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1、第十五章第十五章蛋白质的合成蛋白质的合成DNA:ATGCATGCATGCRNA:AUGCAUGCAUGCPROTEIN:aa1aa2aa3aa4什么样的碱基序列决定什么样的氨基酸序列呢？如何实现碱基序列到氨基酸序列的转变？第一节第一节mRNAmRNA的概念首先是由F.Jacob和J.Monod1965年提出来的(有关mRNA发现及其证实的细节看书P391.)mRNA的半衰期很短,很不稳定,一旦完成其使命后很快就被水解掉。一、一、原核生物原核生物mRNA的结构的结构（1）5端SD序列P404P405在起始密码子AUG上游913个核苷酸处，有一段可与核糖体16SrRNA配对结合的、富含嘌呤的39个
2、核苷酸的共同序列，一般为AGGA，此序列称SD序列。它与核糖体小亚基内16SrRNA的3端一段富含嘧啶的序列GAUCACCUCCUUAOH互补，使得结合于30S亚基上的起始tRNA能正确地定位于mRNA的起始密码子AUG。（2）许多原核mRNA是多顺反子。转译时，各个基因都有自己的SD序列、起始密码子、终止密码子，分别控制其合成的起始与终止，也就是说，每个基因的翻译都是相对独立的。如E.coli，一个7000bp的mRNA编码5种与Trp合成有关的酶二、二、真核生物真核生物mRNA的结构的结构（1）真核mRNA5端具有m7GpppN帽子结构，无SD序列。帽子结构具有增强翻译效率的作用。若起始A
3、UG与帽子结构间的距离太近（小于12个核苷酸），就不能有效利用这个AUG，会从下游适当的AUG起始翻译。当距离在1780个核苷酸之间时，离体翻译效率与距离成正比。（2）真核生物mRNA通常是单顺反子。真核mRNA具有“第一AUG规律”，即当5端具有数个AUG时，其中只有一个AUG为主要开放阅读框架的翻译起点。起始AUG具有二个特点：（1）AUG上游的3经常是嘌呤，尤其是A。（2）紧跟AUG的+4常常是G。起始AUG邻近序列中，以ANNAUGGN的频率最高。若3不是A，则+4必须是G。无此规律的AUG，则无起始功能。第二节第二节遗传密码遗传密码3个碱基编码1个氨基酸,称为三联体密码或密码子。一、
4、一、遗传密码的破译遗传密码的破译美国科学家M.W.Nirenberg等,1968年获诺贝尔生理医学奖.1961年，M.W.Nirenberg等人,大肠杆菌的无细胞体系中外加poly(U)模板、20种标记的氨基酸，经保温后得到了多聚phephephe，于是推测UUU编码phe。利用同样的方法得到CCC编码pro，GGG编码gly，AAA编码lys。如果利用poly（UC），则得到多聚SerLeuSerLeu，推测UCU编码Ser，CUC编码Leu.到1965年就全部破译了64组密码子，见表P394。二、二、遗传密码的特点遗传密码的特点64个密码子中有61个编码氨基酸，3个不编码任何氨基酸而起肽链
5、合成的终止作用，称为终止密码子，它们是UAG、UAA、UGA，密码子AUG（编码Met）又称起始密码子。密码子：mRNA上由三个相邻的核苷酸组成一个密码子，代表肽链合成中的某种氨基酸或合成的起始与终止信号。（1）方向性：从mRNA的5到3（2）连读性编码一个肽链的所有密码子是一个接着一个地线形排列，密码子之间既不重叠也不间隔，从起始密码子到终止密码子（不包括终止子）构成一个完整的读码框架，又称开放阅读框架（ORF）。如果在阅读框中插入或删除一个碱基就会使其后的读码发生移位性错误（称为移码）。两个基因之间或两个ORF之间可能会互相部分重叠（共用部分序列）。（3）简并性几种密码子编码一种氨基酸的现
6、象称为密码子的简并性。如GGN（GGA、GGU、GGG、GGC）都编码Gly，那么这4种密码子就称为Gly的简并密码。只有Met和Trp没有简并密码。一般情况下密码子的简并性只涉及第三位碱基。简并性的生物学意义？A、可以降低由于遗传密码突变造成的灾难性后果假如每种氨基酸只有一个密码子，那么剩下的44个密码子都成了终止子，如果一旦哪个氨基酸的密码子发生了单碱基的点突变，那么极有可能造成肽链合成的过早终止。如GUN编码Ala，由于简并性的存在，不论第三位的U变成什么，都仍然编码AlaB、可以使DNA上的碱基组成有较达的变化余地，而仍然保持多肽上氨基酸序列不变（意思基本同上）。（4）摇摆性密码子中第
