《蒲公英中绿原酸的提取中国石油材料化学类专业优秀本科毕业论文.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蒲公英中绿原酸的提取中国石油材料化学类专业优秀本科毕业论文.doc（29页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、中国石油大学毕业设计（论文）蒲公英中绿原酸的提取学 生：*学 号：*专 业：应用化学班 级：精细化工*指导教师：* *大学*学院二O一O年六月*学院毕业论文（设计） 中文摘要蒲公英中绿原酸的提取摘 要蒲公英干燥全草具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效，营养丰富，并且是一种来源丰富，价格低廉的植物。经测定蒲公英富含的多种活性物质皆具有广泛显著的药理活性，因此提取蒲公英中的有效成分显得尤为重要。该实验主要确定了索氏提取法提取蒲公英中绿原酸的最佳工艺条件：乙醇浓度60%、提取时间4h、料液比114，并采用紫外扫描法和薄层色谱法进行定性分析，紫外分光光度法定量分析。在此条件下，绿原酸得率为1.80%
2、，平均回收率为104.2%，RSD=1.31%。关键词：蒲公英，绿原酸，提取，纯化 IV*学院毕业论文（设计） 英文摘要Extraction of Chlorogenic Acid from Taraxacum MongolicumAbstractDried taraxacum mongolicum has marked activities such as detoxification, detumescence, diuretic, laxative and so on. In addition,taraxacum mongolicum is a plant of very nutriti
3、ous,which is abundant in source and cheap in price. Detected with the method,a kind of active components from taraxacum mongolicum have wide pharmacology Activity. So the extraction of efective component from taraxacum mongolicum is very important.The thesis had mainly studied that the optimum condi
4、tions extracting of chlorogenic acid from taraxacum mongolicum are as follows：alcohol concentration 60，feed than 1：14，the time：2hChlorogenic acid yield rate is up to 1.803 , average recovery rate is 104.2% and RSD is 1.31%Key words: taraxacum mongolicum, chlorogenic acid, extraction, isolate, analys
5、is*学院毕业论文（设计） 目录目 录 1绪论1 1.1 问题的提出及研究意1 1.1.1问题的提出1 1.1.2研究的意义2 1.2 国内外研究现状3 1.2.1 筏板基础和地基共同作用的研究现状3 1.2.2 上部结构、基础和地基共同作用的研究6 1.3 本文研究的目的和研究内容10 1.3.1 本文研究的目的10 1.3.2 本文研究的主要内容112弹性地基上薄板的分析12 2.1 引 言12 2.2 弹性地基的计算模型12 2.2.1 Winkler模型12 2.2.2 弹性半空间地基模型13 2.2.3 双参数地基模型14 2.3 双参数地基上薄板的边界元法15 2.3.1 控制微分
