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1、HJ 中华人民共和国国家环境保护标准 HJ 77.42008 土壤和沉积物 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法 Soil and sediment Determination of polychlorinated dibenzo-p-dioxins（PCDDs）and polychlorinated dibenzofurans（PCDFs）Isotope dilution HRGC-HRMS 2008-12-31 发布 2009-04-01 实施 环 境 保 护 部 发 布 HJ 77.42008 中华人民共和国环境保护部 公 告 2008 年 第 68 号 为贯彻 中华
2、人民共和国环境保护法、中华人民共和国水污染防治法、中华人民共和国大气污染防治法和中华人民共和国固体废物污染环境防治法，保护环境，保障人体健康，规范二口恶英类的测定方法，现批准水质 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法等四项标准为国家环境保护标准，并予以发布。标准名称、编号如下：一、水质 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法（HJ 77.12008）二、环境空气和废气 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法（HJ 77.22008）三、固体废物 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法（HJ 77.32008）四、土壤和沉
3、积物 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法（HJ 77.42008）以上标准自 2009 年 4 月 1 日起实施，由中国环境科学出版社出版，标准内容可在环境保护部网站（）查询。自标准实施之日起，多氯代二苯并二口恶英和多氯代二苯并呋喃的测定 同位素稀释高分辨毛细管气相色谱/高分辨质谱法（HJ/T 772001）废止。特此公告。2008 年 12 月 31 日 i HJ 77.42008 ii HJ 77.42008 目 次 前 言.iv 1 适用范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义、符号和缩略语.1 4 方法原理.3 5 试剂和材料.4 6 仪器和设备.5 7
4、采样.6 8 样品预处理.6 9 样品前处理.6 10 样品净化.7 11 仪器分析.8 12 数据处理.10 13 报告.12 14 质量控制和质量保证.14 15 废物处理.15 16 注意事项.16 附录 A（规范性附录）二口恶英类分析流程图.17 附录 B（资料性附录）二口恶英类内标物质使用示例.18 附录 C（资料性附录）标准溶液质量浓度序列示例.19 附录 D（资料性附录）仪器设定条件示例.20 附录 E（资料性附录）报告格式示例.21 iii HJ 77.42008 前 言 为贯彻中华人民共和国环境保护法，保护环境，保障人体健康，规范土壤及沉积物中二口恶英类的测定方法，制定本标准
5、。本标准规定了土壤及沉积物中二口恶英类的同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法。本标准是对多氯代二苯并二口恶英和多氯代二苯并呋喃的测定 同位素稀释高分辨毛细管气相色谱/高分辨质谱法（HJ/T 772001）的修订。自本标准实施之日起，替代HJ/T 772001 中土壤及沉积物样品测定部分。本标准的附录 A 为规范性附录，附录 B、附录 C、附录 D、附录 E 为资料性附录。本标准由环境保护部科技标准司组织制订。本标准起草单位：国家环境分析测试中心。本标准环境保护部 2008 年 12 月 31 日批准。本标准自 2009 年 4 月 1 日起实施。本标准由环境保护部解释。iv HJ 77.42
6、008 土壤和沉积物 二口恶英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法 1 适用范围 1.1 本标准规定了采用同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法（HRGC-HRMS）对 2,3,7,8-氯代二口恶英类、四氯八氯取代的多氯代二苯并-对-二口恶英（PCDDs）和多氯代二苯并呋喃（PCDFs）进行定性和定量分析的方法。1.2 本标准适用于全国区域土壤背景、农田土壤环境、建设项目土壤环境评价、土壤污染事故以及河流、湖泊与海洋沉积物的环境调查中的二口恶英类分析。1.3 方法检出限取决于所使用的分析仪器的灵敏度、样品中的二口恶英类质量分数以及干扰水平等多种因素。2,3,7,8-T4CDD 仪器