7、三位碱基与反密码子第一位碱基的配对有时不一定完全遵循AU、GC的原则，Crick把这种情况称为摇摆性，有人也称摆动配对或不稳定配对。密码子的第三位和反密码子的第一位是摇摆位点。反密码子第一位的G可以与密码子第三位的C、U配对，U可以与A、G配对，I可以和密码子的U、C、A配对，这使得该类反密码子的阅读能力更强。见表P396细胞内有几种tRNA？当遗传密码破译后，由于有61个密码子编码氨基酸，于是人们预测细胞内有61种，但事实上绝大多数细胞内只有50种左右，Crick也正是在这种情况下提出了摇摆假说并合理解释了这种情况。根据摇摆性和61个密码子，经过仔细计算，要翻译61个密码子至少需要31种tR
8、NA，外加1个起始tRNA，共需32种。但是，在叶绿体和线粒体内，由于基因组很小用到的密码子少，因此叶绿体内有30种左右tRNAs，线粒体只有24种。（5）通用性：密码子在不同物种间几乎是完全通用的。目前只发现线粒体和叶绿体内有列外情况，这也是如火如荼的转基因的前提。但要注意的是不同生物往往偏爱某一种密码子。第三节第三节核糖体核糖体又称核蛋白体，它是蛋白质合成的场所。标记各种a.a，注入大鼠体内，在不同时间取出肝脏，匀浆，离心分离各种亚细胞器，分析放射性蛋白的分布，证实蛋白质的合成是在核糖体上进行的。游离核糖体：合成细胞质蛋白。内质网核糖体：合成分泌蛋白和细胞器蛋白。不论原核细胞还是真核细胞，
9、一条mRNA可以被同时几个核糖体阅读，把同时结合并翻译同一条mRNA的多个核糖体称为多核糖体。一、一、核糖体的结构与组成核糖体的结构与组成核糖体是由核糖核酸（rRNA）和几十种蛋白质分子（核糖体蛋白）组成的一个巨大的复合体。不同生物的核糖体中，尽管其rRNA和核糖体蛋白的一级结构有所不同，但核糖体的结构高度保守。每个核糖体是由大小两个亚基组成，每个亚基都有自己不同的rRNA和蛋白质分子，表P307核糖体的大亚基上有两个重要的位点：P位点是结合肽酰tRNA的肽酰基的位点，A位点是结合氨酰tRNA的氨酰基的位点。二、二、rRNA与核糖体蛋白的结构与功能与核糖体蛋白的结构与功能(一一)、rRNA的结
10、构与功能的结构与功能结结构构：有大量的茎环（发夹）结构，形成核糖体的刚性骨架。功能：功能：（1）蛋白质合成的施工平台（骨架）（2）催 化 肽 键 形 成 的 转 移 酶 活 性 存 在 于23SrRNA上有人小心的去掉细菌核糖体的蛋白质组分，保持rRNA的相对完整性，发现蛋白质的合成仍可进行。（3）参与tRNA与mRNA的结合可能的情况是：mRNA先识别16s rRNA的特定序列并结合固定下来,然后tRNA再识别rRNA的特定部位并固定到，最后tRNA的反密码子才能与mRNA密码子配对。（4）在大小亚基的聚合中起重要作用（5）在翻译的校正和翻译的调控方面有重要功能（如可结合调控因子）RNA分子
11、似乎是整个核糖体的活跃的活性中心。分子似乎是整个核糖体的活跃的活性中心。(二二)、核糖体蛋白的结构与功能核糖体蛋白的结构与功能结结构构：大多数核糖体蛋白呈纤维状（可能起骨架作用），少数呈球状（可能起生物功能）。功能：功能：(1)维持核糖体的结构(2)新发现：一些核糖体蛋白具有DNA结合功能（HeilixturnHeilix模块）；还有些真核核糖体蛋白具有DNA修复功能【既然蛋白质是在核糖体中合成的，那么第一个核糖体中的蛋白组分又是怎样合成的？】【第一个核糖体又是怎样出现的？】【先有DNA还是先有蛋白质？】大多数科学家越来越支持RNA起源论：第一个生活细胞里出现的是RNA分子，他同时具有信息储藏
12、和生物演化的双重特性，既可以在一定程度上复制自己，又可以催化一些最初的生化反应，后来，随着活细胞的进化，DNA逐渐出现并成为更为稳定的遗传信息储存分子。既然核糖体中既有蛋白质又有RNA，那么彻底搞清楚核糖体的结构与功能及其起源也许会弄清生命的起源和演化。第四节第四节蛋白质合成的机理蛋白质合成的机理每一种游离氨基酸在掺入肽链以前必须活化并与专一的tRNA相连（有人称装载，LOAD），然后由tRNA负责将它带到核糖体上的特定位点（A位点上）并添加到新生肽链的C末端。一、氨基酸的活化和氨酰一、氨基酸的活化和氨酰tRNA的合成的合成基酸的活化和氨酰tRNA的合成是蛋白质生物合成的第一步，由氨酰tRNA
