《SN_T 5655.3-2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第3部分：蛋类.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN_T 5655.3-2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第3部分：蛋类.docx（21页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、学兔兔标准下载0ICS67.50CCSX04中华人民共和国出入境检验检疫行业标准3SN/T5655.2023商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第3部分:蛋类ittCommercalkitesmehodImmunoassayoffoodalergensinprepackagedfoodstPar3:Egg-20231101发布20240501实施中华人民共和国海关总署发布学标准兔兔下载学兔兔标准下载3SN/T5655.2023前言本文件按照GB/T1.2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件为SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫
2、分析法的第3部分。SN/T5655已经发布了以下部分:第1部分:麸质;第2部分:甲壳纲类动物;第3部分:蛋类;第4部分:花生;第5部分:大豆;第6部分:乳;第7部分:扁桃仁;第8部分:腰果;第9部分:榛子;第10部分:巴西坚果;第11部分:夏威夷果;第12部分:开心果;第13部分:胡桃。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中国海关科学技术研究中心。本文件主要起草人:曾静、董洁、马丹、赵晓娟、李思德、冼钰茵、梁颖婕、刘津。学兔兔标准下载3SN/T5655.2023引言食品致敏原
3、是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏反应。SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法规定了预包装食品中致敏原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生产质控和食品安全检验监管的检测需求。SN/T5655商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法拟由下列13个部分构成。第1部分:麸质。第2部分:甲壳纲类动物。第3部分:蛋类。第4部分:花生。第5部分:大豆。第6部分:乳。第7部分:扁桃仁。第8部分:腰果。第9部分:榛子。第10部分:巴西坚果。第11部分:夏威夷果。第12部分:开心果。第13部
4、分:胡桃。学兔兔标准下载3SN/T5655.2023商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第3部分:蛋类1范围本文件规定了预包装食品中蛋类致敏原酶联免疫吸附和胶体金免疫层析测定方法。第一法酶联免疫吸附法适用于预包装食品中蛋类致敏原成分的定量检测。第二法胶体金免疫层析法适用于预包装食品中蛋类致敏原的定性检测,也适用于预包装食品生产过程中为监控蛋类致敏原目的对生产原料和环境采样的定性检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB
5、/T6682分析实验室用水规格和试验方法liiiiiiiiitiAOACGuideinesforColaboratveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyss.AppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISAmethods:com-muniyguidanceandbestpractces3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。13.蛋类egg完整的具体生命的活卵细胞。注:主要包括蛋壳、蛋膜、蛋白和蛋黄四部分。蛋白和蛋黄是可食用性的物质,具有致敏性。23.-iE