7、检出限应低于 0.1 pg，当土壤及沉积物取样量为 100 g 时，本方法对2,3,7,8-T4CDD 的最低检出限应低于 0.05 ng/kg。2 规范性引用文件 本标准内容引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB 17378.3 海洋监测规范 第 3 部分：样品采集、储存与运输 GB 17378.5 海洋监测规范 第 5 部分：沉积物分析 HJ/T 166 土壤环境监测技术规范 3 术语和定义、符号和缩略语 3.1 术语和定义 3.1.1 二口恶英类 polychlorinated dibenz
8、odioxins（PCDDs）and polychlorinated dibenzofurans（PCDFs）多氯代二苯并-对-二口恶英（PCDDs）和多氯代二苯并呋喃（PCDFs）的统称。3.1.2 异构体 isomer 在本标准中，具有相同化学组成但氯取代位置不同的二口恶英类互为异构体。3.1.3 同类物 congener 二口恶英类所有化合物互为同类物。二口恶英类共有 210 种同类物。3.1.4 2,3,7,8-氯代二口恶英类 isomer substituted at 2,3,7,8-positions 所有 2,3,7,8-位置被氯原子取代的二口恶英类同类物。包括 7 种四氯八氯代
9、二苯并-对-二口恶英以及10 种四氯八氯代二苯并呋喃，共有 17 种，见表 1。表 1 2,3,7,8-氯代二口恶英类 序号 异构体名称 简称 1 2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二口恶英 2,3,7,8-T4CDD 2 1,2,3,7,8-五氯代二苯并-对-二口恶英 1,2,3,7,8-P5CDD 3 1,2,3,4,7,8-六氯代二苯并-对-二口恶英 1,2,3,4,7,8-H6CDD 4 1,2,3,6,7,8-六氯代二苯并-对-二口恶英 1,2,3,6,7,8-H6CDD 1 HJ 77.42008 序号 异构体名称 简称 5 1,2,3,7,8,9-六氯代二苯并-对-二口恶英 1,
10、2,3,7,8,9-H6CDD 6 1,2,3,4,6,7,8-七氯代二苯并-对-二口恶英 1,2,3,4,6,7,8-H7CDD 7 八氯代二苯并-对-二口恶英 O8CDD 8 2,3,7,8-四氯代二苯并呋喃 2,3,7,8-T4CDF 9 1,2,3,7,8-五氯代二苯并呋喃 1,2,3,7,8-P5CDF 10 2,3,4,7,8-五氯代二苯并呋喃 2,3,4,7,8-P5CDF 11 1,2,3,4,7,8-六氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,7,8-H6CDF 12 1,2,3,6,7,8-六氯代二苯并呋喃 1,2,3,6,7,8-H6CDF 13 1,2,3,7,8,9-六氯代二苯
11、并呋喃 1,2,3,7,8,9-H6CDF 14 2,3,4,6,7,8-六氯代二苯并呋喃 2,3,4,6,7,8-H6CDF 15 1,2,3,4,6,7,8-七氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,6,7,8-H7CDF 16 1,2,3,4,7,8,9-七氯代二苯并呋喃 1,2,3,4,7,8,9-H7CDF 17 八氯代二苯并呋喃 O8CDF 3.1.5 二口恶英类内标 internal standard for PCDDs/PCDFs analysis 质量浓度已知的同位素（13C 或37Cl）标记的二口恶英类标准物质壬烷（或癸烷、甲苯等）溶液，见表 2。表 2 可供选用的二口恶英类内标
12、氯原子取代数 PCDDs PCDFs 13C12-1,2,3,4-T4CDD 13C12-2,3,7,8-T4CDF 13C12-2,3,7,8-T4CDD 13C12-1,2,7,8-T4CDF 四氯 37Cl4-2,3,7,8-T4CDD 13C12-1,2,3,7,8-P5CDD 13C12-1,2,3,7,8-P5CDF 五氯 13C12-2,3,4,7,8-P5CDF 13C12-1,2,3,4,7,8-H6CDD 13C12-1,2,3,4,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,6,7,8-H6CDD 13C12-1,2,3,6,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,7