13、合成酶催化。每一种氨酰tRNA合成酶既能识别自己的配体氨基酸，又能识别对应的tRNA。(一一)、活化活化氨酰tRNA合成酶首先识别并结合专一的配体氨基酸，然后氨基酸的羧基与细胞环境中的ATP发生反应形成一个酸酐型的高能复合物（氨酰AMP）。该中间复合物暂时结合在酶上。氨基酸+ATP酶/Mg2+氨酰AMP酶+PPI(二二)、连接连接由于氨酰tRNA合成酶上还存在专一的tRNA识别位点，因此特定的游离tRNA就会识别并结合到氨酰AMP酶复合物的活性部位，此时氨基酸就会被转移到tRNA的3端，其羧基与tRNA3端的自由OH形成氨酰酯键，从而形成氨酰tRNA，这也是一个高能化合物，其能量足以形成肽键。
14、氨酰AMP酶tRNA氨酰tRNA+AMP+酶由于氨酰tRNA能量低于氨酰AMP，所以这一过程是可以自发的。氨 基 酸 一 旦 与tRNA形 成 氨 酰tRNA后，进一步的去向就由tRNA来决定了。tRNA凭借自身的反 密 码 子 与mRNA上的密码子相识别，从而把所携带的氨基酸送到肽链的一定位置上。结论：结论：（1）氨氨基基酸酸的的活活化化和和氨氨酰酰tRNA的的合合成成是是蛋蛋白白质质生生物物合合成成的的第第一一步步，每每一一种种氨氨基基酸酸在在被被掺掺入入肽肽链链之之前前都都首首先先被被活活化化和和连连接接在在专专一一tRNA上上，活活化化和和连连接接都都发发生在氨基酸的羧基上。生在氨基酸
15、的羧基上。（2）载载体体tRNA凭凭借借自自身身的的反反密密码码子子与与mRNA上上的的密密码码子子相相识识别别而而把把所所携携带带的的氨氨基基酸酸送送到到肽肽链链的的一一定定位位置上置上（3）遗遗传传信信息息是是通通过过mRNA上上的的密密码码子子与与tRNA上上的的反密码子间碱基配对作用翻译出来的反密码子间碱基配对作用翻译出来的。氨酰tRNA合成酶：每一种氨基酸都有至少一种专一的氨酰tRNA合成酶，它即能识别氨基酸，又能识别tRNA，从而把特定的氨基酸连到对应的tRNA上，有人也把氨酰tRNA合成酶的双向识别功能称为第二遗传密码。不同的氨酰tRNA合成酶在分子量、氨基酸序列、亚基组成上差异
16、较大。它是如何识别氨基酸的呢？仍不甚清楚。一些氨基酸由于结构上的显著特征容易识别如大小不同（Trp与Gly），带正负电荷（lys,asp），而一些氨基酸结构极其相似，如Ile 与Val 仅差一个甲基。尽管如此tRNAIle合成酶也能正确识别，但有时也能错误的形成Val tRNAIle，但是每一种氨酰-tRNA合成酶都有一个校正位点，由于大小原因，只有Val tRNAIle才能结合到校正位点，然后合成酶将Val又从tRNAIle上将其水解下来。氨酰-tRNA合成酶还能正确的识别和结合tRNA，对于一些酶来说，tRNA上的反密码子是其识别特征，此外，tRNA上的受体茎环（acceptor stem
17、）也是识别特征。tRNA分子的突变与校正基因可以说tRNA是一个万能接头：（1）对氨酰tRNA合成酶的识别位点（接头合成酶）（2）3端CCA上的氨基酸运载位点（接头氨基酸，装载）（3）对核糖体的识别位点（将氨基酸运送到目的地）（4）反密码子位点（接头MRNA，验货并卸载）回复突变：突变型生物有时重所获得其原有的性状，这是通过突变型遗传物质的化学变化而发生的。这种变化使遗传物质恢复到有功能的状态，重所获得原有的表型，这种过程称为回复突变，被回复的生物称为回复子。回复突变的原因很多，其中有一种回复突变是由于在基因上发生一个突变引起的，这称为基因间校正突变。大多数较正突变发生在tRNA基因上。二、二
18、、蛋白质合成的一般过程蛋白质合成的一般过程三个阶段：起始、延伸、终止。分别由不同的起始因子、延伸因子和终止因子（释放因子）参与。(一一)、翻译起始翻译起始（1）小亚基与mRNA结合（2）起始氨酰tRNA进入P位点，它的反密码子与mRNA上的起始密码子AUG碱基配对。（3）大亚基与小亚基结合形成起始复合物。(二二)、延伸延伸mRNA：5/3/，新生肽：N/C/（1）入位：第二个氨酰tRNA通过密码子反密码子的配对作用进入核糖体的A位点（氨基位点）。（2）转 肽：在 大 亚 基 上 肽 酰 转 移 酶（peptidyltransferase）的作用下，A位点氨基酸的A氨基亲核攻击P位点氨基酸的羧基
19、基团并形成肽键，结果两个氨基酸均连到了A位点的tRNA上，该过程称为转肽作用（transpeptidation），此时，P位点上卸载的tRNA从核糖体上离开。（3）移位（translocation，也可称转位）：核糖体沿着mRNA移动1个密码子位置，携带肽链的tRNA转位到P位点，A位点空出以便接纳下一个氨基酸。(三三)、终止终止由于终止密码子不能结合任何氨酰tRNA，于是肽链合成的终止因子（又称释放因子）识别并结合到终止密码子上，接着肽酰转移酶的酯化酶功能转变成水解功能，将肽链从P位点tRNA上水解掉，核糖体释放掉mRNA并解体成大小亚基，翻译结束。在翻译过程中除了核糖体大小亚基、mRNA和
