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1、基金申请技巧讲座基金申请技巧讲座第四军医大学科研部第四军医大学科研部苏景宽苏景宽第第一一部分部分 如何撰写申请书如何撰写申请书一、摘一、摘 要（限要（限400400字）字）包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。如：采用如：采用方法，进行方法，进行研究，研究，阐明阐明机制或揭示机制或揭示规律，规律，为为奠定基础提供奠定基础提供思路。思路。作用：作用：画龙点睛画龙点睛效果：效果：引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心 “他到底是怎么做的
2、他到底是怎么做的？”采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，
3、培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，子生物学机制，为防治白内障提供新思路和理论
4、依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。为防治白内障提供新思路和理论依据。二、立论依据二、立论依据 对基础研究，对基础研究，对基础研究，对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，论述论述论述论述科学意义科学意义科学意义科学意义 对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，对应用基础研究，着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济
5、和社会发展中的重要科技问题 论述论述论述论述应用前景应用前景应用前景应用前景 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解具体科学问题的理解 研究领域：研究领域：研究领域：研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究治疗措施等研究 研究方向：研究方向：研
6、究方向：研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病 靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等 科学问题：科学问题：科学问题：科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病 基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研
7、究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等在研究领域层面在研究领域层面从研究方向展开从研究方向展开围绕某一具体科学问题围绕某一具体科学问题（本项目研究目标）（本项目研究目标）进行归纳分析进行归纳分析提出研究提出研究设想设想从从研究领域切入研究领域切入研究意义研究意义国内外现状分析国内外现状分析 1 1 1 1、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义 存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大 撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：从从从从领域领域
8、领域领域入手，提出主要问题入手，提出主要问题入手，提出主要问题入手，提出主要问题，引出热点研究方向，引出热点研究方向，引出热点研究方向，引出热点研究方向。围绕围绕围绕围绕热点研究热点研究热点研究热点研究方向进行简要分析，方向进行简要分析，方向进行简要分析，方向进行简要分析，找出目前尚未解决的找出目前尚未解决的找出目前尚未解决的找出目前尚未解决的具体科学具体科学具体科学具体科学问题问题问题问题，以此为切入点提出假设，阐述如果，以此为切入点提出假设，阐述如果，以此为切入点提出假设，阐述如果，以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该解决了该解决了该解决了该问题（研究问题（研究问题（研究问题（研究目标）
9、，对该目标），对该目标），对该目标），对该领域领域领域领域甚至相关甚至相关甚至相关甚至相关领域领域领域领域的的的的科学贡献（科学贡献（科学贡献（科学贡献（理理理理论意义论意义论意义论意义或应用前景）或应用前景）或应用前景）或应用前景）。老年性白内障老年性白内障老年性白内障老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增 加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老
10、龄化，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类它已是人类它已是人类它已是人类 第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。迄今为止迄今为止迄今为止迄今为止,治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可以恢复良好的
11、视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的 术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障 所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重 的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障
12、的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的 发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓发病时间延缓10101010年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少45%45%45%45%1111。所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过预防白内障预防白内障预防白内障预防白内障发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展发生或延缓其发展 的途径征服白内障的途径征服白内障的途径征服白内障
13、的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济 问题问题问题问题2222。但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障发病机理发病机理发病机理发病机理的认识的认识的认识的认识还不十分还不十分还不十分还不十分清楚。清楚。清楚。清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作
14、用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变化的相关基因化的相关基因化的相关基因化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白
15、内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次
16、性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。2 2 2
17、2、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：A A A A、低水平重复：低水平重复：低水平重复：低水平重复：不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。B B B B、文献复习不全：文献复习不全：文献复习不全：文献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词检索文献
18、方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词 不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。C C C C、总结表达不够：总结表达不够：总结表达不够：总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析，只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。D D、对方法原理理解不够对方法原理理解不够对方法原理理解不够对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉
19、，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：要要要要紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。A A A A、从从从从领域领域领域领域切入，切入，切入，切入，简要论述简要论述简要论述简要论述国内外研究国内外研究国内外研究国内外研究成果成果成果成果，并引，并引，并引，并引 出当前的热点研究方向。出当前
20、的热点研究方向。出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。B B B B、从研究方向展开，从研究方向展开，从研究方向展开，从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析较详细地分析较详细地分析国内外的研究国内外的研究国内外的研究国内外的研究 进展进展进展进展，阐明在，阐明在，阐明在，阐明在该方向上该方向上该方向上该方向上存在的问题。存在的问题。存在的问题。存在的问题。C C C C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、结果、结果、结果、当前的当前的当前的当前的现状现状现状现状及今后的及
21、今后的及今后的及今后的发展趋势发展趋势发展趋势发展趋势，详细论述和分详细论述和分详细论述和分详细论述和分 析析析析这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己从而为自己从而为自己从而为自己 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。D
22、DD D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。对拟采用的技术方法进行介绍和分析。成熟的方法成熟的方法成熟的方法成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论依重点介绍可以应用于本研究的理论依重点介绍可以应用于本研究的理论依重点介绍可以应用于本研究的理论依据和实验依据。据和实验依据。据和实验依据。据和实验依据。新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可以应，阐明可以应，阐明可以应，阐明可以应用于本研究的理论依据和实验依据。用于本研究的理论依据和实验依据
23、。用于本研究的理论依据和实验依据。用于本研究的理论依据和实验依据。需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：需特别注意的问题：必须对所运用的技术方法的必须对所运用的技术方法的必须对所运用的技术方法的必须对所运用的技术方法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚，分清楚，分清楚，分清楚，绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。例如：抗体例如：抗体例如：抗体例如：抗体 +功能基团，
24、理论上可以实现融合，功能基团，理论上可以实现融合，功能基团，理论上可以实现融合，功能基团，理论上可以实现融合，但存在但存在但存在但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。E E E E、提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。提出本项目的研究设想。防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内
25、外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致就致就致就致病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。均与老年性白内障
