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1、ApoE基因多态性检测试剂概述2023-04-20 18:58戟璧旦旦Apolipoprotein E, ApoE）是血浆脂蛋白的重要组成部分,参 与血浆胆固醇、甘油三脂的运输及代谢过程,在脂类代谢及维持胆固醇平衡等 方面发挥着关键作用，是脂类代谢和心血管疾病的决定因子。ApoE还参与激 活水解脂肪的酶类,并有免疫调节、参与神经组织的再生及抑制血小板聚集等 作用。一、ApoE基因多态性概述ApoE是由299个氨基酸组成的磷脂糖蛋白，分子量约为34kD ,主要存 在于乳糜微粒及其残骸、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和部分高密度脂蛋白 表面，少部分在血液中与ApoAII形成复合体。ApoE主要由肝脏
2、中的肝实质 细胞和脑组织中的星形胶质细胞合成，未与脂质结合时被凝血酶分解为两个单 独的结构区域，N端区和C端区。N端具有结合脂质和受体的功能；C端具有 调节组织细胞摄取脂质的能力，起调节机体脂质代谢平衡的作用。ApoE基因位于人类第19号染色体长臂上，由3597个核苗酸组成,属于 常染色体显性遗传基因，具有显著遗传多态性。ApoE基因的基因型由两个单 核昔酸多态性位点(即526CT和388TC )决定，包含3个等位基因：E2 (388T-526T )、E3 ( 388T-526C )、E4 ( 388C-526C )，其中 E3 为野生型 基因,E2和E4为突变型基因,共产生3种纯合子(E2/
3、2、E3/3、E4/4 )和三 种杂合子(E2/3、E2/4、E3/4)。ApoE基因三种等位基因碱基序列差异引起的氨基酸变化及蛋白质构象改 变，使得三种异构体与受体的亲和力不同，最终导致不同表型的ApoE在人体 代谢中发挥不同的作用。研究表明，ApoE的基因多态性与个体血脂水平及动 脉粥样硬化的发生发展密切相关。E2等位基因携带者血液中ApoE浓度高，胆 固醇含量低，对动脉粥样硬化有防护作用；而E4等位基因携带者血液中ApoE 浓度低，胆固醇及三酰甘油含量高，是动脉粥样硬化的潜在危险因素。另外， 多项研究表明ApoE基因多态性是他汀类药物调脂疗效出现个体差异的重要原 因之一，E2等位基因携带
4、者对于他汀类药物的疗效优于E3、E4等位基因携带 者，基因型为E2/2的高血脂症患者建议选用普伐他汀治疗,以提高降脂疗 效。检测ApoE基因多态性，有助于临床医生准确分析患者ApoE基因型,可 为相关的疾病如高脂血症、冠心病、阿尔茨海默症等产生的原因提供参考，同 时也为患者合理有效的使用他汀类药物提供依据。目前检测ApoE基因多态性的实验室检测方法主要有：直接测序法、高效 液相色谱法(DHPLC)、PCR-芯片杂交法、限制性片段长度多态性检测法(PCR-RFLP ) , PCR-金磁微粒层析法、荧光PCR法、PCR-溶解曲线法、飞 行时间质谱法等。二、ApoE基因多态性检测试剂的上市批准情况依
5、据我国体外诊断试剂注册与备案管理办法，ApoE基因多态性检测 相关试剂属于与人类基因检测相关的试剂，应按照第三类产品进行管理。 截止2023年1月，我国已批准了 8个ApoE基因多态性检测试剂相关产品, 检测的基因位点均为526CT和388TC ,适用样本类型均为全血，检测方法 涉及荧光PCR法、PCR-芯片杂交法、PCR-RFLP法等，用于检测ApoE基因 526CT和388TC位点的基因多态性。三、ApoE基因多态性检测试剂的审评关注点()企业参考品设置企业参考品的样本类型应与待测样本一致，可采用临床样本或其提取的核 酸。阳性参考品和检出限参考品应包含每一位点的纯合突变型、杂合突变型和 野
6、生型；阴性参考品应考虑检测特异性评价,纳入同源序列交叉反应样本和干 扰样本。重复性参考品应至少包含杂合突变型样本。（二）检出限可采用梯度浓度的人基因组DNA样本进行多次重复检测，确定适当检出 率水平下的最低人基因组DNA浓度，作为检出限浓度。同时,该类产品的检 出限研究还应评价试剂在确定检出率水平下,可准确检出人基因组DNA浓度 的上限。研究用样本应至少包含杂合型突变样本。（三）分析特异性需针对可能存在的内源和外源性干扰物进行充分验证，同时应针对同源序 列其他位点序列突变进行交叉反应验证，并说明交叉反应样本的制备方法和核 酸序列确认方法。（四）阳性判断值该类产品的阳性判断值研究应考虑人种差异,
7、纳入不同民族或种族的样 本，同时应涵盖所有突变位点的野生型和突变型,采用受试者工作特征(ROC)曲线的方式进行研究。如果试剂判读存在灰区，还详细应说明灰区范 围的确定方法。四、小结近年来随着分子生物学的不断发展,申报ApoE基因多态性检测产品的企 业越来越多,且有采用直扩荧光PCR法等新方法的检测产品申报注册，有必要 对审评过程中需要关注的重点问题进行总结和规范，为相关申报企业在设计开 发此类产品和准备注册申报资料时提供有效指导，同时也为注册审评提供参考 依据。参考文献：1周宏潮，陈小平，张伟等.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行).实用器官移植电子杂志，2015 , 3(5) : 257-267.2胡艳清，马建群.载脂蛋白E基因多态性与心血管疾病关系的研究进展 UL山东医药,2018 , 58 ( 1 ) : 106-108.3田余,赵瑞平.ApoE及SLCO1B1基因多态性与他汀类药物的研究进展 几世界最新医学信息文摘，2018 , 18 ( 72 ) : 153-155.