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1、课后定时检测案43基因工程及生物技术的安全性与伦理问题基础巩固练学业水平一、二1下列关于基因工程的叙述，错误的是（）A目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B限制性内切核酸酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达2下列关于蛋白质工程的说法，正确的是（）A蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作B蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子C对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的D蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的3下列有关生物技术安全性和伦
2、理问题的观点，不合理的是（）A对于转基因技术，我们应该趋利避害，理性看待B我国禁止生殖性克隆和治疗性克隆C我国不发展、不生产、不储存生物武器，并反对其扩散D对于基因检测应该保护个人遗传信息隐私权提能强化练学业水平三、四4经典高考北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（）A.过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B将多个抗冻基因编码区依次相连形成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白C过程构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选D应用DNA探
3、针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达52022天津一中高三月考为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用农杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF转移到大豆植株中，下图为重组Ti质粒上TDNA的序列结构示意图。下列相关叙述不正确的是（）A以水稻RNA为模板通过逆转录及PCR扩增可获得大量OsPTF基因BRNA聚合酶与启动子1识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录C可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的基因的大豆愈伤组织D用EcoR、BamH酶同时切重组Ti质粒后，经电泳分离至少得到两条不同长度的带6（不定项选择）如图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制性内切核酸酶Eco
4、R、BamH的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有EcoR、BamH的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列有关叙述不正确的是（）A将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，在DNA连接酶作用下，生成由两个DNA片段之间连接形成的产物有两种BDNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来，形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键C为了防止目的基因反向连接和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamHD受体细胞能在含青霉素的培养基中生长，表明该目的基因已成功导入该细胞7（不定项选择）根据某基因上游和下游的碱基序列，设计合成了该基因的两段引物（单链DNA）。引物
5、与该基因变性DNA（单链DNA）结合为双链DNA的过程称为复性。如图是两引物的Tm（引物熔解温度，即50%的引物与其互补序列形成双链DNA分子时的温度）测定结果，下列叙述正确的是（）A通常引物1和引物2不能有碱基互补配对关系B两引物分别是子链延伸的起点，并可以反复利用C若两引物的脱氧核苷酸数相同，则可推测引物2的GC含量较高D复性所需温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度等因素大题冲关练综合创新求突破82022广东汕头市高三二模叶绿体基因工程是指向叶绿体基因组中引入外源目的基因，并使之表达。Rubisco酶（简称R酶）是光合作用中CO2固定的关键酶，深红红螺菌的R酶活性是一般植物的4倍
6、。科学家尝试将该菌的Rubisco基因（简称R基因）导入玉米叶绿体，提高玉米R酶活性，进而提高玉米光合能力。RbcL基因位于叶绿体DNA上，其产物参与光合作用过程。（1）在构建基因表达载体中，使用了玉米叶绿体特异性基因RbcL基因的启动子和终止子， 其目的是。在构建该表达载体时，需要使用的工具酶有。（2）科学家试图修改R基因中部分碱基，以改变R酶部分氨基酸序列，以进一步提高R酶的活性，该操作属于工程。（3）获得成功转化R基因的玉米细胞，利用植物组织培养技术获得转基因植株，其中使用到三种培养基的主要激素配方如下（NAA是一种生长素类似物，6BA是一种细胞分裂素）。其中培养基A主要作用是，诱导培养
