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1、 叶绿素的提取及含量测定实验报告(3篇) 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种自然色素。 叶绿素存在两种构造相像的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，差异仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进展光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等中，添加于胶姆糖中还可消退口臭。植物中a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基构造使它易溶于石油醚等一些非极性溶剂。 胡萝卜素（C40H56）是具有长链构造的共轭多烯。它有三种异构体，,和胡
2、萝卜素，其中异构体含量最多，也最重要。生长期较长的绿色植物中，异构体中的含量多达90。具有维生素A的生理活性，其构造是两分子维生素A在链端失去两分子水结合而成。生物体内，体受酶催化氧化即形成维生素A。目前，体可作为维生素A使用，也可作为食品工业的色素，一胡萝卜素还有防癌功能。 叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。在绿叶中通常是胡萝卜素的两倍。较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 由此可见，叶绿素等自然色素有广泛的用途，对于色素的提取与分别就显得很重要了.本试验就提取和分别做了相关的讨论。 1 试验局部 1.1 仪器与试剂 仪器：研钵、分液漏斗、显微载
3、玻片、毛细管、层析柱(2010 cm)、UV-240 紫外分光光度计 试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、乙酸乙酯(化学纯)、无 水硫酸钠、硅胶G、中性氧化铝(150目160目) 1.2 提取与分别 1.2.1 浸泡法提取色素 在研钵中放入20 g新奇的菠菜叶，参加20 mL3：2(体积比)石油醚乙醇混合液，适当研磨(不要研成糊状，否则会给分别造成困难)，用倾析法将提取液转 移到分液漏斗中，每次用10ml水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防乳化。弃去水乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠枯燥，枯燥后滤入小圆底烧瓶，在水浴上蒸发浓缩至大约l m L。 1.2.2 薄
4、层层析 取四块显微载玻片，硅胶G经0.5羧甲基纤维素钠调制后制板，在室温下晾干后在110C活化1h。选取效果最好的一块进展点样。 绽开剂：（1）石油醚丙酮=8:2（体积比） （2）石油醚乙酸乙酯=6:4（体积比） 取活化后的层析板，点样，放入预先选定绽开剂的广口瓶。瓶的内壁贴一张高5cm，绕周长4/5的滤纸，下部浸入绽开剂中，盖上瓶盖。待绽开剂上升至规定高度时，取出层析板，晾干，做出标记。 分别用两种绽开剂绽开，比拟不同绽开剂的绽开效果。观看斑点在板上的位置并排列出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素的Rf值的大小。留意更换绽开剂时，需枯燥层析瓶，不允许前一种绽开剂带入后一系统。 1.2.3 柱层析 取少
5、量脱脂棉在小烧杯中用石油醚浸润后，挤压除去气泡，放在层析柱底部。在层析柱中加15cm石油醚。参加中性氧化铝8克，翻开柱下活塞，保持石油醚高度不变，氧化铝在柱子中积累。装完后，翻开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝外表剩下12mm高为止（不能使氧化铝外表露出液面）。 将浓缩液用滴管加到柱顶部，翻开下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm,关闭活塞，加数滴石油醚，翻开活塞，使液面下降，几次反复，使色素全部进入柱体。 在柱顶加1.5cm洗脱剂9：1（体积比）石油醚丙酮。翻开活塞，用锥形瓶收集。当第一个有色成分马上滴出时，取另一锥形瓶收集，得橙黄色溶液，即胡萝卜素。 2.结果与争论 2.1提取 由于甲醇与乙醇
6、的极性相近，但是乙醇易得、无毒，所以用3：2的石油醚一乙醇通过浸泡的方法提取菠菜色素，而不是用石油醚甲醇。 2.2分别 薄层层析 薄层层析又叫薄层色谱，是色谱法中的一种，是快速分别和定性分析少量物质的一种很重要的试验技术，属固液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，可以用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分别。试验中涉及的菠菜色素的比移值(Rf)（薄层色谱法中原点到斑点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值）列表如下： 在肯定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能依据化合物的Rf值鉴定化合物。 菠菜色素中各种色素的比移值Rf大小为：胡萝b素 叶黄素叶绿素，按此挨次它
