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1、1.(2010 天津理综，7)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中 tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamH、Hind、Sma直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答问题。(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含_的培养基上进行。(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_(填字母代号)。A启动子 BtetR C复制原点 DampR(3)过程可采用的操作方法是_(填字母代号)。A农杆菌转化 B大肠杆菌转化 C显微注射 D细胞融合(4)过程采用的生物技术是_
2、。(5)对早期胚胎进行切割，经过程可获得多个新个体。这利用了细胞的_性。(6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_(填字母代号)技术。A核酸分子杂交 B基因序列分析 C抗原抗体杂交 DPCR 2(2009 上海卷)人体细胞内含有抑制癌症发生的 P53基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。(1)目的基因的获取方法通常包括_和_。(2)上图表示从正常人和患者体内获取的 P53基因的部分区域。与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，在上图中用方框圈出发生改变的碱基对，这种变异被称为_。(3)已知限制酶 E 识别序列为 CCGG，若用限制酶 E 分别完全切割正常人和患者的 P53基因部分区域
3、(见上图)，那么正常人的会被切成_个片段，而患者的则被切割成长度为_对碱基和_对碱基的两种片段。(4)如果某人的 P53基因部分区域经限制酶 E 完全切割后，共出现 170、220、290 和 460 个碱基对的四种片段，那么该人的基因型是_(以 P表示正常基因，P表示异常基因)。3(2009 福建卷)转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有 Pst、Sma、EcoR、Apa等四种限制酶切割位点。请回答下列问题。(1)构建含抗病基因的表达载体 A 时，应选用限制酶_，对_进行切割。(2)培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载
4、体 A 中含有_，作为标记基因。(3)香蕉组织细胞具有_，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中、依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_。4（2011年安徽卷）.（21 分）.（9 分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。(1)进行转基因操作前，需用_酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自 cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_和_之间。(3)采用 PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改 PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓
5、冲液（含 Mg2+）、水，4 种脱氧核糖苷酸、模板 DNA、_和_。(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。5（11年山东卷）.（8分）【生物现代生物科技专题】人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠_中获取。（2）图中的高血压相关基因作为_，质粒作为_,二者需用_切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有_有关。（3）子代大鼠如果_和_，即可分别在水平上
6、说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是_、早期胚胎培养和胚胎移植。6(2011 江苏卷，33)请回答基因工程方面的有关问题。(1)利用 PCR 技术扩增目的基因，其原理与细胞内 DNA 复制类似(如图所示)。图中引物为单链 DNA片段，它是子链合成延伸的基础。基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图中将人乳铁蛋白基因插入载体需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经
7、过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段 从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物 A 的 DNA 片段所占的比例为_。在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA 片段。(2)设计引物是 PCR 技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下
8、图)，请分别说明理由。第 1 组：_；第 2 组：_。(3)PCR 反应体系中含有热稳定 DNA 聚合酶，下面的表达式不能正确反映 DNA 聚合酶的功能，这是因为_ _。(4)用限制酶 EcoR、Mbo单独或联合切割同一种质粒，得到的 DNA 片段长度如下图(1 kb 即 1 000个碱基对)，请画出质粒上 EcoR、Mbo的切割位点。7(2011 南京二模)下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题。(1)若限制酶的识别序列和切点是GATC，限制酶识别序列和切点是GGATCC，那么基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图中将人乳铁蛋白基因插入载体需用限制酶同时酶切载
9、体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段在过程中，应用限制酶_切割质粒，用限制酶_切割抗虫基因。(2)将通过过程得到的大肠杆菌涂
10、布在含有_的培养基上，若能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。(3)要确定抗虫基因导入后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，则在个体水平上的鉴定过程可简述为：_。经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的 DNA 片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的 F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的_。(4)过程所用的现代生物技术称为_，从遗传学角度来看，据细胞通过过程，能形成棉植株的根本原因是细胞具有_。8.下图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：（1）图中 cDNA文库 基因组文库（填“大于”、
11、“等于”或者“小于”）。（2）过 程 提 取 的DNA 需 要 的 切 割，B过 程是 。（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用 扩增的方法，其原理是 。4目的基因获取之后，需要进行 ，其 组 成 必 须有 以及标记基因等，此步骤是基因工程的核心。（5）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是 ，其能否在此植物体内稳定遗传的关键是 ，可以用 技术进行检测。9.利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。2005 年我省青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目通过鉴定，该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶等医药产
12、品，造福人类健康。下图为利用生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程，据图回答：基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图中将人乳铁蛋白基因插入载体需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别
13、序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段 在基因工程中，A 表示 ，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，过程使用的酶区别于其他酶的特点是 ，B表示 。在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用_ 技术对目的基因进行了扩增，然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶有_。基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括哪些部分?。将目的基因导入受体细胞的过程中，在过程中一般是采用 方法，在过程中一般采用 方法，受体细胞一般是 。由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内
14、是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法及结果是什么?。要确定目的的基因（抗虫基因）导入棉花细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程：。10.胰岛素可以用于治疗糖尿病,但是胰岛素被注射到人体后,会堆积在皮下,要经过较长的时间才能进入血液,而进入血液的胰岛素又容易分解,因此,治疗效果受到影响。如图是用蛋白质工程设计速效胰岛素的生产过程,请据图回答有关问题：(1)构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键,图中构建新的胰岛素模型的主要依据是 。(2)通过 DNA合成形成的新基因应与 结合后转移到 中才能得到准确表达。基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图
15、中将人乳铁蛋白基因插入载体需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段(3)若要利用大肠杆菌生产速效胰岛素,需用
16、到的生物工程有 、和发酵工程。(4)图解中从新的胰岛素模型到新的胰岛素基因的基本思路是什么？。1.答案(1)Hind和 BamH 氨苄青霉素(2)A(3)C(4)胚胎移植技术(5)全能(6)C 2.答案(1)从细胞中分离 通过化学方法人工合成(2)见下图 基因碱基对的替换(基因突变)(3)3 460 220(4)PP 3 答案(1)Pst、EcoR 含抗病基因的 DNA、质粒(2)抗卡那霉素基因(3)全能性 脱分化、再分化 4 答案：（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）（2）启动子 终止子（3）TaqDNA 聚合酶 对干扰素基基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图中将人乳铁蛋白基因插入载体
17、需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段因特异性的 DNA引物对 （4）增大细胞贴壁生长的附着面积 5答案：
18、（1）卵巢（2）目的基因 载体 同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）限制酶切割位点（3）检测到体内有相关蛋白 出现高血压（4）体外受精 6 答案(1)1516 三(2)引物和引物局部发生碱基互补配对而失效 引物 自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效(3)DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链 DNA 片段的引物链上(4)见右图 7 答案(1)(2)四环素(3)让害虫吞食转基因棉花的叶片，观察害虫的存活情况，以确定其是否具有抗虫性状 34(4)植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质 基因直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答问题图中将人乳铁蛋白基因插入载体需用限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含的培养基上进行能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表射细胞合过程采用的生物技术是对早期胚胎进行切割经过程可获得多个新个体这利用了细胞的性为检测人乳铁蛋白是否成功表达可采用填字母代号技术核酸分子杂交基因序列分析抗原抗体杂交上海卷人体细胞内含有抑制癌症发生的基因的部分区域与正常人相比患者在该区域的碱基会发生改变在上图中用方框圈出发生改变的碱基对这种变异被称为已知限制酶识别序列为若用限制酶分别完全切割正常人和患者的基因部分区域见上图那么正常人的会被切成个片段