13、,8,9-H6CDD 13C12-1,2,3,7,8,9-H6CDF 六氯 13C12-2,3,4,6,7,8-H6CDF 13C12-1,2,3,4,6,7,8-H7CDD 13C12-1,2,3,4,6,7,8-H7CDF 七氯 13C12-1,2,3,4,7,8,9-H7CDF 八氯 13C12-1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDD 13C12-1,2,3,4,6,7,8,9-O8CDF 3.1.6 毒性当量因子 toxicity equivalency factor（TEF）指各二口恶英类同类物与 2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二口恶英对 Ah 受体的亲和性能之比。3.1.7
14、 毒性当量 toxic equivalent quantity（TEQ）各二口恶英类同类物质量分数折算为相当于 2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二口恶英毒性的等价质量分数，毒性当量（TEQ）质量分数为实测质量分数与该异构体的毒性当量因子的乘积。3.2 符号和缩略语 3.2.1 PCDDs polychlorinated dibenzo-p-dioxins 多氯代二苯并-对-二口恶英。有 75 种同类物。3.2.2 PCDFs polychlorinated dibenzofurans 多氯代二苯并呋喃。有 135 种同类物。3.2.3 T4CDDs tetrachlorodibenzo-p-
15、dioxins 2 HJ 77.42008 四氯代二苯并-对-二口恶英。有 22 种异构体。3.2.4 P5CDDs pentachlorodibenzo-p-dioxins 五氯代二苯并-对-二口恶英。有 14 种异构体。3.2.5 H6CDDs hexachlorodibenzo-p-dioxins 六氯代二苯并-对-二口恶英。有 10 种异构体。3.2.6 H7CDDs heptachlorodibenzo-p-dioxins 七氯代二苯并-对-二口恶英。有 2 种异构体。3.2.7 O8CDD octachlorodibenzo-p-dioxin 八氯代二苯并-对-二口恶英。有 1 种
16、异构体。3.2.8 T4CDFs tetrachlorodibenzofurans 四氯代二苯并呋喃。有 38 种异构体。3.2.9 P5CDFs pentachlorodibenzofurans 五氯代二苯并呋喃。有 28 种异构体。3.2.10 H6CDFs hexachlorodibenzofurans 六氯代二苯并呋喃。有 16 种异构体。3.2.11 H7CDFs heptachlorodibenzofurans 七氯代二苯并呋喃。有 4 种异构体。3.2.12 O8CDF octachlorodibenzofuran 八氯代二苯并呋喃。有 1 种异构体。3.2.13 RRF rel
17、ative response factor 相对响应因子。3.2.14 HRGC high resolution gas chromatography 高分辨气相色谱法。3.2.15 HRMS high resolution mass spectrometry 高分辨质谱法。3.2.16 HRGC-HRMS high resolution gas chromatography and high resolution mass spectrometry 高分辨气相色谱-高分辨质谱法。3.2.17 PFK perfluorokerosene 全氟代煤油。3.2.18 SIM selective i
18、on monitoring 选择离子检测。3.2.19 EI electron impact ionization 电子轰击离子化。3.2.20 S/N Signal/Noise ratio 信噪比。3.2.21 PCBs polychlorinated biphenyls 多氯联苯。4 方法原理 本方法采用同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法测定土壤及沉积物中的二口恶英类，规定了土壤及沉积物中二口恶英类的采样、样品处理及仪器分析等过程的标准操作程序以及整个分析过程的质量管理措施。按相应采样规范采集样品并干燥。加入提取内标后使用盐酸处理。分别对盐酸处理液和盐酸处理后样品进行液液萃取和索氏提取