20、氨酰tRNA外，还需要GTP和许多蛋白辅助因子。这些辅助因子有的起催化作用，有的起改变和稳定构象作用。(四四)、翻译后加工翻译后加工不论原核生物还是真核生物，翻译完成后，一些肽链能直接折叠成最终的活性形式，不需要加工修饰，然而经常的情况是新生肽链需要加工修饰（称为翻译后加工或修饰）包括：（1）切除部分肽段（蛋白酶）、（2）在特定氨基酸残基的侧链上添加一些基团（共价修饰）、（3）插入辅因子，还有些单肽要聚合成多亚基蛋白。翻译后加工有两方面目的：（1）功能需要（2）定向转运的需要（这在真核生物中尤为复杂，合成的蛋白要定向运输到细胞质、质膜、各种细胞器如叶绿体、线粒体、溶酶体、过氧化物酶体等）。尽管
21、原核生物与真核生物在蛋白质合成方面有许多相似之处，但也存在差异，这些差异正是一些抗生素治疗和研究应用的基础。抗生素作用氯霉素与50S亚基结合，抑制原核肽转移酶cycloheximide抑制真核肽转移酶活性Erythromycin抑制原核肽链延伸链霉素、卡那霉素结合到原核30S亚基上引起读妈错误，导致合成的多肽连一级结构改变Tetracycline与30S亚基结合，干扰氨酰tRNA的结合表18.2蛋白质合成的选择性抗生素抑制剂三、三、原核生物的蛋白质合成原核生物的蛋白质合成原核生物（大肠杆菌）每秒钟可翻译20个氨基酸，真核生物每分钟才大约50个氨基酸。(一一)、翻译起始翻译起始翻译是从形成起始复
22、合物开始的，在原核生物中该过程需要三个起始因子参与：IF1，IF2，和IF3。（IF1的功能尚不清楚）。（1）IF3首先结合在30S亚基上，防止它过早地与50S亚基结合。（2）mRNA结合到30S亚基上。（3）IF2、fMettRNAfmet结合到30S亚基上（4）50S大亚基结合到30S小亚基上，形成起始复合物。（1）IF3首先结合在30S亚基上，防止它过早地与50S亚基结合。（2）mRNA结合到30S亚基上。mRNA通过其SD序列与16SrRNA的配对结合而使它处于核糖体上的恰当的位置，并使起始密码子AUG处于P位点。SD序列与16SrRNA的配对还为识别起始密码子和Met密码子提供了一种
23、机制。（3）IF2、fMettRNAfmet结合到30S亚基上IF2是一个GTP结合蛋白，它先与30S亚基结合并促使起始氨酰tRNA（N甲酰甲硫氨酰tRNA，fMettRNAfmet）的密码子与mRNA上的AUG结合（P位点）。（4）50S大亚基结合到30S小亚基上，形成起始复合物。GTP水解成GDP释放的能量引起30S亚基构象变化，50S亚基结合到30S亚基上，同时IF2和IF3释放。因此，原核生物肽链合成的起始复合体由mRNA、70S核糖体、fMettRNAfMet组成。(二二)、延伸延伸肽链延伸分三步进行：（1）新的氨酰tRNA进入核糖体的A位点；（2）肽键形成（转肽）；（3）核糖体移位
24、。这三步构成了肽链延伸的一个循环。1、新氨酰新氨酰tRNA入位入位在进入A位点之前，新氨酰tRNA首先必须与延伸因子EFTUGTP结合。延伸因子EFTU是一个GTP结合蛋白，参与氨酰RNA的就位。氨酰RNA入位后，EFTUGTP水解，EFTUGDP从核糖体上释放下来，在第二个延伸因子EFTs帮助下EFTuGDP释放掉GDP并重新结合一分子GTP再生成EFTuGTP。2、肽键形成（转肽）肽键形成（转肽）肽键是在肽酰转移酶催化下形成的。现在认为肽酰转移酶活性存在于50S亚基23SrRNA上。驱动肽键形成的能量由P位点上的氨基酸与它的tRNA的高能肽酰酯键提供。新肽键形成后P位点卸载的tRNA就离开
25、核糖体。嘌呤霉素抑制肽键形成3、核糖体移位。核糖体移位。移位需要另一个GTP结合蛋白EFG（延伸因子，又叫移位酶）的参与。现在认为，GTP水解成GDP时释放出的能量促使核糖体构象发生变化，驱动肽酰tRNA从位点移动到位点。移位后造成核糖体位点空下，等待接纳下一个氨酰tRNA。EFTu：机动蛋白（motor protein）多亚基的复合体（如核糖体）就象一个生化机器。它由几个相互作用的工作部件组成。机械性的工作是力与距离的产物。每一个生化机器的设计都能非常准确地保证所施用的力的量、所产生运动的量与方向，最后完成一项特定的工作。其中的力通常由核苷酸结合蛋白提供，称为NTPae，实质上是机动蛋白（m