6、方程15 2.3.2 基本解16 2.3.3 边界积分方程21 2.3.4 边界元法27 2.4 双参数地基上带肋薄板的混合法402.4.1 肋梁的有限元分析40 2.4.2 耦合方程的建立41 2.5 程序设计422.5.1 程序的特点422.5.2 程序主框图432.5.3 程序的简介43 2.6 算例分析452.6.1 算例1452.6.2 算例245*学院毕业论文（设计） 绪论1 绪论1.1 前言当今，回归自然的热潮席卷全球，天然产物有效成分以其安全、有效性，在治疗和保健方面备受重视，同时也为天然产物尤其是中药新药的研究和发展带来了新的契机。现在天然产物有效成分已广泛应用于医药、食品、
7、化工原料、化妆品、饲料等多个领域，取得了良好的效果和效益，并且正在持续、快速地增长。蒲公英又名黄花地丁，为菊科植物，干燥全草具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效，营养丰富，并且是一种来源丰富，价格低廉的植物。经测定蒲公英富含多种活性物质，如绿原酸、多糖、黄酮类等。绿原酸具有广泛显著的药理活性，对动物毒性很小，对消化系统、血液系统和生殖系统均有疗效;可以增加肠胃蠕动和促进胃液分泌、利胆、清除自由基和抗脂质过氧化等作用;它对各种急性细菌感染疾病及由放疗、化疗所致的白细胞减少症有显著疗效；多糖为Th细胞激活剂，它能使机体免疫功能得到恢复和提高并抑制与吞噬肿瘤细胞，是具有研究价值的抗肿瘤天然物质；黄
8、酮类化合物能消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。另外还具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。 目前，国内外对蒲公英中有效成分的提取、纯化及分析工艺多有报道。本文主要综述了近20年来国内外对蒲公英有效成分的提取、分离纯化以及定性定量分析方法，以期为蒲公英的利用、开发提供参考。1.2 蒲公英有效成分的提取纯化方法 蒲公英有效成分的提取常选用不同浓度的乙醇做提取剂，常用的提取方法主要有浸渍法、煎煮法、回流提取法、超声提取法、微波萃取法等。1.2.1
9、浸渍法浸渍法是将蒲公英粉末或碎块装入适当的容器中，加入适宜的溶剂（如乙醇或水）浸渍，以溶出其中成分的方法。本法比较简单易行，但如用水为溶剂，提取液易发霉变质，须加入适当的防腐剂。付学鹏等1等用热水浸提法提取蒲公英多糖。郝雅男,张国华等2也用浸提法对蒲公英提取温度、提取次数和pH值,采用L9正交表进行正交实验。叶尔达吐尔孙别克和纳才布克苏仁3用0.7三氯乙酸铵浸提法提取蒲公英多糖，分离条件为5%甲醛脱色3h，5000001M盐酸回流脱脂3h，80乙醇去除单糖和寡糖等杂质三氯乙酸一Sevag法脱蛋白，乙醇沉淀分离多糖；用苯酚一硫酸法测定不同器官多糖含量。梁引库,徐仲阳4以青海省巨大型蒲公英为材料,
10、采用乙醇浸提法提取其黄酮含量,通过单因素试验研究不同乙醇体积分数、料液比(g:ml)、提取温度和提取时间对蒲公英黄酮提取率的影响,再通过正交试验优化提取工艺参数。浸渍法操作简便，精密度和稳定性都好，但浸出率较差。1.2.2 煎煮法煎煮法是我国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿，不宜用铁锅，以免药液变色。直火加热时通常需搅拌，以免局部药材受热太高而焦糊。付学鹏5等采用传统的水煮醇沉法，研究了蒲公英多糖的提取分离条件和对其含量进行测定。杜振文6利用煎煮法在80提取蒲公英原汁，后沉淀静置过滤后浓缩原液。虽此方法操作简单，重复性及可见性都比较好，但这种方法得到的提取物提
11、取率和纯度均不高。1.2.3 回流提取法回流提取法是应用有机溶剂加热提取，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。小量蒲公英提取操作时，可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。瓶内溶剂浸过药材表面约12cm。在水浴中加热回流，一般保持沸腾约1小时放冷过滤，再在药渣中加溶剂，做第二、三次加热回流分别约半小时，或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采用连续提取法。沈奇，赵厚民，张卫明，陆长梅，吴国荣7主要采用了正交分析的方法研究了从蒲公英中回流提取绿原酸,及采用大孔树脂NKA-9进一步分离绿原酸的最适条件,并采用制备性液相色谱的方法将其纯化。最后采用半制备性液相色谱分离得绿原酸提取物,
