《植物氨态氮测定行业资料园艺_高等教育-农学.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物氨态氮测定行业资料园艺_高等教育-农学.pdf（4页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、植物组织氨基酸含量的测定（改良的苗三酮比色法）植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成 氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋 白质。测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的芹三酮比色法。a-氨基酸与水合苗三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的 a-酮酸，酮酸进一步脱竣变成醛，水合苗三酮则被还原，在弱酸环 境中，还原型苗三酮，氨和另一分子水合苗三酮反应，缩合生成蓝紫 色物质。根据蓝紫色的深浅，在 580nm 波长下测定吸光值。本实验中 在帝三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服审三酮的 不稳定性。二、仪器设备 研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶
2、、容量瓶、移液管、天 平、沸水浴锅、可见分光光度计 三、试剂 1.10%醋酸（100mL）2.1%抗坏血酸（100mL）3.5u g/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g 定容至 lOOOmL）4.pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L醋酸（冰醋酸11.55mL稀释 至 lOOOmL）加 41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g 或三水醋酸 钠 27.2g 配成 1000mL）o5.水合审三酮试剂：1.lg 三酮放到烧杯中，加入 15mL 正丙醇,醋酸缓冲液，混匀。保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限 10 天。四、操作步骤 1.标准曲线的绘制 以下表所示量从 5ug
3、/mL亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并 在每个试管中加蒸馅水至 2mL,对照仅加 2mL 蒸馅水，后在各试 管中加入 3mL 水合茹三酮试剂和 0.ImL 1%抗坏血酸，摇匀。盖 上试管塞，于沸水中加热 15 分钟，取出后搅拌冷却 15 分钟。冷 却后的有色溶液中加无水乙醇至 10mL,在波长 580nm 处测吸光 值，以氨态氮浓度（Pg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标 准曲线。试管号 1 2 3 4 5 6 7 试剂（mL）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 L8 氨态氮浓度（Ug/mL）0 0.5 1 2 3 4 5 2.称取 0.5g 新鲜植物材料，放入研钵中，加入 5mL
4、10%醋酸，研磨 后以蒸馆水稀释至 100mL,混匀，通过滤纸过滤，弃去最先滤下 的一部分滤液后过滤到 100mL 三角瓶中。3.从剩下的滤液中取 2mL 放入试管中，加 3mL 水合站三酮试剂和 0.ImL 1%抗坏血酸，摇匀。盖上试管塞，于沸水中加热 15 分钟。同时将盛有对照溶液（提取液用蒸馆水代替）的试管加热。摇匀，溶解，后加入 30ml 正 1【和 60ml 乙二醇，混匀，再加 9mL pH5.4 者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸然后形成其他氨基酸和蛋白质测定氨态氮的方法有多种本实验为改良的芹三酮比色法氨基酸与水合苗三酮溶液一起加热经氧化脱氨变成相应的酮酸酮酸进一步脱竣变成醛水合苗三酮
5、则被还原在弱酸实验中在帝三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇可以克服审三酮的不稳定性二器设备研钵烧杯漏斗量筒具塞试管三角瓶容量瓶移液管天平沸水浴锅可见分光光度计三试剂醋酸抗坏血酸亮氨酸或丙氨酸溶液定容至醋酸缓冲液醋和乙二醇混匀再加醋酸缓冲液混匀保存于棕色瓶中冰箱保存适用期限天四操作步骤标准曲线的绘制以下表所示量从亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馅水至对照仅加蒸馅水后在各试管中加入水合茹三酮试剂和抗4.取出后搅拌冷却 15 分钟。加热形成的红色药三酮试剂被氧氧化而 褪色，苗三酮与氨基酸形成的蓝紫色反应产物仍然存留并变得更 加鲜明。冷却后的有色溶液中加无水乙醇至 10mL,混匀。
6、在波长 580nm 处测光密度值，根据标准曲线査得数值代入以下公式计算 氨态氮含量。(lOXlOOXC)X（100g样品中的氨态氮毫克数）=C：比色液中氨态氮浓度（U g/mL）n：样品重量（g）100：分析溶液总体积（mL）5.实验结果与分析 氨态氮含量标曲：序号 1234567 氨态氮浓度 6 0?5 1 2 3 4 r-0D 值 0.152 0.237 0.318 0.415 0.484 0.607 0.718X100 者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸然后形成其他氨基酸和蛋白质测定氨态氮的方法有多种本实验为改良的芹三酮比色法氨基酸与水合苗三酮溶液一起加热经氧化脱氨变成相应的酮酸酮酸进一步脱
7、竣变成醛水合苗三酮则被还原在弱酸实验中在帝三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇可以克服审三酮的不稳定性二器设备研钵烧杯漏斗量筒具塞试管三角瓶容量瓶移液管天平沸水浴锅可见分光光度计三试剂醋酸抗坏血酸亮氨酸或丙氨酸溶液定容至醋酸缓冲液醋和乙二醇混匀再加醋酸缓冲液混匀保存于棕色瓶中冰箱保存适用期限天四操作步骤标准曲线的绘制以下表所示量从亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馅水至对照仅加蒸馅水后在各试管中加入水合茹三酮试剂和抗 测定样品液的 0D580 为：0.939 标曲查得：0.939=0.1073C-0.181 C=10.38 u g/mL (0.1X10X10.38 U g/mL
8、)X(lOOg 样品中的氨态氮毫克数)二(2X0.5)故：该植物中氨态氮的含量为 10.38mg/100go 方程：y=0.1073X+0.181 X100=10.38mg/100g 者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸然后形成其他氨基酸和蛋白质测定氨态氮的方法有多种本实验为改良的芹三酮比色法氨基酸与水合苗三酮溶液一起加热经氧化脱氨变成相应的酮酸酮酸进一步脱竣变成醛水合苗三酮则被还原在弱酸实验中在帝三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇可以克服审三酮的不稳定性二器设备研钵烧杯漏斗量筒具塞试管三角瓶容量瓶移液管天平沸水浴锅可见分光光度计三试剂醋酸抗坏血酸亮氨酸或丙氨酸溶液定容至醋酸缓冲液醋和乙二醇混匀再加醋酸缓冲液混匀保存于棕色瓶中冰箱保存适用期限天四操作步骤标准曲线的绘制以下表所示量从亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馅水至对照仅加蒸馅水后在各试管中加入水合茹三酮试剂和抗