6、酶联免疫吸附测定enzymelnkedimmunosorbentassay;LISA可溶性抗原或抗体结合到微孔板等固相载体上,基于免疫反应和酶催化显色的一种定性或定量检测方法。33.G胶体金免疫层析coloidalgoldimmunochromatographyassay;ICA以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。注:通常为试纸条形式。1学兔兔标准下载3SN/T5655.2023第一法酶联免疫吸附法4原理利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中经过加工的蛋类致敏原含量进行酶联免疫吸附测定。样品中游离蛋类致敏原蛋白被微孔中预先包被的蛋类致敏原特异性抗体捕获,形成抗原-抗体复合物,加入过氧
7、化物酶标记抗体后,形成酶标记抗体-抗原-抗体夹心复合物,加入底物/发色剂呈显色反应,通过测定450nm波长下吸光度值得到样品中蛋类致敏原含量。样品中蛋类致敏原含量与吸光度值成正比。5试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合GB/T6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。1iiiiiiiiiti5.蛋类致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒:试剂盒按照AOACGuidelnesforColaboratveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:Valdatonproceduresforquanttatvefoodal
8、ergenELISAmethods:communiyguidanceandbestpractces进行评价,评价结果见附录A。注:试剂盒详细信息见附录B。/2345.1molL氢氧化钠(NaOH):称取40.0gNaOH,加水溶解并定容至1L。5.5mol/L盐酸(HCl):取42mL37%的浓盐酸,加水定容至100mL。5.脱脂奶粉(不含蛋类致敏原)。155.1洗涤缓冲液:按照110比例稀释10洗涤缓冲液浓缩液见B.c),稀释后的1洗涤缓冲液可贮于28条件下保存4周。1条微孔板需约15mL1洗涤缓冲液洗涤。165.1致敏原提取缓冲液:按照110比例稀释10致敏原提取缓冲液浓缩液见B.d),稀
9、释后的1致敏原提取缓冲液可贮于28条件下保存12周。稀释前,若10致敏原提取缓冲液浓缩液中有结晶,则先将其置于37水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。71515.蛋类致敏原提取剂:取25mL提取剂4见B.e),加入0.0g的ECO环保添加剂见B.g),涡旋振荡直至彻底溶解并混合均匀;该蛋类致敏原提取剂可用于提取大约25个样品。831/(3(325.含添加剂1的致敏原提取缓冲液:称取1.5g添加剂1见B.f),溶解于15mL1mol/L氢氧化钠(NaOH)(5.3)中,搅拌直至完全溶解,加入700mL1致敏原提取缓冲液7.1.),用5molL盐酸(HCl)(5.4)约1mL调节pH值至
10、9,再用1致敏原提取缓冲液7.1.)定容至750mL;该提取缓冲液,可用于提取约39个样品,可在室温(025)条件下保存3周,不应冷藏,若出现晶体析出情况则即刻弃用。6仪器和设备1236.酶标仪:具450nm波长。6.分析天平:感量0.1g。6.涡旋混匀仪。45366.冷冻离心机:转速4000r/min,温度4。6.水浴锅:7,0。6216.单道移液器:0L200L,00L1000L。2学兔兔标准下载m20fV()3SN/T5655.2023736.八道移液器:0L300L。7分析步骤17.样品前处理和提取1105(5(7.未经深加工及未经高温加热处理的食品(冰淇淋、葡萄酒、巧克力、沙拉酱等)
11、。称取不少于50g或量取不少于50mL样品,充分混合均匀。固体样品,称取1.0g样品到50mL离心管中,加入0.0g脱脂奶粉5.4),加入20mL预热至60的1致敏原提取缓冲液5.6);液体样品,取1mL样品到50mL离心管中,加入0.0g脱脂奶粉5.4),加入19mL预热至60的1致敏原提取缓冲液(35.6),按照7.1.进行下一步处理。1205(5(37.经深加工或经高温加热处理的食品(面条、饼干等)。称取不少于50g或量取不少于50mL样品,充分混合均匀。固体样品,称取1.0g样品到50mL离心管中,加入0.0g脱脂奶粉5.4)及1mL蛋类致敏原提取剂5.7),加入19mL预热至60的含
