《大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法.docx（4页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、大豆胞囊线虫病抗性室内鉴定方法1范围本标准规定了大豆抱囊线虫病抗性室内鉴定方法中的试剂、材料和仪器设备、空气环境与培养条件、 鉴定材料、育苗与移苗、培养、线虫接种液制备、接种、调查、抗性评价方法。本标准适用于对大豆抱囊线虫不同生理小种的抗性鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3095环境空气质量标准GB 4404.2粮食作物种子 第2部分：豆类NY/T 3059大豆抗抱囊线虫鉴定技术规程3试剂、材料和仪器设备3.1 试剂霍格兰氏（Hoagland
2、）营养液：硝酸钙945mg/L、硝酸钾607mg/L磷酸铉I15mg/L、硫酸镁 493mg/L、铁盐溶液2.5mL/L、微量元素5mL/L、pH6.0,无菌水1L,使用时稀释20倍。铁盐溶液：七水硫酸亚铁2.78g、乙二胺四乙酸二钠（EDTA.Na） 3.73g、无菌蒸储水 500mL pH5.5o微量元素液：碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、硫酸镒22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、铝酸钠0.25mg/L、 硫酸铜 0.025mg/L、氯化钻 0.025mg/L。3.2 材料（a）植物生长袋（长17.8cm,宽16.5cm）、（b）快捞夹（长29.8cm,宽23.3cm）、（
3、c）快捞 架（长 39.5cm,宽 32.5cm）、（d）蛭石（2（）目）、（e）培养钵（高 11.5cm,直径 20cm）。3.3 仪器设备（a）抱囊分离筛（20目、100目、200目、500目）、（b）移液器（5mL）、（c）线虫孵化池、 （d）线虫计数板、（e）光学显微镜（440X）、（f）恒温光照培养箱、（g）高压蒸汽灭菌器（121、 30min）。4室内空气环境与培养条件4.1 室内空气环境室内空气环境质量要求符合GB 3095的规定。4.2 培养条件培养箱调至光周期为16h光照、8h黑暗、白天温度28、夜间温度22C、相对湿度70%的循环程 序。5鉴定材料鉴定材料种子质量应符合GB
4、 4404. 2的规定。6育苗与移苗6.1 育苗将待鉴定的种子播种在装有无菌蛭石的培养钵中，每钵40粒，常规管理。3d后种子萌发出幼苗， 剔除生长不良的植株，保留生长一致的30株幼苗备用。6.2 移苗(a)浸湿生长袋。向直立的生长袋内滤纸顶端夹缝内加入无菌水10mL,使生长袋中的滤纸充分浸 湿且生长袋底部有少量无菌水存留。(b)移苗。将30株备用幼苗转移到浸湿的滤纸顶端夹健内，保持子叶高于生长袋上沿，每个生长 袋内移入1株幼苗。(c)摆放。每2个生长袋放入1个快捞夹中，将快捞夹放到快捞架上，每个快捞架上放置30个快 捞夹。7培养将整个快捞架置了培养箱中，每三天浇5mL霍格兰氏营养液和5mL无菌
5、水。8线虫接种液制备8.1 扩繁线虫经单抱囊纯化的胞囊群体接种在感病品种根部土壤中培养35d。8.2 收集胞囊收集感病品种根部及土壤中的抱囊：将感病品种根和根部土壤放入盛有1/3清水的1L烧杯中，用 玻璃棒将泥水混合物剧烈搅拌，静置Imin左右，将上清液依次倒入20目和100目的刑囊分离筛中。用 高压水枪冲洗20目筛子上的感病品种根、土壤及残留物，将落入100目筛子上的抱囊冲洗至烧杯中， 用置于漏斗架上的单层滤纸(直径为12.5cm)过滤。用毛笔轻轻地刷分布于滤纸边缘的电囊，收集后 即得到大量电囊。8.3 3分离线虫卵将收集的抱囊转移到200目筛子上，下面套500目筛子。用橡皮塞在200目筛子
6、上碾磨抱囊使卵释 放出来，高压水枪冲洗，收集落于500目筛子上的卵。8.4 线虫卵孵化将线虫卵悬液加入线虫孵化池内，置于恒温培养箱(28,黑暗)内孵化45d,收集孵化出来的 二龄幼虫悬浮液。8.5 二龄幼虫接种液制备将二龄幼虫悬浮液注入线虫计数板，于光学品微镜下调查二龄幼虫浓度，不断稀释使线虫浓度调至 170条/niL,并作为接种液，备用。大豆抱囊线虫不同生理小种二龄幼虫接种液制备方法相同。9接种待测植株侧根生长至5cm左右（约57d）,从快措夹中取出生长袋，用移液器向主根和侧根及其 周围均匀滴加3mL胞囊线虫二龄幼虫悬浮液，将接种后的生长袋水平放置在培养箱中，24h后将生长袋 垂直放在快捞架
7、上，置培养箱中继续培养。每个品种接种30株，每10株为一个重复。10调查培养至21d后将生长袋内的滤纸连同整个根系取出，调查每株根系抱囊数量。11抗性评价方法抗性评价方法应按NY/T 3059执行，加囊指数按照（A. 1）计算，对大豆抱囊线虫病抗性评价标准见 表1,鉴定调查表参见附录表A. 1。TFI = x100 （A.1）C/V-抱囊指数；尸待鉴定材料单株根系平均抱囊数；小感病对照单株根系平均抱囊数。表1对大豆电囊线虫病抗性评价标准抱囊指数（IP）抗性09%抗（R）10%30%中抗（MR）31%60%中感（MS）60%感（S）附录A（规范性附录）表A.1对大豆胞囊线虫病抗性鉴定调查表日期:编 号材料名称抱奏数量琳囊数P) 洵指a抗性12345678910平均123456789101112131415161718192021222324252627282930鉴定技术负责人（签字）：