12、其纯度达到87.6%。谷肄静，王立娟8研究了蒲公英总黄酮的回流提取条件及其抑菌性能,考查了乙醇质量分数、料液比、提取温度、提取时间和提取次数等因素对蒲公英总黄酮提取效果的影响,并在单因素试验基础上进行了正交实验以确定最佳的提取条件。陈景耀,龚祝南,宰学明,刘华,常俊9将蒲公英全草干粉经乙醇回流提取,聚酰胺柱层析得到的粗提纯的黄酮类提取物。凌云，张永林，蔡申利10等用回流提取和硅胶柱层析，对碱地蒲公英的化学成分进行了提取。虽然在蒲公英有效成分的提取中仍较多采用回流提取法，但提取成分受热时间较长，对于蒲公英有效成分绿原酸遇热不稳定易变化的物质，采用此法时提取率并不高。1.2.4 超声提取法超声提取
13、技术的基本原理主要是利用超声波的空化作用加速蒲公英有效成分的浸出提取,另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,利于提取。与常规提取法相比,具有提取时间短、产率高、无需加热等优点。尹青、张华11采用超声波提取工艺和单因素结合正交试验的方法,确定了超声波提取的最佳工艺条件为乙醇浓度60、pH=2、料液比1：14、提取温度50、提取时间50 min。最高提取率可达60以上。李喜风、郝哲、杜云锋12采用超声提取法，正交实验设计，以总黄酮的含量为指标，对提取溶剂、料液比、提取温度、提取时间4种因素进行研究。陆海峰、罗建华、蒙春越13等也
14、采用超声波乙醇浸提法从蒲公英中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量，用蒲公英总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径具有广阔的应用前景。金艳梅，朱国军14比较了索氏回流、常规浸提、超声波提取3种方法对蒲公英中总生物碱提取的影响，考察粗提取物的提取率，其结果分别为517、276、567。黄景怡，钟振声15分别用溶剂提取法和超声提取法对蒲公英中生物碱进行了提取，其中超声提取率为溶剂提取率的五倍。两试验结果皆表明超声提取法与溶剂提取法相比，不仅省时、高效，
15、而且提取效果比较好。超声提取技术可以避免高温高压对有效成分的破坏,所以它适用于蒲公英中易分解成分的提取。但它对容器壁的厚薄及容器放置位置要求较高,否则会影响药材浸出效果。而且目前实验研究都是处于很小规模,要用于大规模生产,还有待于进一步解决有关工程设备的放大问题。q9K O*z7j4S8%_v植提之家,植提空间,中国植提论坛,植提论坛,植1.2.5 微波提取法微波萃取是利用微波能来提高萃取率的一种最新发展起来的新技术。它的原理是在微波场中,吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热,从而使得被萃取物质从基体或体系中分离,进入到介电常数较小、微波吸收能力相对差的萃
16、取剂中;微波萃取具有设备简单、适用范围广、萃取效率高、重现性好、节省时间、节省试剂、污染小等特点。近年来，微波辐射技术由于加热穿透力强、提取时间缩短、提取温度低以及高提取率，在食品工业、制药工业和化学工业中得到普遍推广应用。 所以，宁坚刚,魏永生16采用微波法对蒲公英花中的黄酮类物质进行了提取,并用分光光度法以芦丁为标样测定了其黄酮类物质的含量.结果表明,黄酮类物质的含量为3.33%。郝艳霜，耿梅英，冯志华17等把微波萃取技术引入蒲公英多糖提取工艺中，探讨微波提取条件下最佳提取工艺，以期为中药蒲公英的进一步推广应用提供前提。微波提取法得到的蒲公英多糖含量和纯度都较传统水煮醇沉法大幅度提高，而提