19、，萃取液和提取液溶剂置换为正己烷后合并，进行净化、分离及浓3 HJ 77.42008 缩操作。加入进样内标后使用高分辨色谱-高分辨质谱法（HRGC-HRMS）进行定性和定量分析，见附录 A“二口恶英类分析流程图”。5 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的农残级试剂，并进行空白试验。有机溶剂浓缩 10 000倍不得检出二口恶英类。5.1 甲醇 5.2 丙酮 5.3 甲苯 5.4 正己烷 5.5 二氯甲烷 5.6 壬烷或癸烷 5.7 水：用正己烷（5.4）充分洗涤过的蒸馏水。除非另有说明，本标准中涉及的水均指经过上述处理的蒸馏水。5.8 25%二氯甲烷-正己烷溶液：二氯甲烷（5.5
20、）与正己烷（5.4）以体积比 13 混合。5.9 提取内标：二口恶英类内标物质（溶液），一般选择13C 标记或37Cl 标记化合物作为提取内标，参见附录 B，每样品添加量一般为：四氯七氯代化合物 0.42.0 ng，八氯代化合物 0.84.0 ng，并且以不超过定量线性范围为宜。5.10 进样内标：二口恶英类内标物质（溶液），一般选择13C 标记或37Cl 标记化合物作为进样内标，参见附录 B，每样品添加量为 0.42.0 ng。5.11 标准溶液：指以壬烷（或癸烷、甲苯等）为溶剂配制的二口恶英类标准物质与相应内标物质的混合溶液。标准溶液的质量浓度精确已知，且质量浓度序列应涵盖 HRGC-HR
21、MS 的定量线性范围，包括 5种质量浓度梯度，参见附录 C。5.12 盐酸：优级纯。5.13 浓硫酸：优级纯。5.14 无水硫酸钠：分析纯以上，在 380温度下处理 4 h，密封保存。5.15 氢氧化钾：优级纯。5.16 硝酸银：优级纯。5.17 硅胶：层析填充柱用硅胶 0.0630.212 mm，（70230 目），在烧杯中用甲醇（5.1）洗净，甲醇挥发完全后，在蒸发皿中摊开，厚度小于 10 mm。130下干燥 18 h，然后放入干燥器冷却 30 min，装入试剂瓶中密封，保存在干燥器中。5.18 2%氢氧化钾硅胶：取硅胶（5.18）98 g，加入用氢氧化钾（5.16）配制的 50 g/L
22、氢氧化钾溶液40 ml，使用旋转蒸发装置在约 50温度下减压脱水，去除大部分水分后，继续在 5080减压脱水 1 h，硅胶变成粉末状。所制成的硅胶含有 2%（质量分数）的氢氧化钾，将其装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。5.19 22%硫酸硅胶：取硅胶（5.18）78 g，加入浓硫酸（5.14）22 g，充分混合后变成粉末状。将所制成的硅胶装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。5.20 44%硫酸硅胶：取硅胶（5.18）56 g，加入浓硫酸（5.14）44 g，充分混合后变成粉末状。将所制成的硅胶装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。5.21 10%硝酸银硅胶：取硅胶（5.18）90 g，加入用硝酸银（5.1
23、7）配制的 400 g/L 硝酸银溶液 28 ml，使用旋转蒸发装置在约 50温度下减压充分脱水。配制过程中应使用棕色遮光板或铝箔遮挡光线。所制成的硅胶含有 10%（质量分数）的硝酸银，将其装入棕色试剂瓶密封，保存在干燥器中。5.22 氧化铝：层析填充柱用氧化铝（碱性，活性度），可以直接使用活性氧化铝。必要时可以如下4 HJ 77.42008 步骤活化。将氧化铝在烧杯中铺成厚度小于 10 mm 的薄层，在 130温度下处理 18 h，或者在培养皿中铺成厚度小于 5 mm 的薄层，在 500下处理 8 h，活化后的氧化铝在干燥器内冷却 30 min 后，装入试剂瓶密封，保存在干燥器中。氧化铝活化
24、后应尽快使用。5.23 活性炭或活性炭硅胶：活性炭可选用下述两种配制方法，或使用市售活性炭硅胶成品。（1）Carbopack C/Celite 545（18%）。混合 9.0 g 的 Carbopack C 活性炭与 41 g 的 Celite545，于附聚四氟乙烯内衬螺帽的 250 ml 玻璃瓶中混合均匀，使用前于 130活化 6 h，冷却后储于干燥箱内保存备用。（2）AX-21/Celite 545（8%）。混合 10.7 g 的 AX-21 活性炭与 124 g 的 Celite545 于附聚四氟乙烯内衬螺帽的 250 ml 玻璃瓶中，使其完全混合均匀，使用前于 130活化 6 h，冷却
