微生物限检查办法验证方法 2医学心理学检验医学医学心理学基础医学.pdf

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1、精心整理 微生物验证实施小组主要成员:部门 质量管理部 质量管理部 质量管理部 质量管理部 质量管理部 姓名 职位 验证领导小组审查汇签:页码:第1页,共12页 文件编码:ZYCWJ-TS-07156-01 起草部门:质量管理部 版本号:01 标题 微生物限度检查方法验证方案 起草人 起草时间 审核人 审核时间 批准人 批准时间 颁发部门 质量管理部 生效日期 分发部门 份数 质量管理部 生产部 设备部 物料部 行政人事部 销售部 财务部 变更记载:修订号 批准日期 执行日期 变更原因 精心整理 姓名 部门 职务或岗位 签字日期 企业负责人 质量管理部 经理 生产部 经理 设备部 经理 质量管

2、理部 QC主管 质量管理部 QA主管 物料部 经理 1概述 药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时,应进行方法的验证,以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。所以对感冒灵颗粒微生物限度检查进行方法的验证。2目的 为了保证检验质量,对所用的检验方法必须经过验证,才能确保检验结果的准确可靠。3适用范围 本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证。4验证人员职责 4.1 验证小组:组长:质量管理部经理 成员:QC主管、微生物操作人员 4.2 职责及分工:QC主管组织起草该验证方案,并组织实施该方案;微生物操作人员具体实施该方案;质量管理部经理协助和监控该方案的实施。4.

3、3 验证方案批准后,应进行培训。由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。5验证依据 中国药典 2015 年版通则“1105”、“1106”6.感冒灵颗粒微生物限度检验方法验证风险分析部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检

4、查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 序号 项目 潜在的风险分析 潜在的失败后果 原因分析 严重程度 发生频次 风险等级 措施结果 采取的措施 严重程度 发生频次 风险等级 1 验证方案编写人员 编写人员未按照ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度检查法标准操作规程编写方案。验证方法错误,导致验证结果不可靠。人员培训考核不到位 F2 P3 ALARP 对验证编写人员进行培训和考核,合格后方可编写 F2 P5 ACC(

5、可接受)2 试验人员 试验人员未按照编写的验证方案进行操作 操作不正确,导致试验结果不可靠 人员培训考核不到位 F2 P3 ALARP 按照验证方案进行培训,培训合格后方可操作 F2 P5 ACC(可接受)3 培养箱、净化工作台 仪器未经校验或不在校验期内。导致检验环境和培养环境不符合要求,最终导致验证失败。使用人员使用前未对校验期进行检查 F2 P3 ALARP 设备人员使用前对设备进行检查。F3 P5 ACC(可接受)4 干热灭菌烘箱、压力蒸气锅 仪器未经校验或不在校验期内。导致试验结果出现异常。使用人员使用前未对校验期进行检查 F2 P3 ALARP 设备人员使用前对设备进行检查。F3

6、P5 ACC(可接受)5 对照培养基、检查用培养基、检定菌 对照培养基、检查用培养基、检定菌失效 导致验证失败 使用前未对对照培养基、检查用培养基、检定菌有效期进行核查。F2 P3 ALARP 对管理人员进行培训,严格按照ZYCWJ-SMP-10020-00培养基及检定菌管理规程进行管理,使用前F3 P5 ACC(可接受)部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经

7、理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 使用人对有效期进行确认。6 培养基、缓冲液、消毒剂 培养基、缓冲液、消毒剂配制不正确 导致验证失败 严格按照标准要求制备缓冲液和消毒剂 F2 P3 ALARP 对实验人员进行验证培训 F3 P5 ACC(可接受)7 灭菌器具、洁净服 已灭菌器具和洁净服过效期 导致验证

8、失败 使用前未对已灭菌器具和洁净服有效期进行确认 F2 P3 ALARP 使用前对已灭菌器具和洁净服有效期进行确认 F3 P5 ACC(可接受)8 验证方法不正确 1、验证方案编写不正确;2、未严格按照验证方案开展验证工作 导致验证失败 验证方案未经批准 F3 P3 ALARP 对验证方案进行审核 F3 P5 ACC(可接受)9 控制菌检验结果不合格 实验组无菌落生长,供试品可能有抑菌性 导致验证失败 1、供试品可能对试验菌存在抑制作用 2、检验员判断失误。F2 P3 ALARP 采用培养基稀释法消除抑菌性 F3 P5 ACC(可接受)10 实验组菌种回收率不达标 各试验组回收率低于或高于标准