17、取时间大幅缩短。1.3 蒲公英化学成分的定性定量分析方法1.3.1 比色法比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，目前是中药材、中成药及其它成分定性、定量分析的常用方法。据报道，蒲公英含有大量黄酮，且与其药理作用密切相关。金京玲 18利用比色法，以芦丁为对照品，分别测定东北蒲公英和碱地蒲公英的总黄酮含量，结果表明蒲公英含有丰富的黄酮类物质并具有进一步研究和开发利用的价值。刁海鹏等19也利用比色法以芦丁为对照品测定太原地区蒲公英花中总黄酮含量，结果表明此法在550g mL范围内呈现良好的线性关系。比色法简便、快速、准确、灵敏，可作为测定蒲公英花中总黄酮含量的方法。但由于比色法需加显色剂，而许多显
18、色剂对多种成分都显色，所以专属性差，用此法测定干扰较大，使得测定结果误差较大。1.3.2 光度法分光光度法是比色法的发展。比色法仅限于可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区，而且要求近于真正的单色光。分光光度法不仅能测定有色物质，还能精确测定有共轭等结构的无色物质，可用于定性、定量，属于经典、成熟的方法。凌云等20采用紫外分光光度法对国内常用蒲公英品种进行了鉴别，结果显示17种常用蒲公英品种的紫外光谱图相同。陈峰等21采用紫外分光光度法对蒲丁合剂中的有效成分总黄酮的含量进行测定，结果总黄酮含量在2160一2960gmL范围内线性关系良好，平均加样回收率996，精密度RSD= 0.8
19、65，为该制剂的质量标准的建立奠定了基础。红外光谱灵敏度高，操作简便，谱带的专属性强，特别适合于中药材的无损快速鉴别。近年来，我国学者把红外分光光度法广泛应用于蒲公英的研究中。其中，凌云等22用PerkinElmel983G型红外光谱测定仪测定，KBr钾压片，结合紫外光谱法，核磁共振法等对兴安蒲公英的化学成分进行研究，鉴定了5个单体化合物。凌云等23也用红外光谱法对蒲公英三萜类化学成分进行研究，首次从蒲公英属植物中分得伪蒲公英甾酵，棕榈酸酯。由于中药中成分多样复杂，用红外分光光度法分析时易受药物纯度及其它外界因素的影响，所以其应用受到一定的限制24。曾凌云等27用日本岛津ICPQ一1012光谱
20、仪对蒲公英花粉中的微量元素进行研究，表明蒲公英植株生长发育、开花吐粉和微量元素量值变化范围与生境背景水平息息相关。原子吸收分光光度法灵敏度高，选择性好，精密度高，测定范围广，目前可以采用此法测定的元素已达70多种，是中药分析中用于测定微量元素重要的方法。娜吾热克孜牙库甫25采用Mc360型原子吸收光谱仪对喀什市区蒲公英中微量元素含量进行分析，结果表明，蒲公英含有丰富的人体必需的微量元素，具有较高的药用价值。但原子吸收分光光度法线性范围窄，且测一种元素要使用一种元素的灯，使用不便，因而其应用受到限制，目前已逐渐被电感耦合等离子体发射光谱所代替。凌云等26用电感耦合等离子体发射光谱法检测了5种蒲公
21、英的66种微量元素含量，结果表明蒲公英中12种元素含量较高，其中有cu、zn、Fe、Mn、Mo 5种必需微量元素；蒲公英中还含有大量的Na和K。但不同种的微量元素含量差异并不能进行蒲公英的种间鉴别。另外，1.3.3 薄层色谱法(TLC)与高效液相色谱薄层色谱法鉴别药材是依据药材中有效成分在特定溶剂条件下，在特定的薄层板展开的Rf值具有特异性。对于成分复杂的中药材，薄层色谱法在适当的条件下，可以使某一成分与其它成分或杂质分离，排除干扰，从而进行定性或定量分析。其操作简便易行，重现性好，是现代应用最多的分析方法之一28。廉景奎等29采用TLC法对蒲公英及其掺伪品莱菔叶进行定性鉴别，二者在色谱行为上
22、差异大，此法可作为二者鉴别的依据。陈巧蓉等30也用TLC法，结合性状、显微法对蒲公英进行系统的药学鉴定，为其鉴别及应用提供科学依据。此外，宋丽丽等31研究超微粉碎对蒲公英成分溶出特性的影响时，也采用薄层色谱法，结果超微细粉薄层色谱图有明显改变，其中代表成分咖啡酸可在甲醇及水中快速溶出，由此可简化提取过程。关于蒲公英制剂的研究也有报道，陈峰等32采用薄层色谱法对蒲丁合剂中主药之一的蒲公英进行定性鉴别，结果其色谱分离良好，斑点清晰可见。熊富良等33在对蒲芩消炎片的质量标准的研究中，也采用TLC法对蒲公英进行鉴别。薄层扫描法(TLCS)是在薄层色谱法的基础上发展起来的在现代中药定量分析中应用普遍快速