7、物生根的培养基编号为。培养基编号ABCNAA（mg/L）0.50.050.16BA（mg/L）0.52.50.05（4）试从安全性和实用性的角度分析叶绿体基因工程的优势_。92022天津高三二模针对新冠病毒（SARSCoV2）的重组蛋白疫苗、核酸疫苗（包括 DNA疫苗和 RNA疫苗）等疫苗都在研发当中。下图为其中一种疫苗的研发思路，图中表示过程，箭头表示 Nco、Sph、Nhe、BamH的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因 SUC2控制合成蔗糖酶，使 P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。 （1）图中过程需要使用酶先得到cDNA，再使用技术扩增得到S基因。（2）为使过程顺利进行，需先使
8、用限制酶和切割质粒B，选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割的目的是_（答出一点即可）。（3）图中表示筛选的过程是（填编号），为达到利用标记基因筛选的目的，普通的P型酵母菌应该满足的条件是。（4）重组疫苗注入志愿者体内后，S蛋白基因指导合成的S蛋白作为，刺激机体产生能与之相结合的抗体，抗体的分泌量可作为检测疫苗对志愿者免疫效果的指标。参加临床试验的志愿者需要满足的条件之一是（选填“有”或“无”）SARSCoV2感染史，理由是_。102022辽宁沈阳市高三二模绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，能合成抗TMV蛋白，使绞股蓝叶片能抗TMV感染。科研人员利用转基因技术将绞股蓝细胞中的抗T
9、MV基因转入烟草细胞，培育出了抗TMV的烟草，主要流程如图所示。请分析下图并回答问题：（1）从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，合成目的基因。过程需要的酶是。利用PCR技术扩增目的基因时，反应体系中除有缓冲液、原料（dNTP）、目的基因外，还应含有。（2）由获得的目的基因在构建表达载体时，应在目的基因的首端和尾端分别添加，同时为了与表达载体连接，通常在两端插入不同的限制性酶切位点，主要原因是。由图可知，在过程中应将目的基因插入Ti质粒的TDNA上，同时该片段中还应有抗性基因。（3）将含抗TMV基因的烟草细胞经获得再生植株的生物技术是。这项技术不仅能实现快速繁殖作物还能保持优良品种的。（
10、4）过程在个体生物学水平鉴定，需要做实验，可检测植株是否具有抗性以及抗性的强度。11超量表达P蛋白转基因玉米的获得与鉴定。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：（1）强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用酶组合，将片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。TDNA在该实验中的作用是_。（2）将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入进行筛选，筛选出的愈伤组织形成丛芽，最终获得多个转基因玉米株系。（3）据图2分析，选择
11、a1、a2、a3玉米株系，作为超量表达P蛋白转基因玉米的生理特性研究的实验材料，理由是_。122022江苏省常熟市高三阶段抽测新冠病毒是一种单链RNA病毒，常用“荧光RTPCR技术”进行检测，方法是取检测者的mRNA逆转录出cDNA，并大量扩增，用荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA。请回答下列问题：（1）“荧光RTPCR技术”所用的试剂盒中通常都应该含有、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。（2）如果要同时扩增两种基因，则试剂盒中的引物应该有种。下图为新冠病毒的“ORFlab基因”对应的cDNA片段结构示意图，则与之对应的引物结合的部位应该是图中的
12、（子链延伸方向为其自身的53，用图中数字作答）。若已知该基因的引物，能否依据其碱基序列设计出另一种引物？，理由是_。（3）在检测过程中，随着PCR的进行，反应产物不断累积，“杂交双链”荧光信号的强度也等比例增加。可通过荧光强度的变化监测产物量的变化从而得到一条荧光扩增曲线图（如下图）。“平台期”出现的最可能的原因是_。理论上，在检测过程中，有荧光标记的“杂交双链”出现，则说明检测结果呈（填“阴”或“阳”）性，但为了保证检测结果的准确性，一般要达到或超过阈值时才确诊。现有两个待检样本，检测时都出现了上述形态的曲线，但甲的a点比乙的a点明显左移。请给这种结果做出科学合理的解释（试剂盒合格且正常，操
