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1、学习好资料 欢迎下载 基因工程（2011年江苏卷）33（8 分）请回答基因工程方面的有关问题：(1)利用 PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内 DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链 DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物 A的 DNA片段所占的比例为。在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA片段。(2)设计引物是 PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。第 1 组：；第 2 组：。(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的 功能，
2、这是因为。(4)用限制酶 EcoRV、Mbol 单独或联合切割同一种质粒，得到的 DNA片段长度如下图(1 kb 即 1000 个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上 EcoRV、Mbol 的切割位点。33（8 分）学习好资料 欢迎下载 (1)15/16 三 (2)引物 I和引物局部发生碱基互补配对而失效 引物 I自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结 合到双链 DNA片段的引物链上(4)见右图 （11年北京卷）31.（16 分）T-DNA 可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥
3、，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的 T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除，因为后者产生的 会抑制侧芽的生长。（2）为筛选出已转化的个体，需将 T1代播种在含的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为 T2代）。（3）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将 T2代播种在含的培养基上，获得所需个体。（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与植株进行杂交，再自交代后统计性状分离比。（5）若上述 T-DNA 的插入造成了基因功能丧失，
4、从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性。（6）根据 T-DNA 的已知序列，利用 PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取植株的 DNA，用限制酶处理后，再用将获得 的 DNA 片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中 A、B、C、D四种单链 DNA 片断中选取作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。答案：31（16 分）（1）顶芽 生长素（2）（一定浓度的）除草剂（3）（一定浓度的）盐（4）野生型 1（降低（6）突变体 DNA连接酶 B、C （2011年安徽卷）31.（21 分）.（9 分）家蚕细胞具有高效复制类似如下图所示图中引物为单链片段
5、它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种学习好资料 欢迎下载 表达外源
6、基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。(1)进行转基因操作前，需用_酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自 cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_和_之间。(3)采用 PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改 PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含 Mg2+）、水，4 种脱氧核糖苷酸、模板 DNA、_和_。(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。答案：（1）胰蛋白酶（或胶
7、原蛋白酶）（2）启动子 终止子（3）TaqDNA聚合酶 对干扰素基因特异性的 DNA引物对 （4）增大细胞贴壁生长的附着面积 解析：考查的知识点为动物细胞培养和基因工程.(1)为了使组织分散开为单个细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶。(2)启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端。(3)PCR反应体系的主要成分应扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶、两种引物。(4)细胞离体培养时通常表现出：贴壁生长和接触抑制，多孔的中空薄壁小玻璃珠能增大贴壁生长的附着面积，增加培养的细胞数量.（11天津理综卷）6、某致病基因 h 位于 X染色体上，该基因和正常基
8、因 H中的某一特定序列BclI 酶切后，可产生大小不同的片段（如图 1，bp 表示碱基对），据此可进行基因诊断。图 2为某家庭病的遗传系谱。下列叙述错误的是 A h 基因特定序列中 Bcl 1 酶切位点的消失是碱基序列改变的结果 B II-1 的基因诊断中只出现 142bp 片段，其致病基因来自母亲 C II-2 的基因诊断中出现 142bp，99bp 和 43bp 三个片段，其基因型为 XHXh D II-3 的丈夫表现型正常，其儿子的基因诊断中出现 142bp 片段的概率为 1/2.答案：D（11年四川卷）5.北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有 11 个氨基酸的重复序列，该序列重
9、复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是 A过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序 B多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，复制类似如下图所示图中引物为单链片段它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引物和引物局部发生碱基互
10、补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种学习好资料 欢迎下载 C过程构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选 D应用 DNA 探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达 答案：B 解析：过程 1 获得的目的基因已不含非编码区和内含子，因此不能用于比目鱼基因组测序，因此 A错。导入农杆菌是为了扩增和更易导入蕃茄细胞，C错。DNA探针技术不能检测基因是否完全表达，目的基因的完全表达