26、otor protein，或称机械化学转换器 mechanochemical transducers）因为NTP（ATP和GTP）的水解所造成的它自身构象的变化驱动了相连分子的构象向所需的方向转变。这种NTP水解驱动的构象变化主要定位于一个固定化的结构单元（称为开关）。EFTu就是一个广泛研究的GTP结合机动蛋白。EFTu有三个结构域（domain），域含有一个GTP结合位点和二个开关区，域通过一个柔软的肽段与域相连。在结合GTP的活性状态下（EF-Tu-GTP），EF-TU有一个aa-tRNA结合位点。aatRNA与 EF-Tu-GTP结合后的整个结构称为三元复合体。EF-Tu的三个域都参与
27、tRNA的结合。域的几个氨基酸残基与tRNA的TC环相互作用。aa-tRN的反密码子从三元复合物上突出来，以便与mRNA的密码子相互作用。在蛋白质合成时，EF-Tu-GDP（非活性状态）与EF-Ts相互作用释放出GDP，随后域的GTP结合位点结合一分子GTP并改变域的两个开关区的构象，结果使域与域靠近，形成个aatRNA结合缝（binding cleft）。一旦一个aatRNA结合到该裂缝中，三元复合物就进入核糖体，aatRNA的反密码子与位点上mRNA D的密码子可逆结合，核糖体构象的变化触发EF-Tu 的GTP结合位点的构象变化，随后GTP水解使域与域分开，aatRNA被释放下来，EF-T
28、U-GDP离开核糖体。(三三)、终止终止当终止密码子（UAA,UAG,UGA）进入位点时肽链合成就进入终止期。原核生物有三个释放因子（RF1,RF2,RF3）参与终止。RF1识别UAA和UAG，RF2识别UAA与UGA,RF3作用尚不清楚，可能促进RF1与RF2结合。识别过程需要GTP，并改变了核糖体的构象，使肽酰转移酶的功能发生瞬时变化，转变成酯酶功能，将连接肽链与P位点tRNA的肽酰酯键水解开，肽链从核糖体上释放，mRNA与tRNA解离，核糖体解体。原核生物蛋白质合成中的能量计算（合成一个二肽）合成二肽需8个高能键，其后每加一个a.a需4个高能键。例：合成200个a.a残基的多肽：8+19
29、84=8004n=4200=800ATPA（GTP）高能键甲酰甲硫氨酰tRNA合成ATPAMP2起始（IF2）GTPGDP1第二个a.atRNA合成ATPAMP2第二个a.atRNA进入核糖体（EFTU）GTPGDP1核糖体移位（EFG）GTPGDP1终止（？）GTPGDP1(四四)、原核生物的翻译后加工原核生物的翻译后加工一些新生肽链从核糖体上释放下来后可以直接折叠成最终的三维结构。但多数情况下是新生肽要经过一系列的加工修饰，才具有功能。1、切除加工切除加工包括去掉N端的甲酰甲硫氨酸和信号肽序列。信 号 肽（Signal peptide），也 叫 引 导 肽（leaderpeptide），是
30、决定多肽最终去向的一段序列，通常较短，典型情况下位于N端。在细菌中的一个例子就是多肽要插入细胞质膜必须借助信号肽序列。2、糖基化糖基化尽管在原核生物中，绝大多数的复合糖是糖酯，但是，也有少量的糖蛋白的报道，例如Halobacterium细胞表面的糖蛋白，有关原核生物糖基化的机制及其功能都还不知道。3、甲基化甲基化甲基转移酶利用硫酰苷甲硫氨酸对特定蛋白进行甲基化修饰。在大肠杆菌和有关细菌中发现的一种甲基转移酶能甲基化膜结合的化学受体蛋白的谷氨酸残基。这种甲基转移酶和另外一种甲基酯酶催化的甲基化/去甲基化过程在细菌趋化性的信号转导中起重要作用。4、磷酸化磷酸化近年来，已经发现由蛋白激酶和蛋白磷酸化
31、酶催化的蛋白质磷酸化/去磷酸化在原核生物中十分普遍。磷酸化/去磷酸化的意义还不太清楚。目前只知在细菌趋化性和氮代谢调空中有瞬间的磷酸化作用。(五五)、原核生物的翻译调控原核生物的翻译调控蛋白质的合成是一个非常耗能的过程。每形成一个肽键要消耗4个高能磷酸键（tRNA装载2个，aatRNA入位1个，移位1个）。在大肠杆菌中，用于合成的能量90%都给了蛋白质合成。因此，其合成必然要受到严格的调控。1、原原核核生生物物中中，蛋蛋白白质质合合成成的的调调控控多多在在转转录录的的水水平平上（操纵子模型）进行上（操纵子模型）进行。因为：（1）转录与翻译直接偶联，转录后不久就开始翻译，（2）原核生物mRNA的
