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1、课题课题1 1 菊花的组织培养菊花的组织培养专题专题3 3 植物的组织培养技术植物的组织培养技术一、一、植物组织培养的概念植物组织培养的概念 当植物当植物细胞细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于而处于离体状态离体状态时，在一定的时，在一定的营养物质营养物质、激素激素和和其他其他外界条件外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的整的植株植株概念：概念：植物组织培养原理：植物组织培养原理：植物细胞的全能性植物细胞的全能性原因：原因：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个
2、体的潜能。整个体的潜能。是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质全套遗传物质实现全能性的条件：实现全能性的条件：离体、营养、激素、其他的外界条件离体、营养、激素、其他的外界条件二、植物组织培养的基本过程二、植物组织培养的基本过程1.1.1 1、什么叫分化？其实质是什么什么叫分化？其实质是什么?2 2、什么叫脱（去）分化、再分化？什么叫脱（去）分化、再分化？3 3、愈伤组织的细胞有什么特点？愈伤组织的细胞有什么特点？愈伤组织愈伤组织1.1.4 4、简要归纳植物组织培养的过程、简要归纳植物组织培养的过程三、影响植物组织培养的因素：三、影响植物组织
3、培养的因素：1 1、外植体的选取、外植体的选取不同不同的的植物组织植物组织，培养培养的的难难易程度易程度不同不同同一种植物同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短材料，材料的年龄、保存时间的长短 也会影响实验结果也会影响实验结果2 2、培养基的配制、培养基的配制(MS(MS培养基培养基)大量元素：大量元素：N N、P P、S S、K K、CaCa、MgMg微量元素：微量元素：FeFe、ZnZn、CuCu、MnMn、MoMo、B B、I I、CoCo有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素植物激素：生长素、细胞分裂素 你能
4、说出各种营养物质的作用吗？同专题你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生中微生物培养基的配方相比，物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的培养基的配方有哪些明显的不同？不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时也能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、蔗糖提供碳源，同时也能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，养
5、基以有机营养为主，MSMS培养基则需要提供大量无机营培养基则需要提供大量无机营养。无机盐混合物包括植物生长必需的大量元素和微量养。无机盐混合物包括植物生长必需的大量元素和微量元素两大类元素两大类思考3 3、不同植物激素使用顺序、不同植物激素使用顺序有利于细胞分裂有利于细胞分裂，但但细胞细胞不分化不分化细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化 分化频率提高分化频率提高 4 4、植物激素植物激素的用量比的用量比有利于有利于根根的的分化，分化，抑制抑制芽芽的的形成形成有利于有利于芽芽的的分化，分化，抑制抑制根根的的形成形成促进愈伤组织促进愈伤组织的形成的形成比值高时比值高时比值低时比值低时比值适中比值适中
6、结果结果 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境5 5、pHpH、温度、光照、温度、光照（菊花组培）（菊花组培）每日光照每日光照12h12h6 6、无菌操作无菌操作pH=5.8 pH=5.8 温度控制在温度控制在1822 1822 制备制备MSMS固体固体培养基培养基外植体消毒外植体消毒 接种接种 培培 养养栽栽 培培四、实验操作四、实验操作 移移 栽栽（一）制备MS固体培养基1 1、配制各种母液、配制各种母液2 2、配制培养基、配制培养基3 3、灭菌、灭菌 MS MS培养基含有培养基含有2020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用
7、4 4保存的配制好的培养基母液来制备。保存的配制好的培养基母液来制备。（二）外植体消毒（二）外植体消毒菊花茎段菊花茎段流水冲洗流水冲洗加少许洗衣粉加少许洗衣粉软刷轻轻刷洗软刷轻轻刷洗流水冲洗流水冲洗20min20min无菌吸水纸吸干无菌吸水纸吸干70%70%的酒精的酒精6 6 7s7s无菌水冲洗无菌水冲洗无菌吸水纸吸干无菌吸水纸吸干无菌水冲洗无菌水冲洗3 3次次0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞1 1 2min2min(三三)接种接种接种前的消毒、灭菌接种前的消毒、灭菌接种过程中的无菌操作接种过程中的无菌操作（四）培养（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应接种后的锥形瓶最好放在
