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1、电镜切片样品制作步骤 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13,2020 如至500毫升 lml 4ml%扫描电镜样品的准备 A悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等；细胞使用PBS或无血清培养基离心漂洗12次以去除血清，离心转速依据 不同离心机、不同样品自定，总时间控制在5min内；细胞团根据预设浓度在适 量戊二醛吹悬，滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘，4 C静置沉降23天，在托盘周围加入PBS,以防止样品干燥。B贴壁培养的细胞：在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上：PBS致无需请培养
2、基漂 洗后，放置在培养板室温固定lh,4 C3h,注意放置干燥，自行转入青霉素小 瓶中，加满PBS送检。SEM标本处理必须使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。C组织取材 样品观察表面可达810mm2,高度小于5mm左右；样品表而在固定前必须清洁：使用生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需 要观察的蛋白、粘液等。能够明确标识标本的观察面。消化道、呼吸道、血 管、生殖器官、泌尿等官腔内表面，尤其要注意先清洗再固定。如需要观察脏器内结构，应依照不同的实验目的，决定目的脏器是否需要灌注 清洗；O 固定戊二醛浸没标本，室温 lh,4 C 固定 3h 以上，换 PBS 送检。附：戊二醛的
3、配制 Step 1:磷酸缓冲液的配制：磷酸二氢钠()克 磷酸氢二钠 29克 双蒸镭水 pH调至 Step 2:戊二醛固定液的配制:25%戊二醛 双蒸憎水 L磷酸缓冲液 5ml 戊二醛最终浓度 pH值 次以去除血清离心转速依据不同离心机不同样品自定总时间控制在内细胞团根据预设浓度在适量戊二醛吹悬滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘静置沉降天在托盘周围加入以防止样品干燥贴壁培养的细胞在培养皿中预先加入盖玻片检标本处理必须使用玻璃容器需明确所用盖玻片尺可以放入青霉素瓶组织取材样品观察表面可达高度小于左右样品表而在固定前必须清洁使用生理盐水或冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白粘液等能够明确标识标本的观察
4、面消的决定目的脏器是否需要灌注清洗固定戊二醛浸没标本室温固定以上换送检附戊二醛的配制磷酸缓冲液的配制磷酸二氢钠磷酸氢二钠双蒸镭水调至戊二醛固定液的配制戊二醛双蒸憎水磷酸缓冲液戊二醛最终浓度值克克如至毫升透射透射电镜样品的制备 一、培养细胞 本方法适用于贴壁.悬浮培养的细胞：细茵；精子；血细胞等。1.细胞数量：106 或 6 孔板一孔的细胞达到生长面积的 80%或以上。2.离心收集：消化或用细胞刮刮下细胞。如细胞状态一般或漂浮扬较多，建议更换新培 养基；如观察自噬，建议刮下细胞。3.离心速度.时间依据不同离心机、不同样本自行定义，时间在 5min 内；4.细胞团大小：细胞最厚处约二或者参照 1
5、元硬币的厚度；5.细胞离心成团后去除上淸，加电镜用戊二醛 500 口 I固定，切勿吹悬，室温 lh,4 C 3 h 后，去除戊二醛加满 PBS 后 4 C 放置或送检。注意：固定细胞不需要吹悬.细胞不宜过多，过多会导致固定液无法迅速渗透到底部 细胞；二.生物组织 迅速剪下/切下相应位置，在戊二醛中，依据不同组织和实验目的，用刀片修 A 1mm3的小块或_mm2X2mm长条或薄片状。在戊二醛室温lh,4 C 3 h,去除戊二醛加满P忑，4 C放置或送检。标本固定时，尽量修饰成合适的形状，对于需要定位的标本，离开实验室者后 比较难以确认所需要的位置。使用2ml圆底或尖底的EP管，勿用500 Ml以
6、下 的EP管。块状标本基本包含的组织类型：脑、肾、肝、肺.心肌：长条状.薄片状标本基本包括：骨骼肌、平滑肌：肌纤维方向与标本长轴平行或垂直（送样时说明方向）皮肤、毛歎：皮肤角质层与长轴平行：神经、直径在 2mm 内的小血管：其长轴与标本块长轴平行的长条 消化道、大血管：长条片状，一侧是上皮、内皮细胞面，或依据目的去除无用的分层 脑皮质.海马.耳蜗等：具有方向性或需横切或纵切面或需要组织中某一特定位置的 标本；具体到某些组织，可能会有不同的要求，如观察海马 CA1 区，建议标本取片状或近似 三角形的片状或梯形（比较好）。直观的说，小块直径约为 1 元硬币厚度；长度的短轴约为 1 元披币的厚度；具
7、体大小 根据标本会有相应的调整，但都已小尺寸为佳。次以去除血清离心转速依据不同离心机不同样品自定总时间控制在内细胞团根据预设浓度在适量戊二醛吹悬滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘静置沉降天在托盘周围加入以防止样品干燥贴壁培养的细胞在培养皿中预先加入盖玻片检标本处理必须使用玻璃容器需明确所用盖玻片尺可以放入青霉素瓶组织取材样品观察表面可达高度小于左右样品表而在固定前必须清洁使用生理盐水或冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白粘液等能够明确标识标本的观察面消的决定目的脏器是否需要灌注清洗固定戊二醛浸没标本室温固定以上换送检附戊二醛的配制磷酸缓冲液的配制磷酸二氢钠磷酸氢二钠双蒸镭水调至戊二醛固定液的配制戊二醛双蒸憎水磷酸缓冲液戊二醛最终浓度值克克如至毫升透射