13、作过程规范且准确）：_。132022汾湖高级中学教学反馈测试 枯草芽孢杆菌可分泌纤维素酶。研究者筛选到一株降解纤维素能力较强的枯草芽孢杆菌菌株（B菌），从中克隆得到了一种纤维素酶（C1酶）基因。将获得的C1酶基因与高效表达载体（HT质粒）连接，再导入B菌，以期获得降解纤维素能力更强的工程菌。（1）纤维素属于糖，因此经过一系列酶催化最终可降解成单糖，该单糖是。（2）对克隆得到的C1酶基因测序，与数据库中的C1酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，但两者编码出的蛋白的氨基酸序列相同，这是因为_。（3）C1酶基因以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为53。为了使C1酶基因按照正确的方向与已
14、被酶切的HT质粒连接，克隆C1酶基因时在其两端添加了Sma 和BamH 的酶切位点。该基因内部没有这两种酶切位点。图1中酶切位点1和2所对应的酶分别是。（4）将纤维素含量为20%的培养基分为三组，一组接种工程菌，对照组1不进行处理，对照组2进行相应处理。在相同条件下培养96小时，检测培养基中纤维素的含量。结果（图2）说明工程菌降解纤维素的能力最强。对照组2的处理应为_。（5）预期该工程菌在处理废弃物来保护环境方面可能的应用_。（举一例）142022广州市高三年级阶段训练虫草中的超氧化物歧化酶（PSSOD）具有抗衰老作用。研究人员培育了能合成PSSOD的转基因酵母菌。结合下图回答下列问题。（注：
15、Hind和ApaL是两种限制酶，箭头表示酶的切割位置。）（1）将图中的重组 DNA 分子用Hind和ApaL完全酶切后，可得到种DNA片段。（2）作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因，必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌， 所使用的培养基（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶，理由是_。（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为。 为了确定受体细胞中PSSOD基因是否转录，可用标记的作探针与从受体细胞中提取的RNA 进行分子杂交检测， 分子杂交的原理是。（4）利用蛋白质工程获得活性更高的PSSOD时，需根据所设计蛋白质的结构推测其氨
16、基酸序列，最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经获得所需的基因。课后定时检测案431解析：目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物，A正确；限制性内切核酸酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶，B正确；胰岛素具有生物活性，胰岛素原不具有生物活性，所以人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，C正确；载体上的抗性基因可用于筛选含重组DNA的细胞，但不能促进目的基因的表达，D错误。答案：D2解析：蛋白质工程是在分子水平上对现有蛋白质的基因分子进行操作，改造基因即改造蛋白质，而且可以遗传，A错误；蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子，B正确；对蛋白质的改造是通过直接改造决定蛋白质
17、的基因来实现的，C错误；蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是不完全相同的，D错误。答案：B3答案：B4解析：过程获得的目的基因已不含非编码区和内含子，因此不能用于比目鱼基因组测序，A错误；多个抗冻基因编码区依次相连形成的新基因表达的是多个抗冻蛋白的重复序列，而不是抗冻蛋白中11个氨基酸的重复序列，因此不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，B正确；导入农杆菌是为了扩增和更易导入番茄细胞，C错误；DNA探针技术不能检测基因是否完全表达，目的基因的完全表达应该检测表达产物蛋白质，D错误。答案：B5解析：以水稻RNA为模板通过逆转录可以合成cDNA，然后再以cDNA为模板利用PCR技术可获得大量OsPTF
18、基因，A正确；识图分析可知，抗除草剂基因位于启动子2的后面，因此RNA聚合酶与启动子2识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录，B错误；由于图中TDNA的序列中含有目的基因和抗除草剂基因，故可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的基因的大豆愈伤组织，C正确；用EcoR、BamH酶同时切重组Ti质粒后，会得到三种片段：含有耐低磷基因OsPTF的片段、含有除草剂基因的片段和只含启动子1的片段，因此经电泳分离至少得到两条带，即含耐低磷基因OsPTF的片段和含除草剂基因的片段，D正确。答案：B6解析：DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，