25、后储于干燥箱内保存备用。使用前，以甲苯为溶剂索氏提取 48 h 以上，确认甲苯不变色，若甲苯变色，重复索氏提取。索氏提取后，在 180温度下干燥 4 h，再用旋转蒸发装置干燥 1 h（50）。在干燥器中密封保存备用。5.24 石英棉：使用前在 200下处理 2 h，密封保存。以上材料均可选择符合二口恶英类分析要求的市售商业产品。6 仪器和设备 6.1 采样装置 6.1.1 采样工具：应符合 HJ/T 166 及 GB 17378.3 的要求，并使用对二口恶英类无吸附作用的不锈钢或铝合金材质器具。6.1.2 样品容器：应符合 HJ/T 166 及 GB 17378.3 的要求，并使用对二口恶英类
26、无吸附作用的不锈钢或玻璃材质可密封器具。6.2 前处理装置 样品前处理装置要用碱性洗涤剂和水充分洗净，使用前依次用甲醇（或丙酮）、正己烷（或甲苯或二氯甲烷）等溶剂冲洗，定期进行空白试验。所有接口处严禁使用油脂。6.2.1 索氏提取器或性能相当的设备。6.2.2 浓缩装置：旋转蒸发装置、氮吹仪以及 K-D 浓缩装置等。6.2.3 填充柱：内径 815 mm，长 200300 mm 的玻璃填充柱管。6.3 分析仪器 使用高分辨毛细管柱气相色谱-高分辨质谱法（HRGC-HRMS）对二口恶英类进行分析。6.3.1 高分辨毛细管柱气相色谱：应满足 11.1.1 节要求并具有下述功能：（1）进样口：具有不
27、分流进样功能，最高使用温度不低于 280。也可使用柱上进样或程序升温大体积进样方式。（2）柱温箱：具有程序升温功能，可在 50350温度区间内进行调节。（3）毛细管色谱柱：内径 0.100.32 mm，膜厚 0.100.25 m，柱长 2560 m。可对 2,3,7,8-氯代二口恶英类化合物进行良好的分离，并能判明这些化合物的色谱峰流出顺序。（4）载气：高纯氦气，99.999%。6.3.2 高分辨质谱仪：应为双聚焦磁质谱，满足 11.1.2 节的要求并具有下述功能：（1）具有气质联机接口。（2）具有电子轰击离子源，电子轰击电压可在 2570 V 范围调节。（3）具有选择离子检测功能，并使用锁定
28、质量模式（Lock mass）进行质量校正。（4）动态分辨率大于 10 000（10%峰谷定义，下同）并至少可稳定 24 h 以上。当使用的内标包含13C12-O8CDF 时，动态分辨率应大于 12 000。（5）高分辨状态（分辨率10 000）下能够在 1 s 内重复监测 12 个选择离子。5 HJ 77.42008（6）数据处理系统：能够实时采集、记录及存储质谱数据。7 采样 7.1 制定采样方案 在实施土壤或沉积物采样之前，应制定采样方案，采样方案包括采样目的和要求、采样程序、安全和质量保证、采样记录等。必要时对现场进行事前调查。7.2 采样方法 土壤样品采集参照 HJ/T 166 执行
29、，沉积物样品采集参照 GB 17378.3 执行。采样人员应熟悉上述标准中关于土壤样品及沉积物采样的技术要求。采样工具应保持清洁，采样前应使用水和有机溶剂清洗，避免采集的样品间的交叉污染。采样时应记录样品的名称、来源、采样量、保存状况、采样点位、采样日期、采样人员等信息。采样人员应及时填写采样记录或采样报告。样品应尽快送至实验室进行样品制备和样品分析。8 样品预处理 8.1 样品的风干及筛分 土壤及沉积物样品风干及筛分参照 HJ/T 166 及 GB 17378.5 相关部分进行操作。采集样品风干及筛分时应避免日光直接照射及样品间的交叉污染。8.2 含水率的测定 称取 5 g 以上的土壤及沉积
30、物样品，105110烘 4 h 后放在干燥器中冷却至室温，称重。使用下式计算含水率（w，%）。100%w=干燥前样品重量干燥后样品重量干燥前样品重量 9 样品前处理 9.1 添加提取内标 在样品处理之前添加提取内标。如果样品提取液需要分割使用（如样品中二口恶英类预期质量分数过高需要加以控制或者需要预留保存样），提取内标添加量则应适当增加。9.2 盐酸处理 称取一定量样品于滤筒中，用 2 mol/L 的盐酸进行处理。盐酸的用量为每 1 g 样品至少加 20 mmol HCl。搅拌样品，使其与盐酸充分接触并观察发泡情况，必要时再添加盐酸，直到不再发泡为止。用布氏漏斗过滤盐酸处理液，并用水充分冲洗滤
31、筒，再用少量甲醇（或丙酮）淋洗去除滤筒及样品中的水分，将冲洗好的滤筒放入烧杯中转移至洁净的干燥器中充分干燥。9.3 样品提取 9.3.1 液液萃取 将样品前处理的处理液（9.2）合并，按照每 1 L 盐酸处理液使用 100 ml 二氯甲烷的比例进行震荡萃取，重复 3 次，萃取液使用无水硫酸钠脱水干燥。9.3.2 样品提取 滤筒及样品充分干燥后以甲苯为溶剂进行索氏提取，提取时间应在 16 h 以上。将该提取液和 9.3.1 萃取液溶剂置换为正己烷后合并，作为分析样品，进行净化处理。若样品中不含碳状物，可以省略盐酸处理，直接进行提取操作。实验室可以通过分析有证参考物质或参加国际能力验证的方法对快速