23、、准确简便的方法。其线性范围、精密度，重复性和加样回收率等各项方法学研究方面均获得良好的结果。吕育齐等34采用双波长薄层扫描法测定复方蒲公英冲剂中阿魏酸的含量。该方法简单灵敏，重现性好，专属性强，平均回收率为9961，RSD=12(n=5)，为中药复方制剂的质量标准的建立提供依据。此外，许重远35采用薄层扫描法对复方蒲公英灌肠液的醋酸乙酯萃取部位和氯仿部位进行展开，运用薄层扫描仪对样品进行单波长扫描，其薄层色谱图较理想。中药成分复杂多样，难于分离分析，而高效液相色谱法分离性能好，分析速度快，灵敏度高，且不受样品挥发性限制，正好适于中药化学成分的分析，已经成为现代分析必不可少的方法之一。凌云等3
24、6用HyPersil C18色谱柱,以甲醇一磷酸盐缓冲液(pH=42)(23：77)为流动相，在检测波长323nm、流速10mlmin的条件下，用HPLC法测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量。周小平等37以乙腈一O01磷酸为流动相，采用RP一HPLC法，在326nm测定蒲公英中绿原酸的含量。另据报道，张才煜等38对不同地区蒲公英中咖啡酸的含量进行测定时，采用乙腈一O.2磷酸为流动相、常温梯度洗脱，建立了快速、稳定的HPLC定量分析蒲公英中咖啡酸含量的方法。此外，吴波等39也把HPLC法应用到蒲公英颗粒中咖啡酸的含量测定，从而控制其质量。中药指纹图谱是一种综合的，宏观的和可量化的鉴别手段，用以对中
25、药材和中成药进行鉴别真伪，评价原料药材，半成品和成品质量的均一性和稳定性。当前，中药指纹图谱技术在国内外已经成为一种发展趋势，其中HPLC指纹图谱应用最为广泛。晏嫒等40用HyPersil C18色谱柱，以乙腈一磷酸盐缓冲液(磷酸调pH值为37)为流动相，在柱温35，流速O7mLmin，检测波长为323nm的条件下，用RPPlPLc法，梯度洗脱，对蒲公英的乙酸乙酯部位的HPLC指纹图谱定性分析。1.3.4 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS） 虽然高效液相色谱法是目前分离复杂体系最为有效的分析工具，但目前由于中药分析中运用的HPLC仪器绝大多数与UV或DAD检测器相连接，对于单个色谱峰仅能提供
26、保留时间及紫外图谱等信号，而对未知成分所能提供的结构信息相当有限41。于20世纪70年代发展起来的液相色谱一质谱(LCMS)联用技术，集液相色谱的高分离效能与质谱的强鉴定能力于一体，为中药化学成分的快速分析提供了一个重要的新技术。晏媛等40利用三维高效液相色谱对复方蒲公英灌肠液的乙酸乙酯部位分离分析，采用液相色谱一质谱联用技术对其色谱图谱进行确定。通过质谱的荷质比(MZ)及色谱保留时间的相互比较，确定了咖啡酸、阿魏酸和原儿茶酸3种活性成分。可知液质连用技术可用于复方蒲公英灌肠液的定性分析。1.4 蒲公英的前景综上所述，我国学者在蒲公英化学成分的提取、纯化、定性、定量分析的研究中做了大量的研究，
27、并已取得了很大的成就。目前，我国正在逐步落实天然产物特别是中药现代化的实现措施;而天然产物有效群体和有效成分的提取方法研究和应用亦是天然药物在制剂过程中不可缺少的环节，中药蒲公英有广谱抑菌、利胆保肝、抗胃损伤、抗肿瘤等方面药理作用 ,应用广泛。而且蒲公英具有药食兼用的功能 ,有望在保健药物方面进行深层次开发。所以在蒲公英行业，采用新的提取分离技术，将有利于改善传统提取方法的不足，保持原生物体中固有的有效成分及群体的自然组成，从而提高蒲公英药物的疗效，解决长期以来蒲公英在前期研究时疗效好，后期工业化生产疗效差的根本原因。同时随着科学技术的发展，高科技的提取分离及其技术也将应运而生，我们有望应用各
