《常用培养基概念及配方医学心理学检验医学_高等教育-大学课件.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用培养基概念及配方医学心理学检验医学_高等教育-大学课件.pdf（5页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、LB 培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特 别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入 抗生素的 LB培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即 Potato Dextrose Agar(Medium，依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。改良 MC 培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋 白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳 糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳
2、酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为 pH 指示剂。MRS 培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳 酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后 会变淡黑色。以此分离乳酸菌。乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳 酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为 18 个属，共有 200 多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生 理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已
3、被国内外生物学家 所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖 类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌 种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等应要结论 操件条件 成分 休积比 貝壮菠硯分 3*百 4 曝沖 25徹 233 闭*H=信乳25 厌兀好rMJ EM-1+CODt.1 SK5 哼/L的废 水 t應锢水 3：3；94 斗：4：92 S-5：W 缶 6：88 厌氧 用废水的复壮效果没有 糖蜜好 EM-1原液十糖 4 字 92 厌礼 1 周 自配高浓度污水：葡萄糖 5550 mg/L+(NH)2SO,1170 mg/L+KHPO,17
4、0 mg/L+CO 为 5000 mg/L。自配污水：葡萄糖 555 mg/L+(NH4)2SO,117m/L+KHPO 17 mg/L+CaC12 0,08 mg/L+MgSO,1,534 mg/L+NaHCO3 550 8 mg/L+FeC1 6H2O 0.25 mg/L+C0D 500 mg/L+氨氮为 30 mg/L.一、LB 培养基配制 1 升 LB 培养培养基需:蛋白胨 10g/L;酵母粉 5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离子水、琼脂 1520g/L(配制液体培养基不需要加，配制固体培养3：3：94 5：系 90 置 K-&4 m 10：so 25 弋密团 复壮 EM 休
5、积分(1 嘟为宜.用高浓度汨 水.極蛊和蜂畫为宣二用 髙浓匮污水艮壮 可节 省 E1H菌用虽 3：3：100 25 七.密闭 1 周 EV-I+憲/糖/COQ,S 500 mg/L左右的污水+去氯水 EM原曉+蜂蜜-于培养大肠杆菌枯草杆菌等细菌分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基加入抗生素的培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基即依次对应马铃薯葡萄糖琼脂的英文宜培养酵母菌霉菌蘑菇等真子葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解以辨别乳酸菌琼脂是培养基的凝固剂中性红为指示剂培养基乳酸菌培养基由多种成分组成适用于乳酸菌的生长用分离培养乳酸菌
6、的一类培养基一种常用能当乳酸菌长成后在培养基上显黄色之后会变淡黑色以此分离乳酸菌乳酸菌凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌这是一群相当庞杂的细菌目前至少可分为个属共有多种除极少数外其中绝大部分都是人体基时加入）。pH 值用 5mol/L NaOH 溶液调至 727.4（用精密 pH 试纸 测定）。配置完后在高压锅内高压灭菌 21mi n。二、YPD 培养基配制（酵母菌培养基）1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract）10g/L、蛋白胨（peptone）20g/L 于单/双去离子水中，如制平板加入 20g/L 琼脂粉（配制固体培养 基）；2）高压灭菌 121 C
7、20min;3 加入 20g/L 葡萄糖（dextrose 或 glucose，葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应）；注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌，也可以 115C 15min 灭菌。三、MRSg 养基配制（乳酸菌培养基）蛋白胨（peptone）10g/L、牛肉膏（beef extract）10g/L、酵母菌粉（yeast extract）5g/L、醋酸钠（乙酸钠）5g/L、磷酸氢二钾 2g/L、柠檬酸铵 2g/L、硫酸镁 0.2g/L、硫酸锰 0.2g/L、琼脂 20g/L、吐温 80 1m
8、l/L、葡萄糖 20g/L（因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制）、pH 值用 冰乙酸调至 6.26.6（用 pH 试纸、仪器均可）250 微升/L。四、琼脂糖凝胶配制 凝胶板大孔为 60ml,两小孔为 30ml，梳子有 5 微升、10 微升等 琼脂糖粉 10g12g/L,TBE0.5 x（Tris 硼酸，是一种 PCF 技术中用到的 缓冲液。成分及终浓度（5X）最终 pH=8.25 或 8.3用蒸馏水稀释至 0.5 X）1）琼脂糖凝胶的制备：称取 0.3g 琼脂糖，置于三角瓶中，加入 30ml TBE 或于培养大肠杆菌枯草杆菌等细菌分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基加入抗生素的培养基
