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1、微生物的选择培养和计数发酵工程发酵工程01稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法11090mL无菌水无菌水2铲铲取取土土样样，将将样样品品装入纸袋中。装入纸袋中。将将10g土土样样加加入入盛盛有有90mL无无菌菌水水的的锥锥形形瓶瓶，充充分摇匀分摇匀12取取1mL上上清清液液加加入入盛盛有有9mL无无菌菌水水的的试试管管中中梯度稀梯度稀释涂布平板涂布平板01稀释涂布平板法2取取1mL上上清清液液加加入入盛盛有有9mL无无菌菌水水的的试试管管中中，依依次等比稀释。次等比稀释。1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL稀稀释过程是否有可能程是否有可能污染染？吹吸吹吸3次充分混匀次充分混匀稀释涂
2、布平板法稀释涂布平板法01稀释涂布平板法稀释涂布平板法01 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入3037的恒温培养箱中培养12d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落培养：7稀释涂布平板法稀释涂布平板法01稀释涂布平板法稀释涂布平板法03微生物的数量测定微生物的数量测定方法方法1稀释涂布平板计数法计数当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少品中大约含有多少活菌活菌。一
3、般选择菌落数在30-300的平板进行记数。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？同一稀释度下，至少对对3个平板进行重复计数个平板进行重复计数，然后求平均值。原理：原理：原则：减小实验误差减小实验误差注意：当当两两个个或或多多个个细细胞胞连连在在一一起起，平平板板上上观观察察到到的的只是一个菌落。只是一个菌落。03微生物的数量测定微生物的数量测定方法方法2显微镜直接计数法快速、直观，能观察微生物的形态特征。特点：不能区分死菌和活菌，统计结果一般是活菌数和死菌数的总和一般是活菌数和死菌数的总和03微生物的数量测定微生物的数量测定土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数提出问题
4、提出问题如何分离土壤中能分解尿素的细菌？如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？尿素CO(NH2)2含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素为，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以为细菌生长的氮源。资料补充资料补充CO(NH2)2 +H2OCO2 +2NH3脲酶脲酶转化转化NH4+NO3-1.将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？以以尿尿素素作作为为唯唯一一氮氮源源，只只允允许许以以尿尿素素作作为为氮
5、氮源源的的微微生生物物生生长长，培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。选择培养基选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。温度提供7080的培养温度筛选出水生栖热菌营养筛选出石油分解菌只提供石油为唯一碳源营养筛选出纤维素分解菌只提供纤维素为唯一碳源pH选出耐高pH的细菌提供高pH的生存环境氧气筛选出厌氧细菌不提供氧气的生存环境投其所好取其所抗选择培养基选择培养基稀释涂布平板法稀释涂布平板法单菌落单菌落+03微生物的数量测定微生物的数量测定土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出
6、分解尿素的细菌。组分组分含量含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL提供无机盐提供碳源提供氮源提供水分03微生物的数量测定微生物的数量测定实验设计实验设计1.土壤取样 要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤取样时一般要铲去表层土城市：公园里、街道旁、花盆中农村：农田里、菜园里取样土层：距地表距地表38cm的土壤层的土壤层2.配置培养基以尿素为唯一氮源的培养基土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数03微生物的数量测定微生物的数量测定实验设计实验设计4.涂布平板3.样品的
7、稀释土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数细菌：104、105、106放线菌：103、104、105真菌：102、103、104稀释倍数03微生物的数量测定微生物的数量测定实验设计实验设计4.涂布平板稀释倍数1106110711041105无菌水选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基对照土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数03微生物的数量测定微生物的数量测定5.培养观察平板倒置于倒置于3037下培养12d，每隔24h观察统计一次1106110711041105无菌水选择培养基牛肉膏蛋白胨培养基土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离
8、与计数实验设计实验设计不涂布的选择培养基牛肉膏蛋白胨选择培养基不加氮源的培养基验证培养基是否有杂菌污染（平板是否合格）验证选择培养基是否具有选择作用验证是否有固氮菌干扰03微生物的数量测定微生物的数量测定土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数对照组03微生物的数量测定微生物的数量测定实验设计实验设计6.菌落计数稀释稀释度度1104110511061107123平均平均值值123平均平均值值123平均平均值值123平均平均值值每个每个平板平板的菌的菌落数落数当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板的平板进行技术，同一稀释度下至少计数至少计数3个平板，求出平均值，个
9、平板，求出平均值，并根据对应的稀释度进行计算！土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数若其中有平板上的菌落数量与其他平板差别很大？舍弃或重新实验03微生物的数量测定微生物的数量测定实验设计实验设计6.菌落计数某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34108 B.2.34109 C.234 D.23.4 B=（CV）M=（2340.1）106=2.34109每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数=菌落平均数菌落平均数涂布的体积涂布的体积稀释倍数稀释倍数土壤中分解尿素的
10、细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数稀释倍数思考:如何检测饮用水中的大肠杆菌是否超标?微生物的筛选与鉴别方法微生物的筛选与鉴别方法1.1.微生物的筛选方法微生物的筛选方法单菌落挑取法 利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面,直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养,直接获得目的微生物鉴别培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征,然后筛选目的微生物2.2.微生物的鉴别方法微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法 根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚酚红红指指示示剂剂,培养某种微生物后,培养基变红培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚刚果果红红染染色色法法,根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈透明圈来筛选分解纤维素的微生物筛选分解纤维素的微生物