11、应该检测表达产物蛋白质，D错。（2011年浙江卷）6、ada（酸脱氨酶基因）通过质粒 pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个 ada D.每个人的 ada 至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 答案：C（11年重庆卷）31.（16 分）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(Tn)功能的流程示意图。（1）与拟南
12、芥 t 基因的 mRNA 相比，若油菜 Tn基因的 mRNA 中 UGA 变为，其末端序列成为“”，则 Tn比多编码个氨基酸（起始密码子位置相同，、为终止密码子）。（）图中应为。若不能在含抗生素的培养基上生长，则原因是.若的种皮颜色为，则说明油菜nT基因与拟南芥 T基因的功能相同。复制类似如下图所示图中引物为单链片段它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画
13、出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种学习好资料 欢迎下载（3）假设该油菜nT基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个 t 基因，则中进行减数分裂的细胞在联会时的基因为；同时，的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现为；取的茎尖培养成 16 颗植珠，其性
14、状通常 （填 不变或改变）。（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥（填是或者不是）同一个物种。答案：31.（16分）（1）2（2）重组质粒（重组 DNA 分子）重组质粒未导入 深褐色（3）TnTntt；黄色正常、黄色卷曲；不变（4）是 解析：通过对基因工程和遗传知识相结合来考查学生对该部分知识的掌握，属中档题，较难。油菜 Tn基因的mRNA中 UGA变为 AGA，而末端序列为“AGCGCGACCAGACUCUAA”，在拟南芥中的 UGA本是终止密码子不编码氨基酸，而在油菜中变为 AGA可编码一个氨基酸，而 CUC 还可编码一个氨基酸，直到 UAA终止密码子不编码氨基酸。假设油菜 Tn基因连接到
15、拟南芥染色体并替换其是一个 t 基因，注意拟南芥是指实验有的突变体 tt，所以转基因拟南芥基因型为 Tnt，减数分裂联会时形成四分体是由于染色体进行了复制，基因也进行了复制，因而基因型为 TnTnt t。设转基因拟南芥的叶片卷曲与正常叶是由 B、b 基因控制，正常叶为显性，而该对性状与种皮性状为独立遗传，则这两对性状遵循基因的分离与自由组合定律。则：转基因拟南芥 双杂合拟南芥 Tntbb TtBb 进行逐对分析：TntTt 1/4TnT、1/4Tnt、1/4 Tt 、1/4tt 由于 Tn和 T的功能相同，所以表示为 3/4T-（深褐色）、1/4tt（黄色）bbBb 1/2 Bb（正常叶）、1
16、/2 bb（卷曲叶）所以后代中有四种表现型；3/8种皮深褐色正常叶；3/8种皮深褐色卷曲叶 1/8种皮黄色正常叶；1/8种皮黄色卷曲叶 取转基因拟南芥的茎尖培养为植物组织培养为无性生殖，所以后代性一般不变。（排除基因突变）由上可知所得转基因拟南芥 Tnt 和野生型拟南芥 TT两个品种相当于发生基因突变，没有隔离，能杂交产生可育后代，因此是同一个种。此套题难度不大，考查识记的偏多，理解推理分析较少，而填空题中类似判断题型的填空又多，降低了难度，而不能很好考查学生能力，区分度不明显。复制类似如下图所示图中引物为单链片段它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第
17、轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种学习好资料 欢迎下载（11年广东卷）27.（16 分）登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮
18、咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热、出血甚至休克。科学家用以下方法控制病毒的传播。（1）将 S 基因转入蚊子体内，使蚊子的唾液腺细胞大量表达 S 蛋白，该蛋白可以抑制登革热病毒的复制。为了获得转基因蚊子，需要将携带 S基因的载体导入蚊子的 细胞。如果转基因成功，在转基因蚊子体内可检测出、和。（2）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB）。A、B基因位于非同源染色体上，只有 A或 B基因的胚胎致死。若纯合的雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1 群体中 A 基因频率是，F2群体中 A基因频率是。（3）将 S基因分别插入到 A、B基因的紧邻位 置（如图 11），将该纯合的转基因雄蚊释放
19、 到野生群体中，群体中蚊子体内病毒的 平均数目会逐代，原因是。27、答案：（1）受精卵 S 基因、由 S 基因转录的mRNA S 蛋白 （2）50%60%（3）减少 S基因表达的 S 蛋白会抑制登革热病毒复制（11年山东卷）35.（8分）【生物现代生物科技专题】人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠_中获取。（2）图中的高血压相关基因作为_，质粒作为_,二者需用_切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有_有关。（3）子代大鼠如果_和_，即可分别在水平上说明高
20、血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是_、早期胚胎培养和胚胎移植。答案：（1）卵巢（2）目的基因 载体 同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）限制酶切割位点 复制类似如下图所示图中引物为单链片段它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引
21、物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种学习好资料 欢迎下载（3）检测到体内有相关蛋白 出现高血压（4）体外受精 复制类似如下图所示图中引物为单链片段它是子链合成延伸的基础从理论上推测第四轮循环产物中含有引物的片段所占的比例为在第轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的片段设计引物是技术关键步骤之一某同学设计的两不能正确反映聚合酶的功能这是因为用限制酶单独或联合切割同一种质粒得到的片段长度如下图即个碱基对请在答题卡的指定位置画出质粒上的切割位点分学习好资料欢迎下载三引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折卷分可能随机插入植物基因组内导致被插入基因发生突变用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下种植野生型拟南芥待植物形成花蕾时将地上部分浸入农杆菌其中的上带有抗除草剂基因悬浮液中以实现转化在宜条件下培养收获种