发生 MD，此外，接种疫苗的鸡虽然能得到保护不发生MD，但仍能感染 MD 强毒，因此是否感染 MDV 不能作为诊断MD 的标准。主要依据临诊病

21、症和病理变化。血清学和病毒学方法可用于鸡群感染状况的监测，但不能作为发生MD 的诊断依据。二、鸡群MDV 感染状况的监测一般承受琼脂集中的血清学方法，检测鸡血清中的MD 特异抗体或鸡羽髓中的MD 抗原。目的：1 生疏鸡马立克氏病的诊断方法原理：可溶性抗原与相应抗体结合在半固体琼脂中后,在适量电解质存在下，经过肯定时间形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反响。材料与试剂8%NaCl 琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、生理盐水马立克标准阳性血清、马立克标准琼扩抗原、待检羽髓操作方法(1) 打孔：用打孔器对琼脂平板打孔，中心打1 个孔,四周再打 6 个孔孔径4mm，孔距3mm，形成梅花形图案。(2)

22、用针头挑出孔内琼脂,留意不要挑破孔缘。(3) 封底：在火焰上缓缓加热，微微烫即可。使孔底边缘的琼脂少许熔化以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。(4) 加样：在中心孔加MD 阳性血清，向周边1、4 孔加标准MD 琼扩抗原，2、3、4 5 孔加待检羽髓浸液加数滴生理盐水在EP 管内挤压，浸泡。6 孔加生理盐水每孔约加 50l，以加满为度。(5) 加完后，盖上平皿盖，置湿盘中，在37下自由集中 24 小时。结果判定被检样品孔与中心孔之间形成清楚的沉淀线，并与周边抗原的沉淀线相互融合者，判为阳性；不消灭沉淀线的判为阴性。留意事项1） 在平皿上贴好标签,防止弄混。2） 挑琼脂时留意不要挑破琼脂边缘。3）

23、肯定要封底。4） 加样时,留意不要产生气泡,以加满为度,否则影响反响结果。5） 每加完不同的样后要更换枪头，以免造成污染。试验八 传染病的试验室诊断一、细菌性传染病的诊断1、病料的采集和处理 ：避开杂菌污染、不同期不同标本、用抗菌素以前、标本必需颖、运送留意保存的问题。1有病灶：采集病变明显部位2) 没有病灶：不同期不同标本；不同系统疾病不同侧重点，如：常侵害的脏器或内容物。2、病原菌的检查程序1） 直接涂片镜检。初步诊断2） 细菌分别据不同的目的选择不同的培育基亮绿、伊红-美兰、血红素马丁纯培育。3） 生化试验4） 血清学试验：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合试验双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价上升4 倍者方有意义5） 动物试验6） 药敏试验明确诊断3、分子生物学技术4、其他检测技术二 、病毒性传染病的诊断病料的采集和处理：考虑V 嗜器官性、含毒量1、病毒分别、培育：鸡胚、细胞培育2、血清学检查：AGP、HI需阳性血清 血清学检查：+/- ；滴度双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价上升4 倍者方有意义