32、溶剂萃取等其他提取方法的使用进行评估。6 HJ 77.42008 9.4 样品溶液的分割 可根据样品中二口恶英类预期质量分数的高低分取 25%100%（整数比例）的样品溶液作为样品储备液，样品储备液应转移至棕色密封储液瓶中冷藏贮存。10 样品净化 样品净化可以选择硫酸处理-硅胶柱净化（10.1）或多层硅胶柱净化（10.2）方法。对干扰物的分离净化可以选择氧化铝柱净化（10.3）或活性炭硅胶柱净化（10.4）方法。10.1 硫酸处理-硅胶柱净化 10.1.1 将样品溶液浓缩至 12 ml。10.1.2 将浓缩液用 50150 ml 正己烷洗入分液漏斗，每次加入适量（1020 ml）浓硫酸，轻微振
33、荡，静置分层，弃去硫酸层。根据硫酸层颜色的深浅重复操作 13 次。10.1.3 正己烷层每次加入适量的水洗涤，重复洗至中性。正己烷层经无水硫酸钠脱水后，浓缩至 12 ml。10.1.4 填充柱底部垫一小团石英棉，用 10 ml 正己烷冲洗内壁。在烧杯中加入 3 g 硅胶和 10 ml 正己烷，用玻璃棒缓缓搅动赶掉气泡，倒入填充柱，让正己烷流出，待硅胶层稳定后，再填充约 10 mm 厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管壁上的硫酸钠粉末。10.1.5 用 50 ml 正己烷淋洗硅胶柱，然后将浓缩液定量转移到硅胶柱上。用 150 ml 正己烷淋洗，调节淋洗速度约为 2.5 ml/min（大约 1 滴/s）
34、。10.1.6 洗出液浓缩至 12 ml。10.2 多层硅胶柱净化 10.2.1 在填充柱底部垫一小团石英棉，用 10 ml 正己烷冲洗内壁。依次装填无水硫酸钠 4 g，硅胶 0.9 g，2%氢氧化钾硅胶 3 g，硅胶 0.9 g，44%硫酸硅胶 4.5 g，22%硫酸硅胶 6 g，硅胶 0.9 g，10%硝酸银硅胶 3 g，无水硫酸钠 6 g，用 100 ml 正己烷淋洗硅胶柱。10.2.2 将样品溶液浓缩至 12 ml。10.2.3 将浓缩液定量转移到多层硅胶柱上。10.2.4 用 200 ml 正己烷淋洗，调节淋洗速度约为 2.5 ml/min（大约 1 滴/s）。10.2.5 洗出液浓
35、缩至 12 ml。若多层硅胶柱颜色加深较多，应重复上述 10.2.110.2.5 节净化操作。样品含硫量较高时，可在索氏提取器的蒸馏烧瓶中加入 510 g 铜珠或在多层硅胶柱上端加入适量铜粉。10.3 氧化铝柱净化 10.3.1 在填充柱底部垫一小团石英棉，用 10 ml 正己烷冲洗内壁。在烧杯中加入 10 g 氧化铝和 10 ml正己烷，用玻璃棒缓缓搅动赶掉气泡，倒入填充柱，让正己烷流出，待氧化铝层稳定后，再填充约 10 mm厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管壁上的无水硫酸钠粉末。用 50 ml 正己烷淋洗氧化铝柱。10.3.2 将经过初步净化的样品浓缩液定量转移到氧化铝柱上。首先用 100 m
36、l 的 2%二氯甲烷-正己烷溶液淋洗，调节淋洗速度约为 2.5 ml/min（大约 1 滴/s）。洗出液为第一组分。10.3.3 用 150 ml 的 50%二氯甲烷-正己烷溶液淋洗氧化铝柱（淋洗速度约为 2.5 ml/min），得到的洗出液为第二组分，该组分含有分析对象二口恶英类。10.3.4 将第二组分洗出液浓缩至 12 ml。10.4 活性炭硅胶柱净化 10.4.1 在填充柱底部垫一小团石英棉，用 10 ml 正己烷冲洗内壁。干法填充约 10 mm 厚的无水硫酸钠和 1.0 g 活性炭硅胶。注入 10 ml 正己烷，敲击填充柱赶掉气泡，再填充约 10 mm 厚的无水硫酸钠，用正己烷冲洗管
37、壁上的无水硫酸钠粉末。用 20 ml 正己烷淋洗硅胶柱。10.4.2 将经过初步净化的样品浓缩液定量转移到活性炭硅胶柱上。首先用 200 ml 的 25%二氯甲烷-正己烷溶液淋洗，调节淋洗速度约为 2.5 ml/min（大约 1 滴/s）。洗出液为第一组分。7 HJ 77.42008 10.4.3 用 200 ml 甲苯淋洗活性炭硅胶柱（淋洗速度约为 2.5 ml/min），得到的洗出液为第二组分，该组分含有分析对象二口恶英类。10.4.4 将第二组分洗出液浓缩至 12 ml。10.5 其他样品净化方法 可以使用凝胶渗透色谱（GPC）、高压液相色谱（HPLC）、自动样品处理装置以及其他净化方法