9、可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基即依次对应马铃薯葡萄糖琼脂的英文宜培养酵母菌霉菌蘑菇等真子葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解以辨别乳酸菌琼脂是培养基的凝固剂中性红为指示剂培养基乳酸菌培养基由多种成分组成适用于乳酸菌的生长用分离培养乳酸菌的一类培养基一种常用能当乳酸菌长成后在培养基上显黄色之后会变淡黑色以此分离乳酸菌乳酸菌凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌这是一群相当庞杂的细菌目前至少可分为个属共有多种除极少数外其中绝大部分都是人体TAE 缓液，置于三角瓶中，加入 30ml TBE 或 TAE 缓液，置于三角瓶
10、 中，加入 30ml TBE 或 TAE 缓液，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖 溶解。将冷却至 65C左右的琼脂糖凝胶液，加入溴化乙锭（凝胶染料），充分混匀。2）胶板的制备：取有机玻璃内槽，洗净、晾干；将有机玻璃内槽置于一水平位置模 具上，安好挡板，放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其 凝固，在距离底板 0.5 1.0mm 的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后 可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底 将有破裂的危险，破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏；将剩余 的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻 璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在
11、 35mm 之间，检查一下梳子 的齿下或齿间是否有气泡；室温下静置 30min 左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的 有机玻璃内槽放在含有 0.51X TAE（Tris-乙酸）或 TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳槽中使用，没过胶面 1mm 以上。五、培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即 Potato Dextrose Agar（Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。配制配方：马铃薯 200 克、葡萄糖 20 克、琼脂 1520 克、自来水 1000 毫升、自然 PH 配制
12、步骤：其做法是称取 200g 马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮 烂（煮沸 2030 分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据 实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水 分至 1000毫升，分装试管，加塞、包扎，灭菌（121 C）20 分钟左右后 取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。于培养大肠杆菌枯草杆菌等细菌分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基加入抗生素的培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基即依次对应马铃薯葡萄糖琼脂的英文宜培养酵母菌霉菌蘑菇等真子葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解以辨别乳酸菌琼脂是培
13、养基的凝固剂中性红为指示剂培养基乳酸菌培养基由多种成分组成适用于乳酸菌的生长用分离培养乳酸菌的一类培养基一种常用能当乳酸菌长成后在培养基上显黄色之后会变淡黑色以此分离乳酸菌乳酸菌凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌这是一群相当庞杂的细菌目前至少可分为个属共有多种除极少数外其中绝大部分都是人体其他事项：1.培养基经灭菌后，必须放在 37C 温箱培养 24h,无菌生长者方可使 用。2.PDA 培养基一般不需要调 pH 对于要调节 pH 的培养基，一般用 pH 试纸测定其 pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用 Imol/LNaOH 或 Imol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴
14、加入 NaOH 或 HCI 溶液，防止局部 过酸或过碱破坏培养基成分。3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的 震荡培养。4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为 0.1g/L 培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。于培养大肠杆菌枯草杆菌等细菌分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基加入抗生素的培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基即依次对应马铃薯葡萄糖琼脂的英文宜培养酵母菌霉菌蘑菇等真子葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解以辨别乳酸菌琼脂是培养基的凝固剂中性红为指示剂培养基乳酸菌培养基由多种成分组成适用于乳酸菌的生长用分离培养乳酸菌的一类培养基一种常用能当乳酸菌长成后在培养基上显黄色之后会变淡黑色以此分离乳酸菌乳酸菌凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌这是一群相当庞杂的细菌目前至少可分为个属共有多种除极少数外其中绝大部分都是人体