19、在DNA连接酶作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物共有3种，即质粒与质粒的连接、目的基因与目的基因的连接、目的基因与质粒的连接，A错误；DNA连接酶的作用是将酶切后得到的具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，形成一个重组质粒时可形成4个磷酸二酯键，B错误；EcoR和BamH切割形成的黏性末端不同，而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此为了防止目的基因反向连接和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamH，C正确；题图显示，在构建基因表达载体的过程中质粒中的青霉素抗性基因和四环素抗性基因都不会被破坏，导入普通质粒的大肠杆菌和导入重组质粒的大肠杆菌都能在含青霉素
20、的培养基中生长，因此能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞不一定含有目的基因，D错误。答案：ABD7解析：通常引物1和引物2不能有碱基互补配对关系，否则引物之间会相互结合，A正确；两引物参与子链的形成，不能反复利用，B错误；若两引物的脱氧核苷酸数相同，引物2的熔解温度较高，推测GC含量较高，C正确；结合以上分析可知，复性所需温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度等因素，D正确。答案：ACD8解析：(1)启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，用于启动基因的转录，而终止子是基因转录的结束信号，故在构建基因表达载体中，使用了玉米叶绿体特异性基因RbcL基因的启动子和终止子，其目的是保证R基因可
21、以在叶绿体中正常表达；表达载体构建需用到的工具酶有限制酶(切割目的基因和载体)和DNA连接酶(连接切割过的目的基因和载体)。(2)“修改R基因中部分碱基，以改变R酶部分氨基酸序列，以进一步提高R酶的活性”的目的是改造蛋白质，故属于蛋白质工程，该工程是在基因水平进行的操作。(3)在植物组织培养过程中，生长素和细胞分裂素的比例影响细胞的分化：当生长素与细胞分裂素的比例适中时，可诱导形成愈伤组织，故培养基A的主要作用是诱导脱分化形成愈伤组织；当生长素的比例大于细胞分裂素比例时，可诱导生根，故诱导培养物生根的培养基编号为C。(4)叶绿体基因工程还可以避免如花粉等的基因污染，其原因是叶绿体的基因不会进入
22、花粉，从而避免了重组基因的扩散，具有安全性；此外由于目的基因导入的是叶绿体，有性生殖时后代不会发生性状分离，故具有一定的实用性。答案：(1)保证R基因可以在叶绿体中正常表达限制酶和DNA连接酶(2)蛋白质(3)诱导脱分化形成愈伤组织C(4)安全性：外源基因不会随花粉扩散；实用性：其有性生殖时后代不会发生性状分离9解析：(1)利用RNA得到相应DNA的方法为逆转录，起作用的酶为逆转录酶，在体外将DNA扩增的技术是PCR(多聚酶链式反应)。(2)Nco的识别切割位点为，Nhe的识别切割位点为，C分子的两端分别有GATC和GTAC序列，根据碱基互补配对原则，可知需要用限制酶Nco、Nhe切割质粒B。
23、由于同种限制酶切割得到的DNA片段两端黏性末端相同，用DNA连接酶连接时可出现S基因自身环化以及S基因与载体反向连接的现象，所以常选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割，目的是防止S基因自身环化、防止S基因与载体反向连接、防止载体自身环化。(3)图中表示筛选的过程是(筛选含重组质粒的P型酵母菌)，其质粒上的标记基因SUC2能控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存，筛选时应使用以蔗糖为唯一碳源的培养基。为达到利用标记基因筛选的目的，普通的P型酵母菌应该满足的条件是自身不能合成蔗糖酶(普通的P型酵母菌不能利用培养基中的蔗糖生存)。(4)重组疫苗注入志愿者体内后，S蛋白基因指导合成的
24、S蛋白作为抗原，刺激机体产生特异性免疫过程，机体免疫系统产生能与之相结合的抗体，抗体的分泌量可作为检测疫苗对志愿者免疫效果的指标。参加临床试验的志愿者需要满足无SARSCoV2感染史，即未感染过新冠病毒，因为有SARSCoV2感染史的志愿者血清中会存在一定量的相应抗体，对试验结果产生干扰。答案：(1)逆转录PCR(2)NcoNhe防止S基因自身环化、防止载体自身环化、防止S基因与载体反向连接(3)不能合成蔗糖酶(4)抗原无有SARSCoV2感染史的志愿者血清中会存在一定量的相应抗体，对试验结果产生干扰10解析：(1)过程为逆转录出单链的DNA，在合成双链的DNA，需要的酶是逆转录酶和DNA聚合
25、酶。利用PCR技术可以扩增目的基因，PCR反应体系中除含缓冲液、模板DNA、四种脱氧核苷酸外，还应有引物和耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)。(2)为了使目的基因能正常表达，构建基因表达载体时需要在目的基因的两端添加启动子和终止子。为了使目的基因能定向插入表达载体，避免自身环化，常常在目的基因的两端插入不同的限制性酶切位点。图中过程在含有卡那霉素的培养基上培养，说明构建的重组质粒上含有的标记基因是卡那霉素抗性基因。(3)将离体的细胞培育成一个完整的植株采用的技术是植物组织培养技术。这种技术的繁殖方式为无性繁殖，能够保持优良品种的遗传特性。(4)若从个体水平鉴定，可通过接种烟草花叶病毒(
