《牛冠状病毒病诊断与防控技术规程(T-NAIA 0258—2023).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牛冠状病毒病诊断与防控技术规程(T-NAIA 0258—2023).pdf（7页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 ICSICS 65.020.30ICS 65.020.30CCS A 031CCS A 031团团 体体 标标 准准 T/NAIA 0258-2023牛冠状病毒病诊断与防控技术规程Technical regulations for diagnosis,prevention and control of Bovine coronavirus disease 2023-12-18 发布2023-12-31 实施 宁夏化学分析测试协会宁夏化学分析测试协会 发发 布布 发布T/NAIAT/NAIA 0258-2023 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准
2、化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏农林科学院动物科学研究所、宁夏大学、宁夏职业技术学院。本文件主要起草人：郭亚男、王玮、王秀琴、纪鹏、王琨、王建东、梁小军、王世博、郭吉平、尤建村、张永康、李生虎、于有利、张久盘、马玉礼、郝万军、魏彦明。本文件为首次发布。T/NAIA 0258-2023 牛冠状病毒病诊断与防控技术规程 1 范围 本文件规定了牛场牛冠状病毒病诊断与防治技术的术语和定义、诊断、预防和治疗。本文件适用于牛冠状病毒病的防治。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
3、件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 16568 奶牛场卫生规范 NY/T 5030 无公害农产品 兽药使用准则 NY 5047 无公害食品 奶牛饲养兽医防疫准则 NY/T 5049 无公害食品 奶牛饲养管理准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 牛冠状病毒病 Bovine coronavirus 是指由牛冠状病毒引发犊牛以出血性腹泻为主要症状的传染病。4 诊断 4.1 流行病学 牛冠状病毒多发于 710 日龄的犊牛。病牛和带毒牛是感染性腹泻的主要传染源。通
4、过消化道、呼吸道、接触、胎盘和交配等途径传播。本病一年四季均可发生，尤以气候多变、寒冷季节和环境卫生较差时多发。4.2 临床症状 犊牛感染后发生腹泻，发病初期出现带血的黄色黏性粪便，后期发展为水泻，有时出现脱水、虚弱、体温低，少数犊牛出现发热、卧地不起等症状，严重的犊牛会出现昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴发，排出深褐色带血稀粪，伴有产奶下降、沉郁及厌食等症状。4.3 病理变化 T/NAIA 0258-2023 小肠肠壁变薄、透明，肠腔液体增多，严重者引起腹腔积水，胃内有未消化的凝乳块。感染的牛可能伴随呼吸道症状，表现为气管黏膜充血、局限性肺炎等。5 实验室诊断 5.1 样品采集 将棉拭子伸入肛门
5、内刮取新鲜粪便，放入装有 3 mL PBS 采样管中；也可无菌采集地上刚排出新鲜粪便。编号并记录相关信息。取病死牛肠道及内容物、肝、脾、淋巴结等，置于无菌密封袋或采样杯内。5.2 样品处理 对于粪便样品，放入盛有 3 mL PBS 管中，充分振荡，12000 r/min 4 离心 5 min8 min，取上清备用；对于组织样品，称取 1 g 置于研钵，充分研磨后加 5 mL PBS，混匀，8000 r/min 4 离心 5 min，取上清备用。将上清于 0.22 m 滤器过滤，-80 冰箱保存或直接接种细胞。5.3 分子诊断 5.3.1 基因组 RNA 提取 将 5.2 中样品上清纯培养细胞毒
6、用商品化试剂盒进行基因组 RNA 提取。提取方法按试剂盒说明书进行。5.3.2 反转录 将 5.3.1 中的基因组 RNA 利用反转录试剂进行反转录（见附录表 A.1,A.2）。5.3.3 基础 RPA 鉴定 应用基础 RPA 方法进行病原核酸检测，BRV 引物序列（见附录表 A.3）。每次进行 RPA 扩增时，除检测样品外，均需设置阳性对照和阴性对照。RPA 反应体系（见附录表 A.4），反应条件为 37 20 min。5.3.4 RPA 产物电泳 用 1TAE 电泳缓冲液配制成 2%琼脂糖凝胶。取 5 L 产物分别加入样品孔，同时在一加样孔中加入 DNA 分子量标准（DL500），以 5
7、V/cm 恒压电泳，30 min 后采用凝胶成像系统判定核酸片段大小。阳性对照出现一条 144 bp 大小的条带，且阴性对照不出现条带（参见附录 B.1）。T/NAIA 0258-2023 5.4 确诊 出现 4.1、4.2 和 4.3 可判定为牛冠状病毒病疑似病例。符合 5.3.4 可判定为牛冠状病毒病。6 防控 6.1 加强饲养管理，保持卫生清洁。按照 GB/T 16568 和 NY/T 5049 的规定。6.2 加强产房消毒卫生，产房需要保暖、宽敞、通风、干燥，产犊过程中排出物及时清除，随时消毒。6.3 在保证舍内温度的前提下，自然通风，保证牛舍干燥、舒适、温暖。6.4 避免应激，消除可
8、能降低机体抵抗力的各种应激因素。6.5 自然哺乳母牛定期消毒乳头，防止致病微生物传染犊牛。6.6 分娩时，落地犊牛口鼻切勿接触脏污。6.7 初生犊牛及时哺喂初乳。犊牛出生后 1 h 内及时吸吮初乳。6.8 哺乳犊牛给予开食料，补充微量元素，饲料配比适当。6.9 牛群防疫参照 NY 5047 的规定。6.10 病死或死因不明牛按照病死及病害动物无害化处理技术规范及病死畜禽和病害畜禽产品无害化处理管理办法的规定处理。7 治疗 7.1 兽药使用应符合 NY/T 5030 的规定。7.2 及时隔离，灌服冠状病毒卵黄抗体或肌肉注射干扰素，并肌肉注射恩诺沙星或庆大霉素防止继发感染；针对酸中毒，静脉注射 5
9、%碳酸氢钠注射液，每次 100mL200mL。7.3 对持续腹泻不止的犊牛，可应用白头翁散或明矾或次硝酸铋，内服。7.4 及时补充体液，若脱水仅占体重 8%以下时，给予口服补液；若脱水占体重 8%以上或腹泻严重时，应在给予补液的同时，皮下或静脉注射含有碳酸钠的林格氏液。T/NAIA 0258-2023 附附 录录 A A（规范性）反应体系 表 A.1 反转录反应体系 试剂 使用量 RNase-free ddH2O 10 L 5All-in-one Qrt sUPERMix 4 L Enzyme Mix 1 L 模板 RNA 5 L 表 A.2 反转录反应程序 温度 时间 50 15 min 8
10、5 5 sec 表 A.3 轮状病毒基础 RPA 引物序列信息 引物名称 引物序列（53）片段大小（bp）参考序列 BCoV-F GCTAAGGGGTACTGGTACAGACACAACAGA BCoV-R TCCGTCAATGTCGGTGCCATACTGGTCTTT 144 KT318094.表 A.4 RPA 反应体系 试剂 体积 L BRV-F1（10 M）1.2 L BRV-R1（10 M）1.2 L Rehydration buffer 14.75 L 模板 1 L ddH2O 5.6 L MgOAc 1.25 L T/NAIA 0258-2023 附附 录录 B B（规范性）RPA 产物电泳图 B.1 RPA 产物电泳见图 A 图 A RPA 产物电泳 M：DL500 DNA Marker；1：阳性对照；2：阴性对照 144