12、添加剂1的致敏原提取缓冲液5.8);液体样品,取1mL均质样品到50mL离心管中,加入0.0g脱脂奶粉5.4)及1mL蛋类致敏原提取剂5.7),加入18mL预热至60的含添加剂1的致敏原提取缓冲液5.8),按照7.2.进行下一步处理处理。1327.将经过7.1.或7.1.处理的样品,涡旋混匀,置于60水浴中孵育10min。用冰水快速冷4却,下4000r/min离心10min,取上清液进行检测。至此样品的稀释倍数为20倍。27.测定21127.将预先包被有蛋类致敏原特异性抗体的微孔板见B.a)插入微孔板架,并做好标记,标准品和样品均设置双平行。建议一次检测不要超过3条微孔板条(4个板孔),以避免
13、过大的孔间时间差造成对定量结果的影响。2212(12(1117.平行加入100L标准品15见B.h)l)和样品至微孔中,室温(025)孵育20min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔加入250L1洗涤缓冲液5.5),进行洗涤后,在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100L酶标记物见B.b),室温(025)孵育20min。孵育结束后,倒去微孔中的液体,每个微孔每次加入250L1洗涤缓冲液5.5)洗涤并在吸水纸上拍干,洗涤3次。洗板结束后,每个微孔加入100L底物/发色剂见B.m),轻轻地水平振摇使其均匀混合,2025避光孵育10min。孵育结束后,加入100L终止液见B.n)
14、,水平振摇使反应完全,0min内读取450nm波长吸光度值。37.标准曲线制作和测定结果计算c以标准品15质量浓度为横坐标,以标准品平均吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,计算样品液中蛋类致敏原浓度()。也可使用试剂盒配套分析软件RIDASOFTWin中4P模式进行标准曲线绘制和测定结果计算。8分析结果描述18.结果分析1固体样品中蛋类致敏原含量按公式()计算:sXs=c13学兔兔标准下载3SN/T5655.2023式中:sXs样品中蛋类致敏原含量,单位为毫克每千克(mg/kg);c样品液中蛋类致敏原浓度,单位为毫克每升(mg/L);f样品稀释倍数;,V定容体积0.02L;k2
15、m样品的质量,单位为千克(g);20标准品浓度中包含的20倍稀释。液体样品中的蛋类致敏原含量按公式()计算:l2Xl=cf()式中:lXl样品中蛋类致敏原含量,单位为毫克每升(mg/L);c样品液中蛋类致敏原浓度,单位为毫克每千克(mg/L);f样品稀释倍数。1根据7.制备样品液时的20倍稀释倍数已经包括在标准曲线中,样品稀释倍数f只考虑除此220倍以外的稀释倍数。计算结果保留小数点后两位有效数字。8.结果表述蛋类致敏原测定结果用于标签标识管理。蛋类致敏原测定结果小于定量限时,结果表述为“未检出蛋类致敏原”;蛋类致敏原测定结果大于定量限时,结果表述为“检出蛋类致敏原”并报告具体测定值。9质量控
16、制19.试剂失效出现以下情况之一表明试剂失效,不应进行测定或测定结果作废:a)贮存在试剂瓶中的发色剂颜色出现蓝色;22b)加入终止液后标准品5(mg/kg)吸光度值0.9。2A.检出限和定量限1L2L对全蛋的检出限为0.3mg/kg();定量限为0.5mg/kg()。3A.正确度对人工加标的饼干基质回收率范围为80.0%100.0%,对人工加标的沙拉酱基质回收率范围为90.0%104.0%,对人工加标的冰淇淋基质回收率范围为80.0%84.2%,对人工加标的葡萄酒基质回收率范围为83.3%100.0%。6对不同加工程度的饼干样品回收率范围为79.%97.3%;对不同加工程度的面条样品回收率范围
17、为69.2%78.1%。4A.特异性对麦类、豆类、甲壳类动物、鸡肉、坚果、香料、水果等89种食品样品交叉反应率为0。5A.精密度对面条、沙拉酱、豆基奶油、奶油、饼干、冰淇淋、巧克力、奶酪、脱脂奶粉、牛奶、玉米粉、酸奶、红葡萄酒、白葡萄酒、糕点进行不同浓度的人工加标,变异系数范围为1.9%8.8%,平均值为4.4%,回收率范围为90.0%110.0%,回收率平均值为99.8%。6A.耐变性58919113分别对5个实验条件进行耐变性实验:样品提取温度(0,70),样品提取时间(min,12min),样品/标准品加样量(0L,10L),孵育时间(min,1min),孵育温度(8,0)。实验结果表明
