《焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）(T-GDBK 007—2023).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）(T-GDBK 007—2023).pdf（7页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、ICS 67.050CCS X 28团体标准T/GDBK 007-20232023-10-20 发布2023-10-20 实施广东省焙烤食品糖制品产业协会发布焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）Rapid determination of acrolein in baked foodMicroplate readermethod(fluorescent probe method)T/GDBK 0072023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本
2、文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会和中山市食品学会共同提出。本文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会归口。本文件起草单位：中山市食品学会、中山洪力健康食品产业研究院有限公司、咀香园健康食品（中山）有限公司、广东省焙烤食品糖制品产业协会、暨南大学、中山市日威食品有限公司、利诚检测认证集团股份有限公司、中山市强晟水产养殖有限公司、中山海关技术中心、广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、华南农业大学、廉江市检验检测中心、广东药科大学、广东省中山市坦洲镇农业服务中心、广州广电计量检测股份有限公司、中山市技师学院、中山市第一职业技术学校、中山市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、达能（中
3、国）食品饮料有限公司、中山市农产品质量安全检验所、中山市神湾镇大石头盘菠萝专业合作社、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技（中山）有限公司、中山市火炬高技术产业开发区食品药品监督所、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。本文件起草人：胡志高、郑萍、林国强、吕品、欧隽滢、罗紫明、钟光波、唐丽、唐光华、唐雪娟、欧仕益、陈伦韬、黄思韵、陈琼华、谭应职、张发妙、黄焯枝、冯鹏、叶文杰、陈丽红、莫康扬、李蓉、陈月玲、吴小勇、朱华兴、叶文杰、李向丽、张延杰、刘金川、董二飞、范雪琳、张瑶、谈欣乐、普昕瑞、吴洁伊、黄乐炫。本文件为首次发布。T/GDBK 007-20231焙烤食品中丙烯
4、醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）1 1范围本文件规定了焙烤食品中丙烯醛含量测定的荧光法快速测定的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告等。本文件适用于焙烤食品中丙烯醛的测定，方法检出限为1.12 g/kg，定量限为3.92 g/kg。2 2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确
5、定标准测量方法重复性与再现性的基本方法3 3术语和定义3.1PET 效应photophotoelectron transfer effect指光致电子转移效应，即在光的诱导下，电子进行分子内或分子间转移的现象。当入射光照射探针分子，由于电子从供体转移到激发态荧光团，供体分子不发射或仅发射微弱荧光。当探针与分析物结合后，光诱导的电子转移被阻断，荧光团就会恢复荧光发射。4 4原理N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺中的巯基对萘酰亚胺荧光母核具有 PET 效应，其本身荧光十分微弱；而当丙烯醛存在的情况下，N-乙酸甲酯-4-巯基-1，8-萘酰亚胺的巯基与丙烯醛通过迈克尔加成反应形成加合产物，使得
6、PET 效应被抑制，加合物在波长 380 nm 发射光激发下产生强荧光，峰值在 510nm 波长处，其荧光强度在固定条件下与待测样品中丙烯醛浓度成正比，使用带荧光检测器的酶标仪检测，外标法定量。荧光探针法测定丙烯醛的原理见图 1。T/GDBK 007-20232无荧光无荧光强烈荧光强烈荧光图1荧光探针法测定丙烯醛的原理图5 5试剂和材料5.1试剂5.1.1除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。5.1.24-溴-1，8-萘二甲酸酐（分析纯）。5.1.3甘氨酸（分析纯）。5.1.4三乙胺（分析纯）。5.1.5乙醇（分析纯）。5.1.6盐酸（分析纯）。5.1.7对