8、无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在定期消毒。培养温度控制在1818 2222，并且每日用日，并且每日用日关灯光照关灯光照12h12h（五）移栽（五）移栽在移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口在移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中(六）栽培六）栽培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适
9、时浇将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花水、施肥，直至开花1 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4 4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？五、五、结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分
10、析接种接种3 3 4d4d后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表后，在接种操作中被杂菌污染的培养物会表现出被污染的现象。适时统计污染率，分析接种操作现出被污染的现象。适时统计污染率，分析接种操作是否符合无菌要求是否符合无菌要求（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和时间一步分化成根和芽的比例和时间（三三）生根苗的移栽是否合格）生根苗的移栽是否合格
11、生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒质量分数为为5%5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12h12h。掀起塑料。掀起塑料薄膜后薄膜后24h24h才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天，等壮苗后再移植到大田或进行盆栽。统计自己几天，等壮苗后再移植到大田或进行盆栽。统计自己移栽的成活率，看看移栽是否合格移栽的
12、成活率，看看移栽是否合格 植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？思考：思考：菊菊花花的的组组织织培培养养再分化再分化材料
13、性质、营养物质、调节物质、材料性质、营养物质、调节物质、外植体的消毒外植体的消毒接种接种基本原理基本原理:细胞的全能性细胞的全能性基本过程基本过程:脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织影响因素：影响因素：操作流程：操作流程：配制配制MS固体培养基固体培养基培养培养移栽移栽栽培栽培环境条件环境条件课题小结课题小结-高挑俏菇凉高挑俏菇凉-心凉菇凉心凉菇凉爱赖床的妹子姐心丶属你巜潮妞爱赖床的妹子姐心丶属你巜潮妞 VITA萌货阿妹愤青少女萌货阿妹愤青少女Daisy（黛茜）女人无心便无殇（黛茜）女人无心便无殇Lanki蓝琪梦莎胖嘟嘟的女汉子蓝琪梦莎胖嘟嘟的女汉子女爆君女爆君他说我幼稚他说我幼稚老二婶老二婶丑姑娘
14、萌面大婶爱笑的女生最伤感丑姑娘萌面大婶爱笑的女生最伤感他不懂他不懂女王不怕黑弃他可否纯洁美青柠女王不怕黑弃他可否纯洁美青柠 姑娘梦姑娘梦西服小姐醉生梦死的奇葩妹欧派女神西服小姐醉生梦死的奇葩妹欧派女神hot小小姑娘。怪美人小小姑娘。怪美人哇噻姑娘。哇噻姑娘。EXO我们单身的理由我们单身的理由萌萌傲娇女汉子怪咖软妹萌萌傲娇女汉子怪咖软妹钟意他钟意他待我如女神爱他所爱待我如女神爱他所爱李敏镐我男神！硬咖女士李敏镐我男神！硬咖女士,凉薄女子波萝少女芭蕾舞女孩凉薄女子波萝少女芭蕾舞女孩感性女人丶女霸君一滴柠檬入我心白丝妖娆卖萌嘟嘴萌妹纸感性女人丶女霸君一滴柠檬入我心白丝妖娆卖萌嘟嘴萌妹纸他是梦数理化绝
15、望的姑娘他是梦数理化绝望的姑娘柔媚柔媚妖瞳十八岁的婚纱爱冒险的姑娘妖瞳十八岁的婚纱爱冒险的姑娘&珛美人，萌萌菇凉珛美人，萌萌菇凉臭女人臭女人,囚心小姐。囚心小姐。昔日女神凤姐。爱笑女昔日女神凤姐。爱笑女帞蕥。帞蕥。-不会哭的女孩不念不忘少年蓝不会哭的女孩不念不忘少年蓝丑女人做个爱笑的女子丑女人做个爱笑的女子骚美妞绝版妞儿能量少女骚美妞绝版妞儿能量少女！猫少女丑女神好姑娘都单身钓凯大队长姐、统领守护奥特妹葵唇绛雪红唇！猫少女丑女神好姑娘都单身钓凯大队长姐、统领守护奥特妹葵唇绛雪红唇 飘飘飘飘伊人伊人 摇摇欲坠的心、浅笑盈盈。沐晴森系女孩丿丶渔美人灬钕子我是世勋他二嫂大扎王后摇摇欲坠的心、浅笑盈盈。沐晴森系女孩丿丶渔美人灬钕子我是世勋他二嫂大扎王后平胸的骄傲平胸的骄傲！*蓝妹纸林黛玉眼睛大的菇凉蓝妹纸林黛玉眼睛大的菇凉贤情女人大女孩。女主播热欲女郎柔情女硬汉心美不如脸美贤情女人大女孩。女主播热欲女郎柔情女硬汉心美不如脸美地域少女单身姑娘照样嗨地域少女单身姑娘照样嗨悍妹纸悍妹纸.爱他我累了爱他我累了“词稀词稀”太后金刚芭比软妹心正牌嗲妹太后金刚芭比软妹心正牌嗲妹迎男而上迎男而上 葬他入我心冰冷艳城泡面女神葬他入我心冰冷艳城泡面女神