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1、 ICS 11.220 CCS B 41 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 19112022 猪口腔液样品采集技术规范 Technical specification for collection of pig oral fluid samples 2022-08-31 发布 2022-10-31 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 DB42/T 19112022 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 采样前准备.1 采样用品.1 防护用品.2 记录用品.2 保存运输用品.2 5 样品采集技术.2 采集时间.2 采集步骤.2 采样注意事项.
2、3 6 样品标记与包装.3 7 样品信息登记.3 8 样品的暂存与运输.3 附录 A（资料性）猪口腔液采样登记表.4 附录 B（资料性）样品编号表.5 参考文献.6 DB42/T 19112022 III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由武汉市动物疫病预防控制中心提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：武汉市动物疫病预防控制中心、湖北省动物疫病预防控制中心、湖北金林原种畜牧有限公司、蔡甸区动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：阮
3、征、张四化、万云、赵静、岳龙、王雪、彭伏虎、裴洁、李婷婷、金鑫、刘开武、肖冉、黎巧、杨晓培、吴颢、林五清、杜娜。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：87665821，邮箱 。本文件的有关修改意见或建议，请反馈至武汉市动物疫病预防控制中心，联系电话：82285625，邮箱：。DB42/T 19112022 1 猪口腔液样品采集技术规范 1 范围 本文件规定了猪口腔液样品采样前准备、样品采集技术、样品信息登记、样品的标记与包装、样品的暂存与运输等技术要求。本文件适用生猪生产相关技术人员通过非接触性方式采集猪群病原学检测样品，开展非洲猪瘟、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪口蹄疫、猪
4、圆环病毒病等动物疫病检测。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 3075 畜禽养殖场消毒技术 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。猪口腔液 pig oral fluid 猪口腔中的唾液以及通过口腔黏膜和齿龈沟进入口腔的血清渗出液组成的混合液体。采样 sampling 按照规定的程序和要求从动物及其产品或环境取得样品的过程。样品保存液 sample prese
5、rvative solution 采样管内添加的用于保护样本的保护性液体，其基本功能是保护病原核酸的完整性，确保病原核酸检测的准确性。4 采样前准备 采样用品 4.1.1 采样用品准备 采集绳、无菌自封袋、剪刀、离心管（1.5 mL以上规格）、样品保存液等。4.1.2 样品保存液的选择 样品保存液可使用含有核酸成分稳定剂（硼酸钠）、生物活性物质保护剂（海藻糖）、生物防腐剂（ProClin950）、抗真菌抗生素（两性霉素 B 和制霉菌素中的任意一种或者两种混合）和细菌抗生素（万DB42/T 19112022 2 古霉素、粘菌素和庆大霉素中的任意一种或任意几种的混合）等成分的病毒核酸保存液，也可使
6、用商品化的具有保护核酸作用的样品保存液。4.1.3 采集绳的选择 直径1.5 cm2.0 cm的纯棉绳，长度根据猪栏高度及猪只肩高剪取，建议长度1.0 m1.2 m，也可选择符合上述要求的商品化的猪口腔液采集包，采集包内包含一根无菌棉绳、一个无菌吸管、无菌PVC手套、一管样品保存液。4.1.4 采集绳数量 4.1.4.1 猪饲养数量在 25 头以内的栏舍，悬挂一根棉绳。4.1.4.2 猪饲养数量大于 25 头的栏舍，每增加 15 头猪增加 1 根棉绳，绳子间的距离不低于 40 cm。4.1.5 灭菌 棉绳、剪刀、离心管使用前应作灭菌处理，棉绳装入无纺布布袋或棉布袋，剪刀、离心管装入铝盒或其他耐
7、高温、高压容器中，121高压蒸汽灭菌30 min，65烘箱中烘干，将棉绳转入无菌自封袋保存。商品化采集包内的棉绳无需灭菌。防护用品 一次性口罩、手套、防护服、鞋套，消毒液、医疗废弃物垃圾袋等。记录用品 油性记号笔、黑色中性笔、标签纸、采样登记表、样品编号表或自动编号打印设备等。保存运输用品 样品保存液、采样运输箱、冰袋、防震材料等。5 样品采集技术 采集时间 宜在猪只较为活跃的上午且在采食前采集。采集步骤 5.2.1 棉绳悬挂 将棉绳悬挂于猪栏内相对干净的区域，远离饲喂、饮水和排便区，不接触墙壁和猪栏。5.2.2 棉绳固定 棉绳上端打结固定，下端悬挂高度与猪身肩关节齐平。5.2.3 棉绳放置时