38、或装置等进行样品的净化处理。使用前应用标准样品或标准溶液进行分离和净化效果试验，并确认满足本方法质量保证/质量控制要求。10.6 上机样品制备 10.6.1 样品的浓缩 由 10.3.4 节或 10.4.4 节所得的第二组分洗出液用高纯氮吹除多余的溶剂，浓缩至微湿。10.6.2 添加进样内标 添加 0.42.0 ng 进样内标（5.10），加入壬烷（或癸烷、甲苯）定容至适当体积，使进样内标质量浓度与制作相对响应因子的标准曲线进样内标质量浓度相同，转移至进样瓶后作为最终分析样品。11 仪器分析 11.1 仪器条件 11.1.1 高分辨气相色谱条件设定 选择适当操作条件来分离 2,3,7,8-氯代
39、二口恶英类化合物，推荐条件为：进样方式：不分流进样 1 l；进样口温度：270；载气流量：1.0 ml/min；色质接口温度：270；色谱柱：固定相 5%苯基 95%聚甲基硅氧烷，柱长 60 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.25 m；程序升温：初始温度 140，保持 1 min 后以 20/min 的速度升温至 200，停留 1 min 后以 5/min的速度升温至 220，停留 16 min 后以 5/min的速度升温至 235后停留 7 min，以 5/min的速度升温至 310停留 10 min。也可使用其他操作条件，参见附录 D。11.1.2 高分辨质谱条件设定 设置仪器满足如下条
40、件，并使用标准溶液或标准参考物质确认保留时间窗口。11.1.2.1 使用 SIM 法选择待测化合物的两个监测峰离子进行监测，如表 3 所示（37Cl4-T4CDD 仅有一个监测峰离子）。11.1.2.2 导入质量校准物质（PFK）得到稳定的响应后，优化质谱仪器参数使得表 3 中各质量数范围内 PFK 峰离子的分辨率大于 10 000，当使用的内标包含13C12-O8CDF 时，分辨率应大于 12 000。表 3 质量数设定（监测离子和锁定质量数）同类物 M+（M+2）+（M+4）+T4CDDs 319.896 5 321.893 6 P5CDDs 355.854 6 357.851 7*H6C
41、DDs 389.815 7 391.812 7*H7CDDs 423.776 7 425.773 7 O8CDD 457.737 7 459.734 8 T4CDFs 303.901 6 305.898 7 P5CDFs 339.859 7 341.856 8 H6CDFs 373.820 7 375.817 8 8 HJ 77.42008 同类物 M+（M+2）+（M+4）+H7CDFs 407.781 8 409.778 8 O8CDF 441.742 8 443.739 8 13C12-T4CDDs 331.936 8 333.933 9 37Cl4-T4CDD 327.884 7 13
42、C12-P5CDDs 367.894 9 369.891 9 13C12-H6CDDs 401.855 9 403.853 0 13C12-H7CDDs 435.816 9 437.814 0 13C12-O8CDD 469.778 0 471.775 0 13C12-T4CDFs 315.941 9 317.938 9 13C12-P5CDFs 351.900 0 353.897 0 13C12-H6CDFs 383.836 9 385.861 0 13C12-H7CDFs 417.825 3 419.822 0 13C12-O8CDF 451.786 0 453.783 0 292.982
43、 5（四氯代二口恶英类定量用）354.979 2（五氯代二口恶英类定量用）392.976 0（六氯代二口恶英类定量用）430.972 9（七氯代二口恶英类定量用）PFK（Lock mass）442.972 9（八氯代二口恶英类定量用）注：*可能存在 PCBs 干扰。11.2 质量校正 仪器分析开始前需进行质量校正。监测表 3 中各质量数范围内 PFK 峰离子的荷质比及分辨率，分辨率应全部达到 10 000 以上，通过锁定质量模式进行质量校正。校正过程完成后保存质量校正文件。11.3 SIM检测 11.3.1 按 11.1 节要求设置高分辨气相色谱-高分辨质谱联用仪条件。11.3.2 注入质量校
