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1、探究探究实践实践酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养探究探究实践实践分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板画线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在菌体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。实验原理目的要求1.学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。2.学会进行无菌操作。3.尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。材料用具酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱
2、和恒温培养箱等。酵母菌的纯培养探究探究实践实践方法步骤称取去皮的马铃薯称取去皮的马铃薯200g切成小块切成小块加加水水1000mL，加加热热 煮煮 沸沸 至至 马马 铃铃 薯薯软软烂烂用纱布过滤用纱布过滤滤滤 液液 中中 加加 入入20g葡葡萄萄糖糖，1520g琼琼脂脂用蒸馏水定容至用蒸馏水定容至1000mL得到滤液得到滤液1.制备培养基配制培养基 称取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL,加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、1520g琼脂，用蒸馏水定容至1000mL。酵母菌的纯培养探究探究实践实践方法步骤1.制备培养基灭菌 将配制好的培养
3、基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再让如高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121的条件下，灭菌1530min。将5 8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160 170灭菌2h。取取5 8套套培养培养皿皿培养皿叠成一束培养皿叠成一束用几层牛皮纸包紧用几层牛皮纸包紧放放 入入干干 热热 灭灭 菌菌 箱箱内内，160 170灭灭菌菌2h将配制好的将配制好的培养基培养基转移转移到锥形瓶中，加棉塞到锥形瓶中，加棉塞包上牛皮纸，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧并用皮筋勒紧压压力力100kPa、温温度度为为121的的条条件件下下，灭灭 菌菌1 5 30min1.制
4、备培养基倒平板 待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。倒平板注意事项：温度：50左右冷凝后平板倒置操作：在酒精灯火焰附近酵母菌的纯培养探究探究实践实践方法步骤问题问题1：为什么需要使锥形瓶的瓶口过火焰？问题问题1：为什么需要使锥形瓶的瓶口过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基。问题问题2：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？防止培养基表面的水分过度挥发;防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。问题问题3：怎么确定所倒平板未被杂菌污染？将所倒平板放入 37 的恒温箱中培养 1224h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。2.接种和分离酵母菌通
5、过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线的具体操作见下面的流程图。酵母菌的纯培养方法步骤探究探究实践实践2.接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线的具体操作见下面的流程图。酵母菌的纯培养方法步骤探究探究实践实践平板划线法平板划线法划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）1 12 23 34 45 5连续划线法连续划线法分区划线法分区划线法平板划线法注意事项（1）接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同
6、位置连续划线多次（2）划线首尾不能相接（3）每次划线前灼烧接种环进行灭菌（4）划线操作结束后，仍需灼烧接种环平板划线法平板划线法问题问题4：在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。问题问题5：在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。问题问题6：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？1 1123接种前，接种前，杀死接种
7、杀死接种环上的微环上的微生物，避生物，避免污染培免污染培养基养基2 2杀死残留杀死残留菌种，确菌种，确保每次划保每次划线菌种来线菌种来自上次划自上次划线的末端线的末端3 3划线结束划线结束后，杀死后，杀死残留菌种，残留菌种，避免环境避免环境污染和感污染和感染操作者染操作者接种环三个不同时期灼烧的目的接种环三个不同时期灼烧的目的划线前划线前划线时划线时划线后划线后平板划线法平板划线法3.培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的培养箱中培养24 48h。作作对对照照，该该培培养养皿皿无无菌菌落落说明培养基没有污染说明培养基没有污染既可以防止培养基表面的既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，盖上的水珠落入培养基，造成污染造成污染酵母菌的纯培养2.接种和分离酵母菌1.制备培养基3.培养酵母菌配制培养基（马铃薯、葡萄糖、琼脂、水）灭菌倒平板（在酒精灯火焰附近操作）培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅）培养皿：干热灭菌（干热灭菌锅）用接种环在固体培养基上用平板划线法接种平板倒置，放入28左右的恒温培养箱培养Thanks for your watching！