32、半衰期很短，大约13分钟，随着环境条件的改变，细胞内产生的mRNA种类会迅速改变。2、mRNA翻译速率也是调控位点。翻译速率也是调控位点。翻译速率的调控大多是由于SD序列的差异造成翻译起始效率的不同。因为SD帮助识别AUG和启动翻译的起始，因此SD序列的变化能影响翻译的起始效率从而调控了mRNA的翻译速率。乳糖将纵子产物Z基因产物：半乳糖苷酶1Y基因产物：半乳糖透过酶0.5A基因产物：半乳糖乙酰化酶0.2乳糖操纵子的基因产物有3个：它们的翻译量是不等的。3、相相对对过过剩剩的的蛋蛋白白质质翻翻译译产产物物对对自自身身多多顺顺贩贩子子mRNA翻译的负调控。翻译的负调控。多顺贩子mRNA的其中一个
33、产物相对过剩时能抑制整个多顺贩子mRNA的翻译。原核的55种核糖体蛋白由20个操纵子编码。细菌的良好生长要求这些蛋白质的合成之间及其与rRNA的合成之间协调起来。例如PL11操纵子编码核糖体蛋白L1和L11，如果L1相对过剩就会占用了可利用的23SrRNA，结果抑制PL11mRNA的翻译。在23SrRNA缺乏的情况下，L1蛋白也会结合在PL11mRNA的5端抑制自身操纵子的翻译。结论：结论：（1）原核生物蛋白质的合成相对较快，它需要起始因子IF1、IF2、I3，延伸因子EFTU、EFTS、EFG，释放因子RF1、RF2、RF3的参与。（2）尽管原核生物基因的表达多在转录水平上进行调控，但翻译水
34、平上的调控也时有发生，包括SD序列对翻译起始的调控和相对过剩的翻译产物对自身多顺反子mRNA翻译的负调控等。四、四、真核生物的蛋白质合成真核生物的蛋白质合成真核细胞的蛋白质翻译需要大量的蛋白因子，翻译后加工和定向输送比原核复杂得多。(一一)、翻译起始翻译起始真核的翻译起始比原核更复杂，因为：（1）真核mRNA的二级结构更为多样和复杂（2）真核mRNA是经过多重加工的，它被转录后首先要经过各种加工才能从细胞核进入细胞质中，并形成各种各样的二级结构。一些mRNA与几种类型的蛋白质结合在一起形成一种复杂的颗粒状，有时称核糖核蛋白粒（ribonucleoproteinparticle）,在翻译之前，它
35、的二级结构必须改变，其中的蛋白质必须被去掉。（3）核糖体需要扫描mRNA以寻找翻译起始位点真核mRNA没有SD序列来帮助识别翻译起点，因此核糖体要扫描每一个mRNA。核糖体结合到mRNA的5端的帽子结构并向3端移动一寻找起始位点。这种扫描过程很复杂，知之甚少，真核的翻译起始用到的起始因子（eIF）至少有9种，多数的功能仍需进步研究。（1）40S小小亚亚基基-(eIF-3)结结合合到到(eIF-2-GTP)-Met-tRNAi复复合合物物上上形形成成40S前前起起始始复复合合物物（40Spreinitiationcomplex）（2）mRNA结结合合到到40S前前起起始始复合物上形成复合物上形成
36、40S起始复合物。起始复合物。（3）40S起起 始始 复复 合合 物物 扫扫 描描mRNA寻寻找找适适当当的的起起始始密密码码子子（通常是（通常是5端附近的端附近的AUG）。）。（4）40S复复合合物物与与60S大大亚亚基基结合形成结合形成80S起始复合物。起始复合物。（1）40S小小 亚亚 基基-(eIF-3)结结 合合 到到(eIF-2-GTP)-Met-tRNAi复复 合合 物物 上上 形形 成成 40S前前 起起 始始 复复 合合 物物（40Spreinitiationcomplex）这里，eIF2GTP介导了起始tRNA与40S小亚基的结合，然后eIF2GDP通过eIF2B（鸟苷酸释
37、放蛋白）再生。此时，由于eIF3和40S小亚基相结合，eIF6和60S大亚基相结合，所以小亚基暂时还不能与大亚基相结合。（2）mRNA结结合合到到40S前前起起始始复复合合物物上上形形成成40S起起始始复复合物。合物。该过程需要ATP，另外还需要一些起始因子（eIF4A、eIF4B、eIF4F、eIF1）。eIF4F结合在mRNA5端的帽子结构上，eIF4A（一种ATPase）和eIF4B（一种helicase）改变mRNA的二级结构。对真核起始因子的鉴定发现一些起始因子是更大因子的 组 成 亚 基，如 eIF4E（也 称 cap结 合 蛋 白 或CBP）就是由几个eIF4F亚基组成。（eIF
38、4F常称为CBP）（3）40S起起始始复复合合物物扫扫描描mRNA寻寻找找适适当当的的起起始始密密码码子（通常是子（通常是5端附近的端附近的AUG）。）。（4）40S复合物与复合物与60S大亚基结合形成大亚基结合形成80S起始复合物。起始复合物。该过程另需1个GTP。此时，60S大亚基上的eIF6已经被释放。在形成复合物过程中，在eIF5参与下，eIF2GTP水解成eIF2GDP。eIF2，eIF3，eIF4A，eIF4B，eIF4F，eIF1从起始复合物上释放。真核生物肽链合成起始复合物由mRNA、80S核糖体和MettRNAiMet组成。与原核相比，真核起始多消耗了1个ATP（形成40S起