9、范围 导致验证失败 1、供试品可能对试验菌存在抑制作用 2、检验人员计数错误。F2 P3 ALARP 采用培养基稀释法消除抑菌性 F3 P5 ACC(可接受)部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感

10、冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 11 样品储存环境 样品储存环境、温度异常。导致样品被污染或失败 样品存放不当 F2 P3 ALARP 严格控制样品存放环境的温湿度 F3 P5 ACC(可接受)12 洁净区环境 1、洁净区温湿度、压差异常 2、洁净区环境被污染 导致验证失败 1.洁净区温湿度、压差控制不当 2.未定期对洁净区进行清洁和消毒;3.未定期监测洁净区的环境 F2 P3 ALARP 1.每天定期监察洁净区的温湿度;2.按照 SOP规定对洁净区进行消毒;3

11、.严格按照洁净度监测管理规程对洁净区环境进行监测。F3 P5 ACC(可接受)部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微

12、生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 6.1 结果分析:通过以上采取的措施,风险均控制在可接受范围内。7.人员培训确认表 8.验证方法 6.1 仪器及设备名称 仪器及设备名称 型号 生产厂家 是否校验 备注 生化培养箱 是否 恒温培养箱 是否 净化工作台 是否 培训时间 培训内容 培训对象 培训地点 培训讲师 主办部门 被培训人员签名 序号 姓名 部门及岗位 QA 主管 QC 主管 设备部经理 设备管理员 生产部经理 质量管理部 QC 检验员 质量管理部 QC 检验员 质量管理部 QC 检验员 质量管理部 QC 检验员 部质量管理部页码第页共页文

13、件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 超净工作台 是否

14、立式压力消毒器 是否 立式压力灭菌器 是否 6.1 验证用样品:感冒灵颗粒规格:批号:感冒灵颗粒规格:批号:感冒灵颗粒规格:批号:6.2 验证用培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:沙氏葡萄糖琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:营养琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:胰酪大豆胨液体培养基生产厂家:批号:配制批号:沙氏葡萄糖琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:麦康凯液体培养基生产厂家:批号:配制批号:麦康凯琼脂培养基生产厂家:批号:配制批号:6.3 验证用菌种:金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)、大肠埃希菌(CMCC(B)44102)、枯草芽孢菌(CMCC(B)63501

15、)、白色念珠菌(CMCC(F)98001)、黑曲霉菌(CMCC(F)98003)6.4 菌液制备:6.4.4 取经 3035培养 1824 小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物 1ml 加入 9ml0.9%氯化钠溶液中,10 倍稀释至 105107为不大于 100cfu/ml备用。6.4.2 取经 2025培养 23 天的白色念珠菌霉菌液体培养物 1ml,加入 9ml0.9%氯化钠溶液中,10 倍稀释至 105为不大于 100cfu/ml 备用。6.4.3 将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,2025培养 57 天,使大量的孢子成熟。加入 3

16、-5ml 含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液或 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,将孢子洗脱。然后,采用适宜方法吸出孢子悬液无菌试管内用含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80 的 0.9%无菌氯化钠溶液或 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至,制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。6.4.4 上述菌悬液制备后若在室温下放置,应在 2 小时内使用;若保存在 28,可在 24 内使用。6.5 供试液制备:取样品 10g,加入 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml,为 1:10 供试液。7.计数方法的验证:7.1 需氧菌

17、、霉菌及酵母菌计数(平皿法)所加菌液的体积不得超过供试液体积的 1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出,首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性检查。部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感

18、冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 7.2 试验组 取上述制备好的供试液,加入试验菌液、混匀,使每 1ml 供试液或每张滤膜过滤的供试液中含菌量不大于100cfu。7.2.1 取的供试液 9.9ml 和小于 10000cfu 的铜绿假单胞菌菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。平行制备 2个平皿。7.2.2 取的供试液 9.9ml 和小于 10000cfu

19、 的金黄色葡萄球菌菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。平行制备 2 个平皿。7.2.3 取的试液 9.9ml 和小于 10000cfu 的枯草芽孢杆菌菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。平行制备 2个平皿。7.2.4 取的供试液 9.9ml 和小于 10000cfu 的白色念珠菌菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基 1520

20、ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。平行制备 2个平皿。7.2.5 取的供试液 9.9ml 和小于 10000cfu 的黑曲霉菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。平行制备 2 个平皿。7.2.6取的供试液 9.9ml 和小于 10000cfu 的白色念珠菌菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 2025倒置培养 5 天点计菌落数。平行制备 2个平皿。7.2.7 取的供试液 9.9ml 和

