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1、ICS65.020B15DB22吉林省地方标准DB22/T31992020螟黄赤眼蜂工厂化生产技术规程TechnicalspecificationforindustrializedproductionofTrichogrammachilonisIshii-11-23发布2020-12-30实施吉林省市场监督管理厅发布DB22/T31992020目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语及定义.14工厂化生产流程.25生产前准备.26工厂化生产.57质量控制.68记录档案.9附录A（资料性附录）螟黄赤眼蜂形态学鉴定方法.10IDB22/T31992020前言本文件按照GB/T1.1202
2、0标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林农业大学、吉林省农业科学院、吉林省蚕业科学研究院。本文件主要起草人：杜文梅、张俊杰、阮长春、周淑香、朱兴友、毛刚。IIDB22/T31992020螟黄赤眼蜂工厂化生产技术规程1范围本文件规定了螟黄赤眼蜂产前准备、工厂化生产技术要求、质量控制、记录档案。本文件适用于柞蚕卵繁育螟黄赤眼蜂的工厂化生产和质量控制。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括
3、所有的修改单）适用于本文件。NY/T1166-2006生物防治用赤眼蜂DB22/T1025-2018柞蚕良种繁育技术规程3术语及定义NY/T1166-2006界定的以及下列术语和定义适于本文件，为了便于使用以下重复列出了NY/T1166-2006中的一些术语和定义。3.1单卵蜂数numberofhosteggsparasitized每粒柞蚕卵内所寄生的螟黄赤眼蜂个体数。3.2寄生率parasitismproportion被寄生的柞蚕卵数占供检测卵数的百分比。3.3羽化破壳率rateofeggswithemergencyholes指有羽化孔的中间寄主卵占总寄生卵的比例。NY/T1166-2006
4、，术语及定义2.163.4遗留蜂率proportionofunemergedparasitoids滞留在柞蚕卵内成蜂数占总成蜂数的百分比。3.5畸形蜂率deformedadultsproportion指体形异常的成蜂数（如大肚子蜂、无翅蜂等成蜂）所占总蜂数的比例。NY/T1166-2006，术语及定义2.243.6雌蜂百分比femaleproportion单粒寄生卵中羽化的赤眼蜂雌性成蜂数占总成蜂数的百分比。1DB22/T319920203.7D值Dvalue赤眼蜂腹中突基部至阳基侧瓣末端的距离。3.8诱导滞育diapauseinduction利用某种特定条件（如持续低温、短光照或全黑暗）诱导
5、螟黄赤眼蜂稳定进入滞育状态的一个过程。3.9接蜂inoculation将蜂种接引到中间寄主卵上的生产环节。NY/T1166-2006，术语及定义2.44工厂化生产流程图1螟黄赤眼蜂工厂化生产流程图5生产前准备5.1生产计划制定每年的11月份12月份，根据市场需求制定生产计划，并根据虫情预测预报信息和实际情况，及时调整，主要内容包括：a)所需厂房、设备；b)蜂种、蚕茧等生产资料；c)用工数量和时间；d)组织生产及应急保障措施。5.2厂房及设备物质5.2.1厂房应包括：a)蜂种繁育室；2DB22/T31992020b)暖茧车间；c)剖腹取卵室；d)洗卵室；e)消毒室；f)暗室；g)发育室；h)保鲜
6、冷藏库；i)物品保存库。5.2.2设备主要包括：a)低温生化培养箱；b)绞卵机；c)搅拌器；d)脱水机；e)烘干机；f)柞蚕卵色选机；g)包装机；h)空调；i)排风机；j)电暖气；k)加湿器；l)温湿度自控仪；m)电脑几打印机；n)发育盘架；o)手推运输车。5.2.3常用药品及材料主要包括：a)25g/L30g/L苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）；b)孔径尺寸0.150毫米的纱网；c)孔径尺寸2毫米的纱网。5.3蜂种5.3.1采集在靶标害虫产卵季节，于不同地理环境广泛采集被赤眼蜂寄生的靶标害虫卵，并按不同地理位置进行标记，经室内培养，筛选出寄生率高、适应性强的蜂种。5.3.2鉴定根据雄性赤眼蜂外
