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1、 课时规范练 38 微生物的培养技术及应用一、基础练1.下列关于培养基的说法,正确的是( )A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基C.除水以外的无机物只能提供无机盐D.无机氮源不可能提供能量2.下列有关微生物培养的叙述,不正确的是( )A.倒平板时需在酒精灯火焰旁进行B.溶化牛肉膏时,称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.平板划线法接种时,每次划线操作之前都需对接种环进行灭菌D.制备牛肉膏蛋白胨培养基时,灭菌后加入琼脂并用玻棒不断搅拌,目的是促进其溶化3.在培养基的配制过程中,具有如下步骤,其正确顺序为溶化调 pH加棉塞包扎分装称量( )A.C.
2、B.D.4.漆酶属于木质降解酶类,在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程,相关叙述正确的是( )A.饮用水中含有大量微生物,是分离产漆酶菌株的首选样品B.选择培养基中需要加入漆酶的底物作为唯一碳源C.在已涂布的平板上直接划线可以进一步纯化获得单菌落D.斜面培养基中含有大量营养物,可在常温下长期保存菌株5.(2020 山东二模)化学需氧量(COD)是衡量污水中有机污染物含量的重要指标。从某污水处理系统中分离出多种细菌,经分离筛选获得具有高效降低 COD 能力的菌株,过程如图所示。下列相关说法正确的是( )A.可用显微镜直接计数法统计菌液中的细菌数目来确定接种
3、时菌液的最佳稀释倍数B.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时,需在倒平板后进行灭菌操作 C.由菌落分布情况可知,在该固体培养基上接种的方法是平板划线法D.挑取单菌落后接种到液体培养基中培养,目的是纯化菌株6.下图表示培养和纯化酵母菌的部分操作步骤,下列相关叙述正确的是( )A.对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理B.步骤倒平板操作时,倒好后应立即将其倒过来放置C.步骤应多个方向划线,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落D.步骤划线结束后在皿盖上做好标注7.下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法,错误的是( )A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以,为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进
4、行分离B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同C.如果得到了 3 个或 3 个以上菌落数目在 30300 的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落8.将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量的蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到 M 培养基。回答下列问题。(1)M 培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素抑制 的生长,加入了链霉素的培养基属于 培养基。该培养基允许 生长,其他种类微生物生长。(2)M 培养基中
5、的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有(答出两点即可)。氮源进入细菌后,可参与合成的生物大分子有 (答出两点即可)。(3)若在 M 培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物,加入的显色剂是 。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了 3 个平板,统计的菌落数分别是 110、140 和 149,取平均值 133。乙同学涂布了 3 个平板,统计的菌落数分别是 27、169 和 176,取平均值 124。有人认为这两位同学的结果中,乙同学
6、的结果可信度低,其原因是 。二、提升练1.(2020 山东一模)生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类,研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后 倒成平板,然后在平板上划分数区,将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域,培养结果如图所示,下列说法正确的是( )A.培养基倒成平板后直接培养可判断有无污染B.培养基倒成平板后需要进行灭菌处理C.图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选2.(2020 山东青岛二模)将没有吃完的西瓜,盖上保鲜膜后放入冰箱,是很多人日常储藏西瓜的办法。有这样一种说
7、法:盖上保鲜膜储藏的西瓜中细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组针对上述说法进行探究,他们用保鲜膜保存了三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液,研究细菌的种类和数量。下列说法正确的是( )A.应该采用稀释涂布平板法进行接种B.瓜瓤浸出液是液体,因此培养时平板不用倒置C.仅需要设置盛有培养基的空白平板作对照D.可通过平板上菌落的特征初步判断细菌的种类3.做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述错误的是( )A.高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔
8、标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上4.(2020 山东青岛二中期末)筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后,若细菌能分解淀粉,培养平板经稀碘液处理,会出现以菌落为中心的透明圈(如图),实验结果见下表。菌落直径(C)/mm透明圈直径(H)/mm菌种H/C2.2细菌58.1.111.213.0细菌1.6有关本实验的叙述,正确的是( )A.培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质B.筛选分解淀粉的细菌时,菌液应稀释后涂布C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外 D.H/C 值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异5.(2020 山东临沂期中)为分离和培养土壤中能分解尿素的细菌,实验小组使
9、用了下列培养基配方,将各种物质溶解后,用蒸馏水定容到 1 000 mL,再经高温灭菌,制成固体培养基;经接种、培养后统计每克土壤样品中的活菌数目。回答下列问题。蛋KH PO Na HPO MgSO 7H O白葡萄 尿糖 素琼脂242442胨1g.0 10.0 1.0 15.01.4 g2.1 g0.2 gggg(1)根据培养基的成分判断,该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌? (填“能”或“不能”),原因是。(2)培养基常用 方法灭菌,培养皿常用 方法灭菌。待培养基冷却到 50 左右时,在酒精灯火焰附近倒平板,等平板冷却凝固后,将平板倒过来放置,可以防止,以免造成污染。(3)要统计每克土壤样品
10、中的活菌数目,宜采用 法接种,根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的 ,就能大约推测出样品中的活菌数。(4)培养分解尿素的细菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。(5)某同学在稀释倍数为 106 的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 234 个,那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.1 mL) 。(6)若在培养分解尿素的细菌的过程中,发现了另一种 B 细菌,在 B 细菌周围分解尿素的细菌的生长繁殖受到抑制,甲同学提出的观点是 B 细菌产生了不利于(抑制)分解尿素的细菌生存的物质。请你在以下实验的基础上,继续完成验证甲同学
11、所提观点的实验过程:(用文字和箭头表示)。课时规范练38 微生物的 培养技术及应用一、基础练1.A 根据培养基的物理性质,可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基,在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基;除水以外的无机物如NH HCO ,既可以是碳源,也可以是氮源,不仅仅提供无机盐;无机氮源有时也能提供能量,43如 NH3 可以为硝化细菌提供能量。2.D 倒平板时需在酒精灯火焰旁进行,A 项正确;溶化牛肉膏时,称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯,B 项正确;平板划线法接种时,每次划线操作之前都需对接种环进行灭菌,C 项正确;制备牛肉膏蛋白胨培养基时,灭菌前向牛肉膏蛋白
12、胨溶液中加 2%琼脂,加热并使其溶解,D 项错误。3.B 在培养基的配制过程中,根据微生物的生长需要,称量不同的营养物质,然后溶化、调整 pH、培养基的分装、加棉塞、包扎等,所以正确的顺序是。.B 饮用水中含有微生物较少,不一定含有产漆酶的菌株,分离产漆酶菌株的取样应该4到对应富含木质素的环境中,A 项错误;选择培养基中加入漆酶的底物作为唯一碳源,只有能够产生漆酶的菌株才能在该培养基上生长,其他微生物因缺少碳源不能生长,培养后可通过菌落特征挑出产漆酶的菌落,B 项正确;在涂布平板上长出的菌落可以通过平板划线法或稀释涂布平板法进一步纯化,C 项错误;斜面培养基能增大接种面积,可在低温下保存菌株,
13、但不能长期保存,D 项错误。5.A 利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法,这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目,因此可用来确定接种时菌液的最佳稀释倍数,A 项正确;制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时,需在灭菌操作后进行倒平板,B 项错误;由菌落分布情况可知,在该固体培养基上接种的方法是稀释涂布平板法,C 项错误;挑取单菌落后接种到液体培养基中培养,目的是增大菌株的数量(扩大培养),D 项错误。6.C 对实验操作的空间、操作者的衣着和手需要进行消毒处理,A 项错误;倒完平板后立即盖上培养皿,冷却后将平板倒过来放置,B 项错误;步骤多个方向划线,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落