39、始复合物）、1个GTP（形成80S起始复合物）。(二二)、延伸延伸与原核类似，也可分为aatRNA的入位、转肽、核糖体移位三步反应。1、入位入位50kD的延伸因子eEF1GTP与aatRNA结合，引导aatRNA进入A位点。aatRNA的反密码子与mRNA的密码子正确配对后eEF1GTP水解掉一个P，随后eEF1GDP离开核糖体，留下aatRNA。在eEF1、eEF1的帮助下，eEF1GDP再生为eEF1GTP。在真菌（如酵母）中，需要另一个延伸因子eEF3与eEF1共同引导aatRNA的入位。2、肽键形成（转肽）肽键形成（转肽）核糖体大亚基的肽酰转移酶活性催化A位点氨基亲核攻击P位点的aa的
40、羧基，在A位点形成一个新的肽键。P位点上卸载的tRNA从核糖体上离开3、核糖体移位核糖体移位移位需要一个100kD的延伸因子eEF2GTP。eEF2GTP结合在核糖体未知的位置上，GTP水解成释放的能量使核糖体沿mRNA移动一个密码子的位置，然后eEF2GDP离开核糖体。(三三)、终止终止真核细胞中有两个释放因子eRF1和eRF3（GTP结合蛋白）介导终止。当GTP结合到eRF3后它的GTPase活性就被激活，eRF1和eRF3GTP形成一个复合物，当UAG，UGA，UAA进入A位点时，该复合物就结合到A位点上，接着GTP水解促使释放因子离开核糖体，mRNA被释放，核糖体解体成大小亚基，新生肽
41、在肽酰转移酶催化下被释放。真核生物蛋白质合成中的能量计算（合成一个二肽）合成二肽需10个高能键，其后每加一个a.a需4个高能键。例：合成200个a.a残基的多肽：10+1984=802（4n+2）=4200+2=802ATP（GTP）高能键甲硫氨酰tRNA合成ATPAMP2起始（IF2）2GTPGDPATPADP3第二个a.atRNA合成ATPAMP2第二个a.atRNA进入核糖体（eEF1GTP）GTPGDP1核糖体移位（eEF2GTP）GTPGDP1终止（eRF3GTP）GTPGDP1(四四)、真核生物的翻译后加工真核生物的翻译后加工许多真核生物的新生肽都要经过翻译后加工或修饰，这种加工修
42、饰可以发生正延伸着的肽链中和翻译后。一般情况下，翻译后修饰一是为了功能上的需要，另一种情况是折叠成天然构象的需要。1、切除加工切除加工典型的情况包括切除N端甲硫氨酸、信号肽序列和切除部分肽段将无活性的前体转变成活性形式。一 些 酶 的 前 体（称 为 前 体 酶 proenzyme，或 酶 原zymegen）或无活性的多肽前体（称为前体蛋白，proprotein）只有切除特定的肽段后才能从无活性形式转变成活性形式。图18.11是胰岛素的翻译后加工包含信号肽的胰岛素前体称为前胰岛素原（preproinsulin）。去掉信号肽的胰岛素的前体称为胰岛素原(proinsulin)。进一步切除称为C链的
43、肽段后才能形成活性形式的胰岛素（insulin）蛋白质内含子90年代初，发现了两类新的内含子。一类是蛋白质内含子，其DNA序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的a.a序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。另一类是翻译内含子，mRNA中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列。2、糖基化糖基化真核生物中糖基化修饰很普遍。通常情况下，分泌蛋白的寡糖链较复杂，而内质网膜蛋白含有较高的甘露糖。图18.12是N糖苷键型核心寡糖链的合成,它是在磷酸多萜醇上组装成的（多萜醇存在
44、于所有细胞的细胞膜上，磷酸化多萜醇主要存在于内质网膜）。3、羟基化羟基化在结缔组织的胶原蛋白和弹性蛋白中pro和lys是经过羟基化的。此外，在乙酰胆碱酯酶（降解神经递质乙酰胆碱）和补体系统（参与免疫反应的一系列血清蛋白）都发现有4羟辅氨酸。位于粗糙内质网（RER）上的三种氧化酶（脯氨酰4羟化酶，prolyl4hydroxylase，脯氨酰3羟化酶和赖氨酰羟化酶，lysylhydroxylase）负责特定脯氨酸和赖氨酸残基的羟化。脯氨酰4羟化酶只羟化Glyxpro，脯氨酰3羟化酶羟化Glypro4Hyp（Hyp:hydroxyproline），赖氨酸羟化酶只作用于GlyXlys。胶原蛋的脯氨酸残
