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1、2023年全国职业院校技能大赛高职组“食品安全与质量检测”竞赛食品微生物检验技能考核任务1 菌落总数测定（样品5） 现场操作规程及要求赛位号：【注意事项】：1考虑竞赛的时间要求以及公平公正的大赛原则，本项目操作规程在参照国家标准GB 4789.2-2022食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定的基础上略有改动。2大赛提供的所有玻璃器材均是经过严格灭菌的，达到无菌要求。竞赛由组委会统一准备质控样品，每位选手独立一份质控样，能够保证检测结果准确度的可评价性。3选手提前10分钟进场。选手入场后可检视仪器设备，如有问题可提出更换；比赛正式开始后不再处理任何仪器设备问题，一切后果选手自负。4比
2、赛过程中请做好相应的安全防护措施，并进行设备使用登记。6比赛时间：50分钟，每超时1分钟扣1分，超时10分钟停止操作。质控样（模拟食品）菌落总数测定由组委会统一准备样品，在参照GB 4789.2-2022食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定基础上略有改动，完成质控样（模拟食品）中菌落总数的测定。1准备工作 根据微生物检验工作相关要求，利用比赛现场提供仪器和材料等，独立完成各项准备工作及正确标识。2样品稀释 按现场提供的质控样作业指导书进行处理，制成待测样品原液。用10毫升改良吸管吸取原液25毫升至盛有225毫升的灭菌生理盐水中，制成10-1样品匀液。用1毫升的改良吸管吸取1毫升10
3、-1匀液至9毫升生理盐水试管中制成10-2样品匀液，依次稀释至10-3、10-4等。同时选择3个适宜稀释度分别吸取1毫升样品匀液至两个无菌培养皿中。用9毫升的生理盐水试管作为空白使用。3. 倾注培养基 每个培养皿倾注约15-20毫升的培养基，待凝固后，倒置放入培养袋。在培养袋上写上批次号和工位号及相关记录。经裁判确认后，培养袋放在超净工作台上即可。（4）培养每一批次结束后由志愿者统一放入培养箱中培养，361培养241小时左右，即置冰箱保存备用。2023年全国职业院校技能大赛高职组“食品安全与质量检测”竞赛食品微生物检验技能考核任务2 细菌染色鉴别（样品5） 现场操作规程及要求赛位号：注意事项：
4、1大赛统一提供标准菌株供选手染色镜检使作，注意每位选手限做1片，镜检结果需举手示意裁判确认。2选手提前10分钟进场。选手入场后可检视仪器设备，如有问题可提出更换；比赛正式开始后不再处理任何仪器设备问题，一切后果选手自负。3比赛过程中请做好相应的安全防护措施，并进行设备使用登记。4比赛时间：30分钟，每超时1分钟扣2分，超时5分钟停止操作。细菌染色鉴别正确挑取给定菌株典型菌落进行革兰氏染色、镜检（限做1片），并对菌株形态进行判断。1. 制片取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。2. 革兰氏染色依次用结晶紫初染、碘液媒染、酒精脱色、番红复染。革兰氏染色溶液A结晶紫染色液革兰氏染色溶液B革兰氏碘液革兰氏
5、染色溶液C95%乙醇革兰氏染色溶液D番红复染液3. 镜检依次使用低倍镜，高倍镜和油镜进行观察，油镜镜检结果需举手示意裁判。 载玻片需写上批次号和工位号，无需清理，放置桌面即可。完成相应整理工作。按照规定要求找到视野，油镜下镜检结果需举手示意裁判。载玻片需写上批次号和工位号，无需清理，放置桌面即可。4. 完成菌株形态鉴别报告2023年全国职业院校技能大赛高职组“食品安全与质量检测”竞赛食品微生物检验技能考核任务3 菌落总数测定（样品5） 结果报告赛位号：注意事项：1本环节一共包括2个子任务，子任务1为选手前一天做的菌落总数测定培养后平板菌落计数及报告；子任务2为完成给定情景样品的菌落总数测定结果
6、记录填写、计算、报告以及判定。2子任务1选手完成计数后需举手示意裁判，确认后计数结果才有效。3比赛过程中请做好相应的安全防护措施。4比赛时间：40分钟，时间到即停止操作。子任务1：完成选手前一天菌落总数测定培养后平板菌落计数及相关计算，按要求如实填写相关记录表格和检测报告。子任务2：已知某批次鲜牛奶（巴氏杀菌乳，样品编号20230008）检样菌落总数测定数据及产品微生物限量要求（书面统一提供），分别完成该样品菌落总数测定结果记录填写、计算、报告以及单项判定。2023年全国职业院校技能大赛高职组“食品安全与质量检测”竞赛食品微生物检验技能考核任务4 致病菌检验（虚拟仿真）（样品5） 操作规程赛位
7、号：【注意事项】1.请按照顺序完成操作，操作结束之前，请勿退出软件，一旦退出，后果自负。2.电脑或软件出现异常，请及时报告现场裁判。3.操作完成后，系统自动打分。在报告第一页空白处签署“赛位号，我已确认”字样。选手在赛位上安静等待至比赛结束，现场裁判宣布比赛结束前不得离场。4.比赛时间60分钟，到时立刻停止，否则视为作弊。致病菌检验（虚拟仿真）利用信息化技术手段，依据GB 4789.4-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验；SN/T 1870-2016出口食品中食源性致病菌检测方法 实时荧光PCR法完成沙门氏菌的检测，包括预增菌、增菌、分离培养、生化试验、血清学鉴定和分子生物学检验等。一、实验室安全排查及规范操作 1. 生物安全实验室的防护要求 2. 生物实验室隐患查找、意外情况的紧急处理等二、沙门氏菌检验1、预增菌2、增菌3、分离4、生化试验5、血清学鉴定三、实时荧光法检验沙门氏菌1、模板DNA的制备2、DNA浓度和纯度的测定3、实时荧光PCR仪检测