7、生殖器的形态特征进行鉴定，按附录A执行。5.3.3纯化3DB22/T31992020对采自不同靶标害虫卵内的赤眼蜂进行如下筛选纯化：a)在试管（10毫米70毫米左右大小）中投放米蛾卵（100粒为宜），再单头引入雌蜂，用棉球或纱布封口后置于发育室；b)发育条件：光照16小时，（251）、RH（755）%；黑暗8小时，（201）、RH（755）%；c)羽化出蜂后按附录B逐管鉴定；d)将确定为螟黄赤眼蜂的单管合并，继续繁殖。5.3.4保存鉴定纯化的蜂种，经数代筛选繁殖，建立起一定数量的种群后保存使用：a)将发育到幼虫中期的蜂种，置入12、RH（755）%的条件下，诱导滞育30天；b)置入（31）、R
8、H（755）%的条件下，进行解除滞育60天90天；c)经1024小时、1524小时过渡后，按4.3.3b）变温发育至出蜂。5.4柞蚕茧5.4.1备茧应包括：a)备茧时期：在生产前一年的11月12月份开始按预定计划备茧：b)茧质要求：1)健康雌茧率90%；2)雄茧率7%；3)死伤茧率3%；4)割口茧率8%；5)发育蛹和嫩蛹5%；6)茧层率10%，无薄皮茧、瘪茧；7)茧不潮、未接触-3以下低温。c)备茧数量：按每繁70万头螟黄赤眼蜂用茧1kg计算。5.4.2蚕茧保存保存温度(31)、RH（605）%；适当通风换气，保持空气含氧量；防鼠害防农药，避免发热焐包，储存时间不低于45天。6工厂化生产6.1
9、灭菌消毒在生产前一周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法参照DB22/T1025-2018中8.3.3.1执行。6.2蜂种复壮根据生产计划，定期对螟黄赤眼蜂蜂种，以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮：a)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比1：80，柞蚕卵蜂卵比2:1；b)接蜂时间：24小时48小时；4DB22/T31992020c)发育条件：同4.3.3b）；d)复壮周期：33天38天。6.3蜂种扩繁以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁3代4代：a)接蜂比例：1：25（蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）；b)接蜂时间：24小时；c)接蜂条件：全黑暗，（251）、RH（755）%；d)发育条件：同4.3.3b）；e)将末
10、一代蜂种发育至幼虫中后期置于（31）、RH（755）%条件下冷藏，冷藏时间不超过10天。6.4寄主卵6.4.1暖茧发蛾暖茧室保持1822，RH（705）%，20天25天逐渐羽化出蛾。6.4.2收蛾在柞蚕蛾羽化期内，每天下午开始将羽化的雄蛾挑检干净，次日清晨人工收雌蛾，用于当天繁蜂或储存在（31）的冷库中备用。6.4.3剖腹取卵用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，然后用特制的绞卵机将腹部破碎或人工挤出卵巢。6.4.4洗卵用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗。6.4.5卵面消毒将清洗干净的新鲜卵用0.1%的苯扎溴铵溶液浸泡5分钟。6.4.6脱水晾卵消毒后的新鲜卵用布袋装
11、好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过28。6.4.7清除绿卵烘干的新鲜卵用色选机清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率不高于4%。6.5商品代接蜂蜂种与新鲜柞蚕卵按1:151:20比例进行接蜂。当蜂种羽化25%30%时，将种蜂卵均匀撒在接蜂盘中，铺上孔径尺寸2毫米的纱网，再将新鲜卵定量平铺到纱网上，送入（251）、RH（755）%的暗室内产卵寄生，48小时后，逐盘去除蜂种，标明日期送入发育室发育。6.6培养发育5DB22/T31992020接蜂后的寄生卵分批次送入自然光照的变温发育室，按4.3.3b）培养24小时48小时，至幼虫中后期。6.7寄生卵冷藏将发育至幼虫后期的螟黄赤眼蜂寄生
12、卵，平铺到卵盘中置于冷库内货架上冷藏：a)铺卵厚度3cm4cm；b)冷库温度（31）、RH（755）%，全黑暗；c)冷藏时间控制在30天以内。6.8寄生卵第1次加温根据害虫发生时间将螟黄赤眼蜂从冷库取出，采用分步渐变加温的方式促进发育：a)在（151）、RH（755）%全暗条件下加温24小时；b)自然光照条件下，按4.3.3b）变温发育至预蛹期；c)加温11天12天可羽化出蜂。6.9寄生卵精选对发育至预蛹期的赤眼蜂寄生卵，用柞蚕卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其他杂质。6.10寄生卵第2次加温将精选后的寄生卵，置于发育室按4.3.3b）变温发育至蛹后期，再按5.7的方法冷藏，冷藏时间不超过