18、,参数的变化对检测结果无显著影响。1)本评价结果仅适用于rbipharmRIDASCREENEgg试剂盒。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。8学兔兔标准下载3SN/T5655.2023附录B(规范性)蛋类致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒2)1B.试剂盒组成:10a)预包被蛋类致敏原特异性抗体的96孔可拆分微孔板812孔;b)酶标记物:1.mL/瓶1瓶;1c)10洗涤缓冲液浓缩液:00mL/瓶1瓶;1d)10致敏原提取缓冲液浓缩液:00mL/瓶1瓶;e)提取剂4100mL1瓶;f)添加剂12g1瓶
19、;:5g)ECO环保添加剂2.g1瓶;33253030h)标准品11.mL/瓶1瓶,蛋类致敏原含量为0.mg/kg;i)标准品21.mL/瓶1瓶,蛋类致敏原含量为0.5mg/kg;j)标准品31.mL/瓶1瓶,蛋类致敏原含量为0.mg/kg;k)标准品41.mL/瓶1瓶,蛋类致敏原含量为1.mg/kg;l)标准品51.mL/瓶1瓶,蛋类致敏原含量为2.mg/kg;1m)底物/发色剂:3mL/瓶1瓶;1n)终止液:4mL/瓶1瓶。2B.试剂盒验收和保存2122223243B.每个批号试剂盒应进行回收率测试的验收试验,回收率符合质量控制要求。B.试剂盒于28避光保存,使用前回复至室温(025)。B
20、.不同批号试剂盒中组分不应混用。B.超过有效期的试剂盒不应使用。B.试剂盒评估31B.定期进行回收率评估,回收率应在80%120%之间。324B.回收率评估可使用商品化蛋类致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品。B.标准曲线谱图1标准曲线谱图示例见图B.。2)rbipharmRIDASCREENEgg试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。9学兔兔标准下载3SN/T5655.20231图B.标准曲线谱图示例10学兔兔标准下载3SN/T5655.2023附录C(资料性
21、)蛋类致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒评价结果3)1C.检出限对食品样品及清洁用水中蛋类致敏原的检出限为1mg/kg(L)。对环境表面的拭子采样的检出限为1g/100cm2(当采样面积为10cm10cm时),或1g/采样拭子3g/采样拭子(当采样面积是自行确定时,应明确所记录的采样范围)。2C.特异性对鸡皮、鸡肉、巴西坚果、腰果、榛子、生花生、烤花生、蒸花生、南瓜籽、葵花籽、核桃、大麦、小麦、燕麦、藜麦、黑麦、大米、小米、绿豆、大豆、大蒜、扁桃仁、辣椒、橙汁、鱼、猪肉、牛肉均无交叉反应。-l3)本评价结果仅适用于rbiopharmbioavidLateraFlowEgg试剂盒。给出这一信息是为了
22、方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。11兔学兔标准下载3SN/T5655.2023附录D(规范性)蛋类致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒4)1D.试剂盒组成111a)预包埋标记抗体的反应管:0支或25支(根据试剂盒规格不同);b)蛋类致敏原快速试纸条:0支或25支(根据试剂盒规格不同);c)流动相缓冲液:0mL/支1支;1d)冻干阳性质控:份,使用时加入1mL水复溶,涡旋混匀5min。2D.试剂盒验收和保存21D.每个批号试剂盒应按照质量控制要求进行验收试验,考察检测性能。222D.未开封试剂盒保存在28,使用前回复至室温(025)。
23、开封后试剂条保存在室2温(025)并保持干燥。233D.超过有效期的试剂盒不应使用。D.试纸条检测结果示例1试纸条检测结果示例见图B.。从左至右检测结果第1条为阴性,第24条为阳性且含量逐渐增高。C为质控带,H为沟状效应带,T为检测带。1图D.试纸条检测结果示例-ool4)rbipharmbiavidLateraFlowEgg试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。12学兔兔标准下载3SN/T5655.2023附录E(规范性)吸附缓冲液5)1E.试剂描述吸附缓冲液专门适用于含多酚的样品(如咖啡、可可、红酒等)处理,配合致敏原胶体金免疫层析检测试纸条进行过敏原检测。2E.试剂组成吸附缓冲液样品管9mL25支。3E.试剂保存21222E.试剂保存在室温(025)。E.超过有效期的试剂不应使用。-oo5)rbipharmbiavidAbsorbentBufer吸附缓冲液是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。13学标准兔兔下载学标准兔兔下载标准兔学兔下载320235565TNS/