7、们的非极性依次减弱。物质极性的推断为柱层析中洗脱剂的选择供应了参考价值。 柱层析 胡萝卜素极性最小，因此胡萝卜素的洗脱剂用极性较小的9：l的石油醚-丙酮溶剂效果较好。但要收集其他几种色素得换用其他的洗脱剂，由于色素的极性各不一样，且有肯定差异。如用7：3石油醚-丙酮分别叶黄素.分别出胡萝卜素和叶 黄素后，可加大溶剂极性以较快速度洗脱叶绿素.用3：1：1的丁醇-乙醇-水洗 脱剂洗脱叶绿素。 3.结论 采纳浸泡法提取色素比抽滤法更好。在薄层层析时，用石油醚-丙酮=8:2时，能更明显的看到分层。在柱色谱洗脱剂的选择上，基于薄层分析的极性推断选择了石油醚-丙酮=9:1的溶剂作为洗脱剂，取得了特别好的效
8、果。通过试验，进一步熟悉到洗脱剂在柱层析中的重要性。 叶绿素的提取及含量测定试验报告二 【试验目的】 1、通过绿色植物色素的提取和分别，了解自然物质的分别提纯与方法。 2、通过薄层色谱分别操作，加深了解微量有机物色谱分别鉴定的原理。 【试验原理】 叶绿色存在两种构造相像的形式即叶绿素A(C55H77O5N4Mg)和叶绿素B（C55H70O6N4Mg）胡萝卜素是具有长链构造的共轭多烯，有三种异构体； 叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物。是胡萝卜素的羟基衍生物。当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。 【试验仪器】 研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶
9、，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。 【试验步骤】 1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新奇菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素构造，研磨至烂。 2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，参加30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上外表皿，防止有机溶剂蒸发。按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。 3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。 4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，参加10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10m
10、L水洗涤一次。 5、将分页漏斗中的溶液渐渐倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。 6、洗净仪器，整理试验室，清扫卫生。 【留意事项】 1.过滤时不能用滤纸，而是用脱脂棉。缘由是滤纸能汲取色素，降低滤液中色素的含量，使试验效果不明显。 2.参加丙酮后要快速、充分研磨，以防止丙酮挥发，使更多的色素溶解在丙酮中。 3.萃取过程中留意操作，防止溶液喷出。制备薄层板过程中留意基板的质量，防止玻璃边缘伤及手指。 4.牢记有机化学试验常规安全防范和急救措施。 叶绿素的提取及含量测定试验报告三 1、通过绿色植物色素的提取和分别，了解自然物质的分别提纯与方法。 2、通过薄层色谱分别操作，加深了解微量有机物
11、色谱分别鉴定的原理。 【试验原理】 叶绿色存在两种构造相像的形式即叶绿素aC55H77O5N4Mg和叶绿素b C55H70O6N4Mg ；胡萝卜素是具有长链构造的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。 【试验仪器】 研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。 【试验步骤】 1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新奇菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素构造，研磨至烂。 2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，参加30mL
12、配好的乙醇乙醚溶液，盖上外表皿，防止有机溶剂蒸发。按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。 3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。 4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，参加10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。 5、将分页漏斗中的溶液渐渐倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。 6、洗净仪器，整理试验室，清扫卫生。 【试验记录】 虽然分层现象不是特别明显，但是还是可以看得见分层现象。 【结果与争论】 1、做这个试验的时候，我觉得不应当用纱布挤干，由于个人感觉许多色素都被 纱布吸走了，导致后来的试验现象没有很明显，经过比照，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。 2、有机溶剂往往比拟简单挥发，所以参加后要盖上外表皿。 3、此试验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。 4、若最终颜色没有明显的分层，可以参加几滴丙酮帮忙分层。