44、准物质（PFK），响应稳定后，按 11.1 节及 11.2 节要求进行仪器调谐与质量校正后进行最终分析样品分析。每 12 h 对分辨率及质量校正进行验证。不符合 11.1 节及 11.2 节要求时应重新进行调谐及质量校正。11.3.3 完成测定后，取得各监测离子的色谱图，确认 PFK 峰离子丰度差异小于 20%，检查是否存在干扰以及 2,3,7,8-氯代二口恶英类的分离效果，最后进行数据处理。按各化合物的离子荷质比记录谱图。11.4 相对响应因子制作 11.4.1 标准溶液测定 标准溶液质量浓度序列应有 5 种以上质量浓度，对每个质量浓度应重复 3 次进样测定。11.4.2 离子丰度比确认 标
45、准溶液中化合物对应的两个检测离子的离子丰度比应与理论离子丰度比（见表 4）大体一致，变化范围应在15%以内。表 4 根据氯原子同位素丰度比推算的理论离子丰度比 M M+2 M+4 M+6 M+8 M+10 M+12 M+14 T4CDDs 77.43 100.0 48.74 10.72 0.94 0.01 P5CDDs 62.06 100.0 64.69 21.08 3.50 0.25 H6CDDs 51.79 100.0 80.66 34.85 8.54 1.14 0.07 H7CDDs 44.43 100.0 96.64 52.03 16.89 3.32 0.37 0.02 O8CDD 3
46、4.54 88.80 100.0 64.48 26.07 6.78 1.11 0.11 T4CDFs 77.55 100.0 48.61 10.64 0.92 9 HJ 77.42008 M M+2 M+4 M+6 M+8 M+10 M+12 M+14 P5CDFs 62.14 100.0 64.57 20.98 3.46 0.24 H6CDFs 51.84 100.0 80.54 34.72 8.48 1.12 0.07 H7CDFs 44.47 100.0 96.52 51.88 16.80 3.29 0.37 0.02 O8CDF 34.61 88.89 100.0 64.39 25.9
47、8 6.74 1.10 0.11 注：（1）M 表示质量数最低的同位素；（2）以最大离子丰度作为 100%。11.4.3 信噪比确认 标准溶液质量浓度序列中最低质量浓度的化合物信噪比（S/N）应大于 10。取谱图基线测量值标准偏差的 2 倍作为噪声值 N。也可以取噪声最大值和最小值之差的 2/5 作为噪声值 N。以噪声中线为基准，到峰顶的高度为峰高（信号 S）。11.4.4 相对响应因子计算 各质量浓度点待测化合物相对于提取内标的相对响应因子（RRFes）由式（1）计算，并计算其平均值和相对标准偏差，相对标准偏差应在20%以内，否则应重新制作校准曲线。RRFes=essseQAQAs （1）式
48、中：Qs 标准溶液中待测化合物的绝对量，pg；Qes 标准溶液中提取内标物质的绝对量，pg；As 标准溶液中待测化合物的监测离子峰面积之和；Aes 标准溶液中提取内标物质的监测离子峰面积之和。提取内标相对于进样内标的相对响应因子（RRFrs）由式（2）计算。RRFrs=rsesesrsQAQA （2）式中：Qes 标准溶液中提取内标物质的绝对量，pg；Qrs 标准溶液中进样内标物质的绝对量，pg；Aes 标准溶液中提取内标物质的监测离子峰面积之和；Ars 标准溶液中进样内标物质的监测离子峰面积之和。11.5 样品测定 取得相对响应因子之后，对处理好的最终分析样品按下述步骤测定。11.5.1 标
49、准溶液确认 选择中间质量浓度的标准溶液，按一定周期或频次（每 12 h 或每批样品至少 1 次）测定。质量浓度变化不应超过35%，否则应查找原因，重新测定或重新制作相对响应因子。11.5.2 测定样品 将空白样品和最终分析样品按照 11.3 节所述的程序进行测定，得到二口恶英类各监测离子的色谱图。12 数据处理 12.1 色谱峰确认 12.1.1 进样内标确认 分析样品中进样内标的峰面积应不低于标准溶液中进样内标峰面积的 70%。否则应查找原因，重新测定。10 HJ 77.42008 12.1.2 色谱峰确认 在色谱图上，对信噪比 S/N 大于 3 的色谱峰视为有效峰。12.1.3 峰面积：计
50、算 12.1.2 节中确认的色谱峰的峰面积。12.2 定性 12.2.1 二口恶英类同类物 二口恶英类同类物的两个监测离子在指定保留时间窗口内同时存在，并且其离子丰度比与表 4 所列理论离子丰度比一致，相对偏差小于 15%。同时满足上述条件的色谱峰定性为二口恶英类物质。12.2.2 2,3,7,8-氯代二口恶英类 除满足 12.2.1 节要求外，色谱峰的保留时间应与标准溶液一致（3 s 以内），同时内标的相对保留时间亦与标准溶液一致（0.5%以内）。同时满足上述条件的色谱峰定性为 2,3,7,8-氯代二口恶英类。12.3 定量 12.3.1 采用内标法计算分析样品中被检出的二口恶英类化合物的绝