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1、 仪器分析实验讲义发送版0507-图文(3) 拿出放枯燥器中备用。 2点样：取薄层板，在距一端2cm处，用铅笔轻轻画出一条直线作为起始线，离起始线6cm处再画始终线作为前沿线，用毛细管分别吸取染料、及混和染料分别点样12下。 3绽开：将层析槽边缘上一层凡士林，将上盖合上拉磨数次；参加10ml苯于层析槽中，将层析槽一端垫高，将玻璃支架放在低端，并将薄层放入槽内的玻璃支架上（留意：薄层板不能浸入苯中）饱和10min后，绽开10cm，取出。 4检出（定位）：有色染料、在薄层板上的分别状况无需特别处理就一目了然。分别计算它们的Rf值。以染料为参比物，分别计算、染料的Rst值。鉴定混合染料的组成。 五、
2、留意事项： 1点样原点直径掌握在23mm之间。 2绽开时层析槽要放平坦。 3绽开剂中含水量的多少影响分别，故用枯燥的仪器。 4绽开前，层析槽内先用蒸气饱和，组分的Rf值易于重现。 5苯有毒，使用时留意防止污染环境。 图5.1 染料的薄层绽开图 11 试验六 高效液相色谱定性分析 预习提纲 1、本试验中的固定相和流淌相是什么？属于什么色谱类型？ 2、本试验中组分的保存时间和安排系数与组分的极性有什么关系？ 3、本试验中组分的保存时间和安排系数与流淌相的极性有什么关系？ 4、本试验中组分间的分别度和流淌相的极性有什么关系？为什么？ 5、色谱常用的保存值定性方法原理是什么？如何操作？ 6、HPLC中
3、为什么要对流淌相溶剂脱气？脱气方法有哪些？ 7、六通进样阀的工作原理是什么？为保证进样精度，满阀进样时加载的样品体积应为多少？ 8、什么状况下要平衡色谱柱后再进样？为什么？ 9、紫外检测器适合什么组分的检测？如何选择检测波长？为什么？ 10、HPLC中影响分别度的因素有哪些？ 一、目的 1把握高效液相色谱仪的使用方法。 2把握在反相高效液相色谱分别过程中，当流淌相比例发生变化时，组分保存时间及分别度的变化。 3学会高效液相色谱的定性方法。 二、提要 本试验是采纳反相高效液相色谱法对已知组成的样品进展分别。在反相色谱中，固定相的极性小于流淌相，流淌相中水的比例越大，流淌相的洗脱强度越小；组分的极
4、性越小，在色谱柱上的保存力量越强。 三、试验条件 1高效液相色谱仪； 2C18反相键合硅胶填充柱（4.6mm250mm, 5m）； 3流淌相：甲醇水。流速：1ml/min。 4检测器：紫外检测器，检测波长254nm； 5对比品溶液：萘的甲醇溶液；样品溶液：苯、甲苯、萘、蒽的甲醇溶液。 四、操作步骤 1将高压泵启动，调整流速1.0ml/min，流淌相组成为甲醇水（95:5），平衡色谱柱 12 约10分钟。 2吸取样品溶液，进样，记录色谱图，并打印出各色谱峰的保存时间。 3转变流淌相比例为甲醇水（85:15），平衡色谱柱约10分钟，取样品溶液，进样，记录色谱图。 4在一样色谱条件下，取萘的对比品溶
5、液进样，通过保存时间对比，对混合样品中的色谱峰进展定性。 5. 分析试验结果，观看流淌相的转变对各组分保存时间及分别度的影响。 五、思索题 1利用高效液相色谱仪定性的方法有几种？分别在什么状况下适用？ 2. 依据样品中各组分的性质（极性大小），分析各组分的出峰挨次，找出样品中各色谱峰的归属。 3本试验的色谱原理属于哪一类？ mAU VWD1 A, 波长=254 nm (20231122ZHIYAO2023001.D) 140120 100 80604020230.511.5 22.53min图6.1 甲醇：水 = 95:5 样品色谱图 mAU VWD1 A, 波长=254 nm (202311
6、22ZHIYAO2023003.D)80 60 0123456min40200 图6.2 甲醇：水 = 85:15 样品色谱图 13 VWD1 A, 波长=254 nm (20231122ZHIYAO2023040.D)mAU 400 00.511.522.533.544.5min3002023000 图6.3 甲醇：水 = 85:15 对比品色谱图 14 试验七 气相色谱法定性分析 预习提纲 1、什么性质的样品可以用气相色谱分析？ 2、气相色谱常用的流淌相有哪些？各有什么特点？ 3、气相色谱的分别机理有哪些（写知名称即可）？ 4、气相色谱的固定液是极性或非极性时，样品中不同组分各基于什么性质
7、差异实现分别？出峰的挨次如何？ 5、气相色谱的检测器有哪些？检测原理是什么（简要概述）？各用于什么性质的化合物检测？ 6、毛细管气相色谱中，分流进样的作用是什么？尾吹气的作用是什么？隔垫吹扫气的作用是什么？ 7、分别度如何计算？影响分别度的因素有哪些（根本分别方程中的三个影响因子）？ 8、气相色谱中，假如要提高分别度，应如何调整分析温度？ 一、目的 练习气相色谱仪的使用，了解气相色谱仪的根本构造。 把握柱温的变化对组分保存时间及分别度的影响。 学会气相色谱定性分析，把握通过已知物保存值比照进展定性分析的方法。 二、提要 气相色谱是一种强有力的分别手段，实际工作中，有时遇到的样品其成分大体上是已知的，这时得到的气相色谱图可以借助纯的标样加以对比，利用保存值进展定性，这样的定性鉴定是相当简洁的。当干扰组分与待测组分tR 接近时，可采纳峰高增加法定性：首先将样品进样，测定待测组分的峰面积；然后在样品中参加对比品，在一样的色谱条件下进样分析，假如待测组分的峰面积增加，且峰型对称，则为同一个组分；假如待测组分峰面积增加，但峰变形（加宽），或消失新的色谱峰，则不是同一个组分。 三、仪器与试剂 （1）气相色谱仪（FID检测器）； （2）微量注射器（1l）； （3）标样：甲苯； （4）样品：苯、甲苯、乙酸乙酯、丙酮混合样品。 15