13、5天。7质量控制7.1抽样及处理调查7.1.1样本A从每批精选后的柞蚕寄生卵中多点随机抽取样卵混匀，再按十字交叉法随机抽取1000粒标记为样本A。7.1.2样本B在A样本中随机抽取3个100粒，分别装入试管中标记为B1、B2、B3；将B样本发育至预蛹期后检查绿卵率、寄生率。7.1.3样本C在A样本中随机抽取30粒，装入试管中，发育至预蛹期后，随机抽取10粒寄生卵，分别标记为C1、C2、C10样本；利用解剖镜检查每个样本的单卵蜂数。7.1.4样本D在A样本中随机抽取3个100粒，分别装入试管中标记为D1、D2、D3样本；将D样本加温保湿使其羽化，检查羽化破壳率。7.1.5样本E6L=100%.(
14、A.1)DB22/T31992020在A样本中抽取20粒寄生卵分装20个试管内，标记为E1、E2E20样本；将E样本加温保湿使其羽化，调查畸形蜂数、遗留蜂数、雌雄蜂数。7.2检测7.2.1绿卵率分别检测B1、B2、B3样本的绿卵数后按公式（A.1）计算，取3个样本的平均值为绿卵率（%）。xX式中：L绿卵率（%）；X检测卵数（100粒）；x绿卵数（粒）；7.2.2寄生率分别检测B1、B2、B3样本的寄生数后按照公式（A.2）计算，取3个样本的平均值为寄生率（%）。P=nN100%.(A.2)式中：P寄生率(%)；N检测卵数（检查完绿卵率后剩余的B1、B2、B3样本的卵数）（粒）；n寄生卵数(粒)
15、；7.2.3单卵蜂数分别检测C1、C2C10样本的单卵蜂数后按公式（A.3）计算，取10个样本的平均值为单卵蜂数（头）。(C+C.+CD=121010).(A.3)式中：D单卵蜂数（头）；C单卵蜂数（检查C1、C2C10样本的单卵蜂数）（头）。7.2.4羽化破壳率分别检测D1、D2、D3样本的卵粒羽化孔数后按公式（A.4）计算，取3个样本的平均值为羽化破壳率（%）。Y=EE+R100%.(A.4)式中：Y羽化破壳率（%）；E有羽化孔的卵数（粒）；R未羽化卵数（粒）。7.2.5遗留蜂率7抽样检验项目优质合格不合格寄生率/%85.080.084.980.0羽化破壳率/%80.065.079.965
16、.0绿卵率/%2.02.14.04.0单卵蜂数/头80.0100.070.079.970.0遗留蜂率/%15.015.125.025.0畸形蜂率/%5.05.110.010.0雌蜂百分比/%85.080.084.980.0DB22/T31992020分别检测E1、E2E20样本，按公式（A.5）计算，取20个样本的平均值为遗留蜂率（%）。F=MM+D100%.(A.5)式中：F遗留蜂率（%）；M卵内滞留蜂数（头）；D羽化出壳蜂数（头）。7.2.6雌蜂百分比分别检测E1、E2E20样本，按公式（A.6）计算，取20个样本的平均值为雌蜂百分比（%）。P=N1NI+N2100%.(A.6)式中：P雌
17、蜂百分比（%）；N1雌蜂数（羽化雌蜂数）（头）；N2雄峰数（羽化雄蜂数）（头）。7.2.7畸形蜂率分别检测E1、E2E20样本，按公式（A.7）计算，取20个样本的平均值为畸形蜂率（%）。J=QZ100%.(A.7)式中：J畸形蜂率（%）；Q畸形蜂数（羽化出壳的畸形雌、雄蜂数之和）（头）；Z总蜂数（羽化出蜂总数，不包括遗留在卵壳内的遗留蜂）（头）。7.3质量分级质量分级见表1。表1螟黄赤眼蜂质量分级标准8记录档案8DB22/T31992020建立螟黄赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录，保存两年以上，做到可追溯：a)每天的温湿度记录；b)每批次螟黄赤眼蜂的生产日期；c)每批次螟黄赤
18、眼蜂的加温日期；d)每批次螟黄赤眼蜂的质量检验信息。9DB22/T31992020AA附录A（资料性附录）螟黄赤眼蜂形态学鉴定方法A.1制作鉴定玻片将用浓度75%95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片：a)在5%的KOH溶液中浸泡8小时15小时，并用水清洗干净，置于载玻片上；b)在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片；c)在显微镜下观察并测量阳基背突、腹中突及D值。A.2观察测量并鉴定在显微镜下观察赤眼蜂雄性外生殖器并测量其阳基背突、腹中突及D值，符合下列特征的属于螟黄赤眼蜂：a)有明显的半圆形的侧叶，末端达D值的1/2；b)腹中突的长度约等于D值的1/3，略成锥形；c)钩爪末端伸达D值的1/2。_10