28、种高科技研究方法，建立一套完整的提取分析体系，从而更好地控制评价蒲公英的质量，为繁荣中国经济，中药走向世界做出大的贡献。直接回流法在中草药有效成分提取应用广泛，但此方法用于提取绿原酸类受热易分解变质成分时，提取率却不高。所以本实验采用索氏提取法对蒲公英中绿原酸的提取工艺进行了研究。2*学院毕业论文（设计） 实验部分2 实验部分2.1 仪器与试剂2.1.1主要仪器表2-1 仪器表仪器名称型号生产厂家电子分析天平AR1140梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司紫外可见分光光度计UV1100型上海美谱达仪器有限公司电热恒温鼓风干燥箱DHG9075A上海有限公和羽良电子科技有限公司电热恒温水浴锅DK98
29、1型天津市泰斯特仪器有限公司循环水式多用真空泵SHB-型郑州长城科工贸易有限公司电子万用炉220V-AC 1000W天津市泰斯特仪器有限公司电子天平BS-300+上海友声衡器有限公司旋转蒸发仪RE-2000上海亚荣生化仪器厂显微熔点测定仪X-6北京泰克有限责任公司玻璃点样毛细管1000.5mm华西医科大学仪器厂生产薄层硅胶板G(100200mm)青岛海洋化工厂分厂薄层色谱展开缸200100上海信谊仪器厂生产2.1.2主要药品表2-2 药品表试剂名称纯度生产厂家正丁醇AR成都市科龙化工试剂厂三氯甲烷AR重庆川东化工（集团）有限公司化学试剂厂乙醇（无水，95%）AR重庆川东化工（集团）有限公司化学
30、试剂厂乙酸丁酯AR重庆川东化工有限公司甲酸AR天津市科密欧化学试剂研发中心亚硝酸钠AR成都化学试剂厂氢氧化钠AR重庆博艺化学试剂有限公司丙酮AR重庆川东化工（集团）有限公司化学试剂厂盐酸AR重庆川东化工（集团）有限公司化学试剂厂冰醋酸AR重庆川东化工有限公司2.2实验方法工艺流程： 蒲公英挑选干燥粉碎筛选提取浓缩初步分离正丁醇纯化绿原酸纯品定性鉴定、定量分析（紫外可见分光光度法）2.2.1样品处理将蒲公英置于干燥箱(70)干燥至恒重，粉碎，过40目筛。置于干燥处待用。2.2.2 索氏提取准确称取已烘干的蒲公英粉末l0.00g，量取a mL b的乙醇溶液，置于索氏提取器中，水浴提取c小时。提取液
31、真空蒸发浓缩至含醇量约10%左右,再置于冰箱中静置析胶24小时。2.2.3 提取液的制备将静析液减压抽滤，滤液继续蒸发浓缩至无醇味。用三分之一体积的氯仿萃取两次，合并萃取液得上层水层；再用正丁醇萃取两次，合并萃取液得上层有机层。将有机层用正丁醇定容于50ml容量瓶中，即为绿原酸提取液。2.2.4 提取液定性分析2.2.4.1 紫外光谱法将2.2.3中所得的提取液1ml用正丁醇稀释1250倍。在200390nm范围内，以正丁醇溶液为参比溶液，每隔10nm测一次吸光度。将得到的扫描光谱图与实验2.2.5.2所得的绿原酸对照品溶液的扫描光谱图作比较。2.2.4.2 薄层层析法点样：取绿原酸对照品1m
32、g，加入1ml正丁醇，作为对照品溶液。另取硅胶薄板一块，在距薄板一端1cm处用铅笔轻轻划一条横线作为起始线，然后用毛细管吸取对照品溶液，在起始线上轻轻点样，标为1号，斑点直径不超过2mm。再用同样的方法用2.2.3中所得提取液点样标为2、3号，样点间距离不小于1cm。展开：把乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层加入层析缸中，作为展开剂。将点好的薄层板小心放入展开缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好缸盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。晾干。显色：斑点用等量10%醋酸溶液及1%亚硝酸钠溶液喷雾而显黄色，再用1%氢氧化钠溶液喷雾，则变为红色。用直尺测量
33、斑点和溶剂前沿到起始线的距离。2.2.5 提取液定量分析2.2.5.1 绿原酸对照品溶液的配制准确秤取6.1mg绿原酸标准品用无水乙醇溶解并定容至50mL容量瓶中，用移液管吸取3.0mL标准溶液于25ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度线，即得绿原酸对照品溶液。2.2.5.2 绿原酸对照品吸收光谱的测定以无水乙醇为参比，用UV-2100型双光束分光光度计在200-390nm范围内间隔10nm测量2.2.5.1所得绿原酸对照品溶液的吸光度。2.2.5.3 对照品溶液的标准曲线绘制准确秤取6.1mg绿原酸标准品用无水乙醇溶解并定容至50 mL，用移液管分别吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、