8、间 棉绳放置至少30 min，但不超过45 min，期间任猪自由咀嚼。5.2.4 口腔液样品收集 DB42/T 19112022 3 5.2.4.1 棉绳放置规定时间后立即进行口腔液样品收集，口腔液样品采集量不少于 2 mL。5.2.4.2 棉绳固定后脱落至地面或其他相对不干净区域，需重新进行样品采集。5.2.4.3 戴上一次性无菌手套，将棉绳下端的湿润部分放入一次性无菌自封袋中，用力挤压袋内棉绳，释放口腔液至袋底。剪掉自封袋底部一角，自封袋中口腔液倾斜倒入含有样品保存液的离心管中备用，口腔液与样品保存液体积比为 1:11.5:1，装入口腔液后盖上管盖后混匀，用封口膜固封。5.2.5 废弃物处
9、置 使用过的棉绳与其他废弃物，须装入医疗废弃物垃圾袋，扎紧袋口，按照医疗废物管理条例进行无害化处理。采样注意事项 5.3.1 个人安全防护和消毒操作按照 NY/T 3075 执行。5.3.2 每采集一份样品，更换一套一次性采样用品，避免交叉污染。5.3.3 采样后的废弃物等按照医疗废物管理条例进行无害化处理。5.3.4 若猪啃咬欲望不强或不采食，可辅助采取其他采样方式，如鼻肛拭子等。6 样品标记与包装 用油性记号笔在离心管管盖和管壁上作好标记，以阿拉伯数字标识，并在样品编号表（见附录 B）填写样品编号对应的栏舍编号，一式两份。不同栏舍不同绳子内的口腔液样品不要混样，在袋外粘贴标签，标签应注明采
10、样场点、采样日期、样品名称和数量等。必要时自封袋上贴封条，封条上加盖采样企业签章及采样人签字，并注明贴封日期。7 样品信息登记 填写猪口腔液采样登记表（见附录 A），一式两份。将填写好的 猪口腔液采样登记表 和样品编号表装在透明自封袋中，一份随样品送实验室，另一份留存备案。8 样品的暂存与运输 口腔液样品在 24 h 内可送抵检测实验室的，应立即置于样品运输箱内运输，放冰袋维持箱内温度处于 28，加填防震材料避免样品晃动。口腔液样品 24 h 内无法送达检测实验室的，迅速转置-20以下温度冻存。采样运输箱应完整无损，密封不漏液，必要时经清洁、灭菌后使用，详细按照 NY/T 541 执行。样品运
11、送应符合生物安全要求，按照 NY/T 541 执行。DB42/T 19112022 4 附录A （资料性）猪口腔液采样登记表 表A.1 给出了猪口腔液采样登记表。表A.1 猪口腔液采样登记表 采样单位：采样时间：采样人：联系电话：*场点名称 *联系人 *联系电话 *地 址 区 街（乡）村*地理坐标 经度：纬度：*场点类型 种猪场 商品代养猪场 散养户 生猪屠宰场 采样数量 基本 情况*现存栏数 年出栏数 种公畜数 母畜数 生产：后备：样品 情况 序号 样品编号（起止）养殖阶段 群体数量 备注 免疫情况 疫苗 是否免疫 疫苗类型 最后一次免疫时间*O 型口蹄疫 是 否 灭活苗 合成肽苗 *型口蹄
12、疫 是 否 灭活苗 合成肽苗 *猪瘟 是 否 脾淋苗 细胞苗 *伪狂犬 是 否 弱毒苗 灭活苗 *猪繁殖与呼吸综合征 是 否 普通型灭活苗 普通型弱毒苗 高致病性灭活苗 高致病性弱毒苗 其他 是 否 样品 情况 序号 样品编号（起止）养殖阶段 群体数量 免疫情况 疫苗 是否免疫 疫苗类型 最后一次免疫时间*O 型口蹄疫 是 否 灭活苗 合成肽苗 *型口蹄疫 是 否 灭活苗 合成肽苗 *猪瘟 是 否 脾淋苗 细胞苗 *伪狂犬 是 否 弱毒苗 灭活苗 *猪繁殖与呼吸综合征 是 否 普通型灭活苗 普通型弱毒苗 高致病性灭活苗 高致病性弱毒苗 其他 是 否 注1：表内带“*”的地方必须填写，地理坐标，
13、要求填写6位数。注2：样品编号：以例如110的简单阿拉伯数字标识在采样管上。注3：养殖阶段：哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、生产母猪、后备母猪、种公猪。注4：该表格一式两份。DB42/T 19112022 5 附录B （资料性）样品编号表 表B.1 给出了样品编号表。表B.1 样品编号表 场点名称：采样人：联系电话：采样时间：样品编号 栏舍编号 样品编号 栏舍编号 样品编号 栏舍编号 注：请详细填写表格，一式两份。填表人签字：DB42/T 19112022 6 参考文献 1 Seddon,Y,M.Optimising oral fluid collection from groups of pigs:Effect of housing system and provision of ropes.J.Veterinary Journal,2012 2 郭振华,乔松林,邓瑞广,张改平.猪口腔液中伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸稳定性研究J.动物医学进展,2021,42(01):12-17 3 DB4201/T 540 重要动物疫病监测样品采集技术规范