21、小于 10000cfu 的黑曲霉菌悬液 0.1ml 混匀后,吸取 1ml 注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 1520ml,混匀,凝固,于 2025倒置培养 5 天点计菌落数。平行制备 2 个平皿。7.3 菌液组 7.3.1 取小于 100cfu 的铜绿假单胞菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液、黑曲霉菌悬液各 1ml,注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基约 1520ml,混匀,凝固,于 3035倒置培养 3 天点计菌落数。各平行制备 2 个平皿。7.3.2 取小于 100cfu 的白色念珠菌菌悬液、黑曲霉菌悬液各 1ml,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基

22、各 1520ml,混匀,凝固,于 2025倒置培养 5 天点计菌落数。各平行制备 2 个平皿。7.4 供试品对照组 7.4.1 取的供试液 1ml,注入平皿中,分别立即倾注 1520 ml 温度不超过 45胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,胰酪大豆胨琼脂培养基 3035倒置培养 3 天点计菌落数,沙氏葡萄糖琼脂培养基 2025倒置培养 5 天点计菌落数。各组平行制备 2 个平皿。7.4 计算公式:稀释剂对照组的回收率=稀释剂对照组菌落数-供试品对照组菌数100%菌液组菌落数 试验组菌数回收率=试验组菌落数-供试品对照组菌数100%菌液组菌落数 部质量管理部页码第页共页文件

23、编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 7.5 判定标准:实

24、验组、稀释剂对照组的菌数回收率应在 0.5 2 之间。若各试验菌的回收率均符合规定,照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。7.6 试验结果 表 1 平皿法验证结果 1#批号:实验组别 试验菌种 供试液对照组 菌液组菌数 试验组菌数 回收率(%)1 号 2 号 1 号 2 号 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 白色念珠菌 表 2 平皿法验证结果 2#批号:实验组别 试验菌种 供试液对照组 菌液组菌数 试验组菌数 回收率(%)1 号 2 号 1 号 2 号 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 白色念珠菌 表 3 平皿法验证结果

25、 3#批号:实验组别 试验菌种 供试液对照组 菌液组菌数 试验组菌数 回收率(%)1 号 2 号 1 号 2 号 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 白色念珠菌 结果说明:8.控制菌检查方法验证 部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生

26、物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 (1)大肠埃希菌 取 1:10 供试液 10ml 两份,分别加入两瓶 100ml 胰酪大豆胨液体培养基,其中一瓶加入1ml 大肠埃希菌液(不大于 100cfu/ml)为试验组;一瓶为供试品;另取一瓶 100ml 胰酪大豆胨液体培养基加入 10ml 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为阴性对照。取上述培养物 1ml,接种至含 100ml 麦康凯液体培养基内培养,4244培养 2448 小时。

27、取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上 3035培养 1872 小时。表 10 大肠埃希菌常规法验证结果 1#批号:步骤 实验组 阳性对照组 阴性对照组 胰酪大豆胨液体培养基,3035培养 1824 小时 麦康凯液体培养基,4244培养 2448 小时 取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上,3035培养 1872 小时。若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌;若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,判未检出大肠埃希菌。表 11 大肠埃希菌常规法验证结果 2#批号:步骤 实验组 阳性对照组 阴性对照组

28、 胰酪大豆胨液体培养基,3035培养 1824 小时 麦康凯液体培养基,4244培养 2448 小时 取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上,3035培养 1872 小时。若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌;若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,判未检出大肠埃希菌。表 13 大肠埃希菌常规法验证结果 3#批号:步骤 实验组 阳性对照组 阴性对照组 胰酪大豆胨液体培养基,3035培养 1824 小时 麦康凯液体培养基,4244培养 2448 小时 取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上,3035培

29、养 1872 小时。若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌;若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,判未检出大肠埃希菌。部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检

30、查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该 结果说明:9、结论:部质量管理部页码第页共页文件编码起草部门质量管理部版本号微生物限度检查方法验证方案起草时间审核时间批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部物料部行政人事部销售部财务部变更记载理部生产部设备部质量管理部质量管理部物料部企业负责人经理经理经理主管主管经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时应进行方法的验证以证明所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查所以验结果的准确可靠适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学的确认与验证验证人员职责验证小组组长质量管理部经理成员主管微生物操作人员职责及分工主管组织起草该验证方案并组织实施该方案微生物操作人员具体实施该

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