14、,C 项正确;图中操作结束后需在培养皿皿底标注菌种及接种日期等信息,而不是在皿盖上做标注,D 项错误。7.D 土壤是微生物的天然培养基,土壤中各类微生物的数量不同,获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离,A 项正确;土壤中细菌总量高于土壤中能分解尿素的细菌的数量,所以选用的稀释范围不同,B 项正确;采用稀释涂布平板法进行计数时,得到了3个或 3 个以上菌落数目在 30300 的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数,C 项正确;选择培养基的菌落数目明显小于牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落,D 项错误。8.答案:(1)细菌 选择 特定种类的微生
15、物 抑制或阻止 (2)碳源、无机盐蛋白质、DNA (3)碘液 (4)乙同学的结果中,第 1 个平板的计数与另 2 个相差悬殊,结果的重复性差 解析:(1)链霉素是常用的抗生素,能够抑制细菌生长,加入链霉素的培养基从功能上来说是选择培养基,选择培养基只允许特定种类的微生物生长,抑制或阻止其他种类微生物生长。(2)M 培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有碳源、无机盐等。氮源进入细菌后,可参与合成蛋白质、DNA、RNA 等生物大分子。(3)淀粉遇碘变蓝色,若在 M 培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶
16、的微生物,则加入的显色剂是碘液。(4)乙同学结果不合理,因为第 1 个计数结果与另 2 个相差太远,不能简单地用其平均数,结果的重复性差。二、提升练1.AD 平板上不含任何生长因子,若倒成平板后直接培养,出现菌落说明已被杂菌感染,A 项正确;制备平板时,先灭菌再倒平板,B 项错误;图中菌落生活在乙、丙区域之间,说明同时需要乙和丙,C 项错误;不同菌种所需的生长因子不同,根据某些菌种需要特殊的生长因子的原理,可利用生长图形法筛选菌种,D 项正确。2.AD 研究细菌的种类和数量,需要采用稀释涂布平板法进行接种才能计数,A 项正确;接种时需要将菌液接种在固体培养基上,培养时平板需要倒置,这样可以防止
17、培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染,还可防止培养基表面的水分挥发,B 项错误;该实验是比较两种不同处理方式下西瓜上菌体的种类和数量,所以除需要设置盛有培养基的空白平板作对照外,还需要设置不盖保鲜膜同样条件下保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液后接种的平板做对照,C 项错误;不同菌体的菌落特征不同,所以可通过平板上菌落的特征初步判断细菌的种类,D 项正确。3.ABC 高压灭菌加热结束后,自然冷却至压力表指针回到零后再慢慢打开排气阀以排除余气,然后才能开盖取物,A 项错误;倒平板时左手拿培养皿,右手拿锥形瓶,左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖,B 项错误;灼烧接
18、种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种,C 项错误;在微生物的培养中,一般将培养皿倒置,应在皿底上用记号笔做标记,D 项正确。4.ABD 培养基一般含有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等成分,A 项正确;筛选淀粉分解菌时,需要对菌液进行一系列的梯度稀释,再将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养,B 项正确;由题意可知,以上两种菌均会产生透明圈,说明两种菌均可以产生淀粉酶并分泌到细胞外分解淀粉,C 项错误;淀粉分解菌的 H/C 越大,说明其产生的淀粉酶分解的淀粉相对越多,可说明该淀粉分解菌分解淀粉的能力越强,D 项正确。5.答案:(1)不能 培养基含蛋白胨,尿素不是唯一氮
19、源,不能选择出只以尿素为氮源的微生物 (2)高压蒸汽灭菌 干热灭菌 培养皿盖上的水珠落入培养基 (3)(稀释)涂布平板 菌落数目 (4)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生 (5)2.34109 (6)去除中的 B 细菌保留培养基再接种 A 细菌培养一段时间观察 A 细菌的生长情况解析:(1)据表分析,表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源,尿素不是唯一氮源,不能选择出只以尿素为氮源的微生物,故不能分离出尿素分解菌。(2)培养基常用高压蒸汽灭菌方法灭菌,培养皿常用干热灭菌法灭菌。待培养基冷却到 50 左右时,在酒精灯火焰 附近倒平板,等平板冷却凝固后,将平板倒
20、过来放置,可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基,以免造成污染。(3)固体培养基上的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法,稀释涂布平板法适用于微生物的统计计数,根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中的活菌数。(4)检测培养基是否被污染,需要将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生,如果有菌落说明被污染,如果没有菌落说明没被污染。(5)根据题意可知,每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值体积稀释倍数=2340.1106=2.34109。(6)该实验的目的是验证 A 细菌生长繁殖受到抑制的原因是 B 细菌产生了不利于(抑制)A 细菌生存的物质,可以利用培养过 B 细菌的培养基培养 A 细菌,看 A 细菌的生长繁殖是否受到影响,实验过程为:去除中的 B 细菌保留培养基再接种 A 细菌培养一段时间观察 A细菌的生长情况。