26、的发生有关。均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，晶状晶状晶状晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上晶状体上晶状体上晶状体上皮细胞皮细胞皮细胞皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白
27、内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。因为因为因为因为晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不
28、停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，此，此，此，晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中还是晶状体中受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响受外来刺激影响较早较早较早较早的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞
29、还发生还发生还发生还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化与单纯老化与单纯老化与单纯老化的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异3-53-53-53-5 。体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素多种因素多种因素(H2O2(H2O2
30、(H2O2(H2O2、UV-BUV-BUV-BUV-B、晶状体晶状体晶状体晶状体蛋白的自身抗体蛋白的自身抗体蛋白的自身抗体蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体上皮的损晶状体上皮的损晶状体上皮的损晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节伤是晶状体混浊的主要环节伤是晶状体混浊的主要环节伤是晶状体混浊的主要环节6-86-86-86-8。因此，从晶状体上皮因此，从晶状体上皮因此，从晶状体上皮因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭
31、示白细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而内障发病机理的主要环节。而内障发病机理的主要环节。而内障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基晶状体上皮细胞变化的基晶状体上皮细胞变化的基晶状体上皮细胞变化的基因调控机制因调控机制因调控机制因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究是问题的关键所在，也是有待我们深入研究是问题的关键所在，也是有待我们深入研究是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。的问题。的问题。的问题。白内障的形成与白内障的形成与白内障的形成与白内障的形成与晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化晶状体的老化密不可分，是晶状密不可分，是
32、晶状密不可分，是晶状密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，的结果，的结果，的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的多种基因表达的多种基因表达的多
33、种基因表达的改变。改变。改变。改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：三方面：三方面：三方面：一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。研究。研究。研究。UV-BUV-BUV-BUV-B辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是辐射作用诱导的白内
34、障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其主要的靶细胞，其Na-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATPNa-K-ATP酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c-fosc-fosc-fosc-fos基因基因基因基因的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白的表达增加；还有组蛋白H4H4H4H4、H3 H3 H3 H3 的低表达的
35、低表达的低表达的低表达 和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶C C C C、-肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、肌动蛋白、-肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达9-129-129-129-12。CarperCarperCarperCarper等等等等13131313利用利用利用利用RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-RT-PCR-DD(reverse transcription-polymerase ch
36、ain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)polymerase chain reaction differential display)技术技术技术技术研究研究研究研究H2O2H2O2H2O2H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示示示示NADHNADHN
37、ADHNADH脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶4 4 4 4亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素b b b b、谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 2 2 2（alternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factor）、
38、）、）、）、-三羟基异丁酰辅酶三羟基异丁酰辅酶三羟基异丁酰辅酶三羟基异丁酰辅酶A A A A水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因波形纤维蛋白基因（vimentinvimentinvimentinvimentin）、）、）、）、杂交的杂交的杂交的杂交的型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内
39、障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制受抑制受抑制受抑制14,1514,1514,1514,15。GongGongGongGong等等等等16161616报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白接蛋白接蛋白接蛋白3333（3 3
40、 3 3 ConnexinConnexinConnexinConnexin）基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（knockout knockout knockout knockout mousemousemousemouse）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽
41、然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对
42、人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17Lee17Lee17利用利用利用利用RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、皮细胞中纤维连接蛋白、I I I I型胶原纤维、型胶原纤维、型胶原纤维、型胶原纤维、-平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、TGF-1TGF-1TGF-1TGF-1、
43、TGF-2TGF-2TGF-2TGF-2、TGF-TGF-TGF-TGF-型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。子的基因表达有差异。KantorowKantorowKantorowKantorow等等等等18181818利用利用利用利用RT-PCR-RT-PCR-RT-PCR-RT-PCR-DDDDDDDD研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性
44、表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和12121212个个个个低表达的基因。低表达的基因。低表达的基因。低表达的基因。但就但就但就但就DD-PCRDD-PCRDD-PCRDD-PCR技术来讲，在实验中难以技术来讲，在实验中难以技术来讲，在实验中难以技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长解决假阴性、假阳性以及克隆全长解决假阴性、假阳性以及克隆全长解决假阴性、假阳性以及克隆全长cDNAcDNAcDNAcDNA的问题。的问题。的问题。的问题。上述三
45、方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。关的基因及其功能。寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞寻找白内障时晶状体上皮细胞与
46、正常晶状体上皮细胞间间间间差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。有可能揭示白内障的发病机理。寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SH），），），），它是
47、它是它是它是，但是实，但是实，但是实，但是实验操作复杂。验操作复杂。验操作复杂。验操作复杂。经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交（suppression suppression suppression suppression subtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSH是是是是DiatchenkoDiatchenkoDiatchenkoDia
48、tchenko等等等等1996199619961996年建立的方法）年建立的方法）年建立的方法）年建立的方法）简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。简化了实验操作，但仍然问题很多。我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室我校生化教研室建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术建立了改良消减杂交技术19191919，20202020，其其其其特点是：特点是：特点是：特点是：简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基简便易行，能够获
49、得目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。因，对低丰度基因也能有效分离。该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中表达的基因，其中5 5
50、 5 5个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能个为新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长cDNAcDNAcDNAcDNA，为进一为进一为进一为进一步的结构和功能研究打下基础。步的结构和功能研究打下基础。步的结