45、基和赖氨酸残基羟化需要Vc，饮食中Vc不足时就易患坏血症（血管脆弱，伤口难愈），原因就是胶原纤维的结构不力（weakcollagenfiberstructure）。4、磷酸化磷酸化蛋白磷酸化参与代谢调控和信号转导以及蛋白与蛋白之间的相互作用。例如，PDGF受体的酪氨酸残基经过自身磷酸化后才与细胞质定位蛋白质结合。5、亲脂修饰亲脂修饰最常见的亲脂修饰是酰化和异戊二烯化。豆蔻酰化却是最常见的酰化形式之一。N豆蔻酰化（豆蔻酸以酰酰氨键形式共价连在肽链N端的残基上）能增加特定G蛋白的亚基对膜结合的、亚基的亲和力。蛋白质亲脂修饰后可以改变膜结合能力和特定的蛋白与蛋白之间的相互作用。6、甲基化甲基化通过甲
46、基转移酶进行。天冬氨酸的甲基化能促进已破坏蛋白的修复或降解。在 2，3二 磷 酸 核 酮 糖 羧 化 酶（rihilose2,3biosphosphatecarboxylase）、钙 调 蛋 白（calmodulin）、组氨酸（histone）、某些核糖体蛋白和细胞色素C中都有甲基化的赖氨酸残基。其它可甲基化的氨基酸残基还有His（如组蛋白、视紫红质、eEF2）、Arg（如休克蛋白、核糖体蛋白）。7、二硫键形成二硫键形成二硫键通常只发现于分泌蛋白（如胰岛素）和某些膜蛋白中，在细胞质中由于有各种还原性物质（如谷胱甘肽glutathione和硫氧还蛋白thioredoxin）所以细胞质蛋白没有二硫
47、键。因为内质网腔是一个非还原性环境，所以粗糙内质网上的新生肽只暂时形成二硫键。当新生肽进入内质网腔时，一些肽链可能会按氨基酸次序依次暂时形成二硫键，但最终会通过交换二硫键位置的形式形成正确的结构，内质网中可能还有一种二硫键异构酶（disulfideisomerase）催化该过程。(五五)、真核生物的翻译调控真核生物的翻译调控1、mRNA向细胞质的运输向细胞质的运输核膜创造的转录与翻译的隔离为基因的表达提供了一个重要的调控机会。mRNA的加工（内含子切除）、mRNA向细胞质的运输都是调控位点。mRNA向细胞质的运输是一个受到严格控制的过程，至少需要mRNA5端的帽子和3端的polyA尾巴。2、m
48、RNA的稳定性的稳定性mRNA的半衰期从20分钟到24小时。在 mRNA上 有 一 些 去 稳 定 序 列（destablizationsequence）,它们的二级结构是核酸酶的底物，也有些稳定序列（stablizationsequence）。特定蛋白与mRNA上特定序列的结合能影响它的稳定性。3端的腺苷化和去腺苷化会影响它的稳定性和翻译活性。在核中，mRNA被加工后运输到细胞质时含有100200个polyA尾巴，当polyA缩减到30个以下时整个mRNA就会被降解。在特定条件下polyA能被选择型地延长或缩短。3、翻译的负调控翻译的负调控一些阻遏蛋白能结合在特定mRNA的5端阻止翻译的进行
49、，如铁蛋白的合成。铁蛋白是储铁的蛋白，主要发现于肝细胞中。铁蛋白mRNA上有铁应答元件（IRE），阻遏蛋白可以结合在上边，当细胞中铁浓度高时，那么大量的铁原子就结合到阻遏蛋白上，使它从IRE上解离，铁蛋白mRNA就可以被翻译。4、起始因子磷酸化。起始因子磷酸化。当遭遇热休克、病毒感染、生长因子缺乏等逆境时，真核细胞eIF2就发生磷酸化，大部分蛋白质的合成降低，而一些hsp核其它蛋白的翻译增强，以应付热休克和其他胁迫条件，但其机理还不清楚。5、translationalframeshifting一些mRNA似乎含有结构信息，在阅读框内可以从+1或1出开始阅读，结果翻译出两条或多条多肽。这种情况常
50、见于被反转录病毒感染的细胞内。(6)真核生物双功能mRNA极少数真核mRNA上，可能从两个不同AUG起始合成蛋白质。若两个AUG属于同一阅读框，则形成两个长短不同的蛋白质，其中有部分多肽完全相同。若两个AUG处于不同的阅读框中，则合成两个序列完全不同的蛋白质。一条mRNA可合成两种蛋白质，称双功能mRNA。(7)只有最后一个终止密码子的多基因mRNA的翻译。真核生物的泛素蛋白基因。酵母有5个泛素基因，重复组成基因簇。人类有9个。每个基因编码76个a.a的泛素。泛素羧端水解酶可识别泛素的空间构象，当翻译进行到一个单位出来后，泛素的控间构象形成，这种酶可切下泛素单位。8、蛋白质的选择性降解五、五、