34、5.0、6.0 mL标准溶液于25ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度线，并分别编号为1、2、3、4、5、6、7。将7份溶液以无水乙醇为参比，用UV-2100型双光束分光光度计在绿原酸最大吸收波长（330nm）处测吸光度。2.2.5.4 供试品溶液的配制吸取按照实验方法2.2.3所得绿原酸粗提纯液1ml于50ml容量瓶中，用正丁醇稀释定容。再吸取此稀释液1ml于25ml比色管中，用正丁醇稀释定容至刻度，即得供试品溶液。2.2.5.5 供试品溶液的吸光度测量取2.2.5.3所得的的供试品溶液用紫外分光光度计在绿原酸最大吸收波长处（330nm）测量其吸光度。2.2.5.6 回收率的测定取四个50ml
35、的干燥容量瓶，编号为1、2、3、4。在1号容量瓶中加入2.2.3中所得的绿原酸粗提纯液1ml；在2、3、4号容量瓶中分别加入1ml绿原酸粗提纯液，再分别加入1ml绿原酸标液。4个容量瓶皆用正丁醇溶液稀释至刻度线定容。以正丁醇为参比溶液测所配4溶液的吸光度A。2.2.6 提取液结晶在实验方法2.2.3所得到的正丁醇萃取液中加入1%的氢氧化钠溶液至PH值为7，再将抽提出的绿原酸钠盐用6mol/L的盐酸溶液酸化，再用正丁醇萃取后减压浓缩干燥为粉末。再取1/1配置的丙酮/乙醇溶液10ml于50ml干燥烧杯中，在稍加热的情况下逐渐加入绿原酸粉末至饱和，并将溶液置于冰箱，即有晶体析出。将析出的晶体减压抽滤
36、后，在60干燥箱中干燥。2.2.7晶体熔点测定将实验方法2.2.6所得晶体在电热熔点仪上进行熔点及熔程的测定。*学院毕业论文（设计） 实验部分 3 结果与讨论3.1绿原酸提取3.1.1单因素实验3.1.1.1 乙醇浓度的影响安装四套索氏提取器装置编号1、2、3、4，分别加入10.00g干燥的蒲公英粉末，然后依次加入40%、60%、80%、95%的乙醇溶液100ml于索氏提取器中，在80水浴锅中提取4小时。按照2.2.2和2.2.3方法进行提取和初提纯，按照2.2.5.3方法制成供试品溶液，再按照2.2.5的定量分析方法，测量其中的绿原酸含量，并计算绿原酸的得率。实验数据见附表二， 将数据转换为
37、相应曲线，如图3.1所示：图3.1 乙醇浓度试验实验表明，不同体积分数的乙醇对提取绿原酸有一定影响，由图3.1可以看出，随着乙醇浓度的增加，绿原酸的得率逐渐升高，到乙醇浓度为60%后绿原酸的得率增加缓慢，随后，绿原酸得率随乙醇浓度的增加而降低。这是因为溶剂增多，有利于绿原酸的析出。但是溶剂浓度过大时，蒲公英中的其它杂质的渗出率也随之增加，降低了绿原酸的纯度，反而不利于绿原酸的提取。3.1.1.2 反应时间的影响安装四套索氏提取器装置编号1、2、3、4，分别加入10.00g干燥的蒲公英粉末和70%的乙醇溶液100ml，在80水浴锅中分别提取2、3、4、5小时。按照2.2.2和2.2.3方法进行提
38、取和初提纯，按照2.2.5.3方法制成供试品溶液，再按照2.2.5的定量分析方法，测量其中的绿原酸含量，并计算绿原酸的得率。实验数据见附表三， 将数据转换为相应曲线，如图3.2所示：图3.2 反应时间试验从图3.2中可以看出，在前23h的时间里绿原酸的得率增加相对增加较为缓慢，且都是比较低的。这可能因为时间太短，溶剂对绿原酸还没有提取充分。当反应进行到4h时，得率达到最大。随后，随着反应时间的增加，得率开始下降。这可能因为绿原酸本身不太稳定，长时间高温加热，会致其分解。3.1.1.3 料液比的影响安装四套索氏提取器装置编号1、2、3、4，分别加入10.00g干燥的蒲公英粉末，依次将70%的乙醇