26、TMV)的方法来确定植株是否具有抗性以及抗性的强度。答案：(1)逆转录酶和DNA聚合酶引物和TaqDNA聚合酶(2)启动子和终止子使目的基因能定向插入表达载体，避免自身环化卡那霉素(3)植物组织培养遗传特性(4)TMV接种11解析：(1)强启动子能驱动基因的持续转录，说明强启动子能被RNA聚合酶识别并结合。为使P基因在玉米植株中超量表达，同时确保强启动子和P基因不被破坏，故应优先选用BamH和Sac酶组合，将片段和Ti质粒切开后，利用DNA连接酶构建重组表达载体。TDNA在该实验中的作用是将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞的染色体DNA上。(2)由图1可知，潮霉素抗性基因位于Ti质
27、粒的TDNA，随TDNA整合到玉米细胞的染色体上，故将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中可加入潮霉素进行筛选，培养基中生长出的转基因玉米株系，就是所需的转基因玉米株系。(3)由图2可知，a1、a2、a3玉米株系的P蛋白表达量显著高于野生型玉米，所以可以选择a1、a2、a3玉米株系，作为超量表达P蛋白转基因玉米的生理特性研究的实验材料。答案：(1)RNA聚合酶BamH和Sac将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上(2)潮霉素(再)分化(3)a1、a2、a3玉米株系的P蛋白表达量显著高于野生型玉米12解析：(1)根据题目信息可知，荧光RTPCR技术所用的试剂
28、盒中通常都应该含有：逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、引物、四种脱氧核苷酸、缓冲体系。(2)根据PCR技术的原理，在扩增DNA分子时每一条链均需与相应的引物结合才能进行扩增，因此如果要成功将上述两个独立基因分别扩增出来，则在试剂盒中的引物应该有4种；在利用PCR技术扩增DNA分子过程中，DNA聚合酶只能从引物的3端开始连接脱氧核苷酸，又由于DNA的两条链是反向平行的，所以引物与DNA分子单链的3端(OH)相结合即图示中的1和4所示部位。由于两段引物的碱基序列没有相关性，既不相同，也不互补，因此不能根据该基因的引物的碱基序列设计出另一种引物。(3)分析荧光扩增曲线图，图中曲线
29、通过荧光强度变化反映产物量的变化，因此曲线中“平台期”出现的最可能原因是试剂盒中的原料和探针数量一定，超出一定的循环数后，荧光标记的杂交双链不再增加。理论上，在检测过程中，有荧光标记的“杂交双链”出现，则说明检测结果呈阳性，为了保证检测结果的准确性，一般要达到或超过阈值时才确诊。先检测结果甲的a点比乙的a点明显左移，说明甲样本中的新冠病毒含量更高达到阈值所需的循环数更少。答案：(1)逆转录酶耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)(2)44、1不能两段引物的碱基序列没有相关性(既不相同，也不互补)(3)试剂盒中的原料、引物和探针数量一定，超出一定的循环数后，荧光标记的“杂交双链”不再增加阳甲
30、样本中的新冠病毒含量更高达到阈值所需的循环数更少13解析：(1)纤维素是葡萄糖聚合形成的多糖，所以经过酶的催化作用，最终降解为葡萄糖。(2)由于密码子具有简并性，所以即使克隆得到的C1酶基因测序，与数据库中的C1酶基因编码序列相比有两个碱基对不同，仍然可以编码相同的氨基酸。(3)根据题干信息“以B链为转录模板链，转录时mRNA自身的延伸方向为53”，所以B链的方向是从35，根据质粒上启动子的方向，所以B链3应该用BamH 进行切割，而其5端应该用Sma进行切割。(4)本实验的目的是证明工程菌降解纤维素的能力最强，所以对照组1不作处理，组3是添加工程菌，组2的处理是直接用纤维素酶进行分解纤维素，
31、即向培养基中接种纤维素酶(C1酶)。(5)该工程菌可以高效降解纤维素，所以可以降解秸秆，减少秸秆燃烧带来的空气污染。答案：(1)多葡萄糖(2)密码子具有简并性，发生碱基的改变仍然编码同一种氨基酸(3)BamH、Sma(顺序不能调换)(4)向培养基中接种纤维素酶(C1酶)(5)降解秸秆，减少秸秆燃烧带来的空气污染14解析：(1)图中基因表达载体含有1个Hind切割位点和2个ApaL切割位点，因此将图中的基因表达载体用Hind和ApaL完全酶切后，可得到3种DNA片段。(2)作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因，必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，因此，图示表达载体上的URA3基因可作为标记基因，
32、供鉴定和选择；因为只有含有重组质粒的酵母菌才能在该培养基上生存，因此为了筛选出成功导入表达载体的酵母菌，所使用的培养基不需要添加尿嘧啶。(3)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。为了确定受体细胞中PSSOD基因是否转录，可用标记的PSSOD基因作探针进行分子杂交检测，由于该检测中是RNA与DNA单链进行杂交，因此分子杂交的原理是碱基互补配对。(4)利用蛋白质工程获得活性更高的PSSOD时，需根据所设计蛋白质的结构推测其氨基酸序列，最终确定相对应的脱氧核苷酸序列，确定下来之后需要在原基因基础上进行基因修饰或者基因改造，甚至直接人工合成获得所需的基因。答案：(1)3(2)不需要成功导入表达载体的酵母菌具有URA3基因(3)转化PSSOD基因的片段(“PSSOD基因”)碱基互补配对(4)基因修饰或基因合成(基因修饰或基因合成或人工合成)