7、甲苯磺酸（分析纯）。5.1.8甲醇（分析纯）。5.1.9九水合硫化钠（分析纯）。5.1.10二甲基亚砜（DMSO，分析纯）。5.1.11柠檬酸（分析纯）。5.1.12磷酸氢二钠（分析纯）。5.1.13丙烯醛（分析纯）。5.2荧光探针的制备将 554 mg 4-溴-1，8-萘二甲酸酐和 165 mg 甘氨酸、252 mg 三乙胺在 80 的乙醇回流磁力搅拌反应 6 h，反应完成后冷却至室温，向反应液中加入 2.5 mL 1M 盐酸溶液调节 pH 至白色沉淀析出，经抽滤得到的固体分别用 10 mL 水和乙醇进行洗涤，得到的白色固体即为 N-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺；室温下，将 167 mg
8、 N-乙酸基-4-溴-1，8-萘酰亚胺和 600 mg 九水合硫化钠溶解于 5 mL N，N-二甲基甲酰胺中搅拌反应 24 h，反应结束后将反应液倒入 20 mL 水中，并用 1M 盐酸水溶液调节 pH 至 2，有黄色沉淀析出。经抽滤得到的固体用水洗涤五遍后，得到的黄色固体即为 N-乙酸基-4-巯基-1，8-萘酰亚胺（Pr-ACR），冷冻干燥，置于-20 冰箱中备用。5.3试剂配制5.3.1柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 pH 为 2.2，1 mmol/L，15.198 g 一水合柠檬酸和 1.955 g 十二水合磷酸氢二钠溶解于水中，再用 250 mL 容量瓶定容。5.3.2探针母液：2.15 m
9、g Pr-ACR 溶于 0.5 mL DMSO 中，制成浓度为 150 mmol/L 探针母液，母液要现配现用。5.3.3探针工作液：移取 50 L Pr-ACR 母液加入到 5 mL 容量瓶中，用 4.3.1 的缓冲溶液定容到 5 mL，工作液要现配现用。T/GDBK 007-202335.4标准品丙烯醛标准品（C3H4O,CAS 号：107-02-8）：纯度大于 98.0%。5.5标准溶液的配置用水配制成丙烯醛浓度为 30 mol/L 的溶液，再用水稀释混匀得到一系列浓度的标准溶液（0mol/L、3 mol/L、6 mol/L、12 mol/L、18 mol/L、24 mol/L、30mo
10、l/L）。6 6仪器设备6.1酶标仪（带荧光检测器，Ex 250-600 nm，Em 280-600 nm)。6.296 孔板（黑色）。6.3粉碎机(细度 30-100 目）。6.4天平：感量 0.00001 g。6.5移液枪（1 L-10 L、10 L-100 L 和 100 L-1000 L）。6.6常规玻璃仪器。6.7离心机（12000 转/分，14000g)。7 7试验步骤7.1准曲线的绘制移取 100 L 4.3.3 中的探针工作液到 96 孔板中，再加入 50 L 4.5 中不同浓度的丙烯醛标准液，使丙烯醛浓度分别为 0 mol/L、1 mol/L、2 mol/L、4 mol/L、
11、6 mol/L、8 mol/L、10mol/L，摇匀，并置于 25 下反应 90 min 后，置于酶标仪中进行荧光检测，读取波长 510 nm 处的荧光强度值（激发波长为 380 nm），其荧光发射光谱图见附录 A。7.2样品的制备将 1 g 磨碎的食品粉末加入到 15 mL 离心管中，加入 5 mL 水，搅拌均匀并超声提取 20 min，再用离心机在 10 000 r/min 的转速下离心 20 min，收集上清液。离心管中的沉淀物质再用 2 mL 水按上述操作重复提取两次，合并 3 次提取得到的上清液，定容到 10 mL，备用。7.3样品的测定移取 100 L 4.3.3 中的探针工作液到
12、黑色 96 孔板中，再加入 50 L 6.2 中的样品提取液，摇匀，置于 25 下反应 90 min 后，用酶标仪进行荧光检测，读取波长 510 nm 处的荧光强度值（激发波长为380 nm），每次处理重复 3 次。7.4空白实验除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。8 8试验数据处理T/GDBK 007-20234样品中丙烯醛的含量按以下公式计算：（1）式中：X 样品中丙烯醛的含量，毫克/千克（mg/kg)；56.06 丙烯醛的摩尔质量；C 样品液中丙烯醛的摩尔质量浓度，微摩/升（mol/L)；V 被测样品的总体积，毫升（mL）；m 称取样品的质量，克（g）。计算结果以重复性条件下获
13、得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 9精密度9.1一般规定本文件的精密度按照GB/T 6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以 95%的可信度来计算。9.2重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。9.3再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。1010试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容：试验对象；所使用的标准；所使用的方法；结果；观察到的异常现象；试验日期。T/GDBK 007-20235附录A（资料性）荧光发射光谱图图1 荧光探针Pr-ACR与不同浓度丙烯醛（从下至上，浓度依次为0 mol/L、1 mol/L、2 mol/L、3 mol/L、4 mol/L、5 mol/L、6 mol/L、7 mol/L、8 mol/L、9 mol/L、10 mol/L）混合后荧光发射光谱图的变化情况（左）及相应的标准曲线（右）。