39、溶液80ml、100ml、120ml、140ml加入索氏提取器中，在80水浴锅中提取4小时。按照2.2.2和2.2.3方法进行提取和初提纯，按照2.2.5.3方法制成供试品溶液，再按照2.2.5的定量分析方法，测量其中的绿原酸含量，并计算绿原酸的得率。实验数据见附表四， 将数据转换为相应曲线，如图3.3所示：从图3.3中可以看出，随着溶剂量的增加，绿原酸的得率逐渐上升。这说明，溶剂量越大，溶剂对绿原酸的浸提越充分。所以提取液的用量对得率的影响不容忽视。但是从经济的角度考虑，溶剂量增大会导致生产成本的增加，所以在实际生产中应选取合适的料液配比。图3.3 料液比的试验通过单因素试验可知，提取液乙醇
40、浓度、反应时间、料液比皆对绿原酸的得率有影响，其中单因素最优条件为乙醇浓度60%、提取4h、料液比114。3.1.2正交试验根据单因素的实验结果，选取乙醇浓度（A）,反应时间（B），料液比（C）三个主要影响因素，四个水平按L16(45)正交表进行正交试验，以期获得这些因素对绿原酸得率影响的大致变化趋势，并考察各因素对得率影响的主次顺序。试验方法仍旧按2.2实验方法，正交因素水平表如表3.1所示，正交试验数据如表3.2所示。表3-1 正交因素水平表水平因素A因素B因素C（gml）140%2h18260%3h110380%4h112495%5h114表3-2 正交试验数据水平因素A/%因素B/h因
41、素C（gml）吸光度A得率/%11(40)1(2)1(180)0.5071.364212(3)2（1100）0.5291.424313(4)3（1120）0.5621.514414(5)4（1140）0.5471.47352(60)120.6101.64462230.6291.69672340.6381.72082410.5801.56393(80)130.4731.271103240.5541.491113310.5261.416123420.6271.690134(95)140.4181.122144210.4521.215154320.4871.310164430.5541.491得率和
42、T15.7755.4015.558得率和T26.6235.8266.068得率和T35.8685.9605.972得率和T45.1386.2175.806极差R1.4850.8160.510从表3-2中正交试验结果的直观分析结果可以看出，乙醇浓度（A）与料液比（C）这两个因素的各个水平的总值之间存在这样的关系：T4 T1 T3 T2。而反应时间（B）的各个水平的总值之间存在这样的关系：T1 T2 T3反应时间料液比。综合各种影响因素的最佳提取条件，选取各因素中最大的T值所对应的水平，初步得出，较佳提取工艺为乙醇浓度60，料液比1：14，反应时间为4h。按此条件进行三次平行实验，得到绿原酸的平均
43、得率为1.803%，提取效果最佳。由此可得，最佳提取工艺为乙醇浓度60，料液比1：14，反应时间为4h。3.2提取液定性试验讨论3.2.1紫外扫描法按2.2.4.1方法步骤进行实验操作，用UV-1100型紫外可见分光光度计检测样品溶液在不同波长处的吸光度，实验数据见附表五， 将数据转换为相应曲线，如图3.4所示：图3.4 样品溶液吸收曲线在蒲公英中的绿原酸主要成分是绿原酸和异绿原酸，它们最大吸收峰在330nm附近，同时在220nm附近处还有个肩峰。比较样品溶液（图3.4）与绿原酸标准溶液（图3.6）紫外扫描图谱非常接近，分别在330nm附近有一最大吸收峰，在220nm附近处还有个肩峰，说明粗提
44、液中含有绿原酸成分。3.2.2 薄层色谱法按2.2.4.2方法进行试验，经等量10%醋酸溶液及1%亚硝酸钠溶液喷雾而显黄色后，可看到粗提液上升得到的斑点与标液上升所得斑点在同一直线上。直尺测得斑点距起始线距离T1为6.0cm,溶剂上升位置距起始线距离T2为10.0cm。根据公式：得Rf=0.6，说明分离效果较好，且粗提液中含有绿原酸。薄层色谱图如下图3.5所示：图3.5 薄层色谱图 3.3提取液定量分析3.3.1绿原酸吸收光谱的测定将按照2.2.5.1实验方法配制的绿原酸对照品溶液按照2.2.5.2的实验方法用UV-2100型双光束分光光度计，在200-390nm范围内间隔10nm测量其吸光度。实验数据见附表一， 将数据转换为相应的绿原酸对照品吸收曲线，如图3.6所示：图3.6 绿原酸