《(3.4)--细菌生化鉴定技术卫生微生物检验实验方法与技能.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《(3.4)--细菌生化鉴定技术卫生微生物检验实验方法与技能.ppt（27页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 细菌的生化鉴定技术【实验目的】1.掌握鉴别细菌常用生化反应的原理和结果判定。2.熟悉鉴别细菌常用生化反应的培养基、方法和意义。【实验内容】u糖发酵试验u吲哚试验（靛基质试验）u甲基红试验 uV-P（Voges-Proskauer）试验 u枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验u克氏双糖铁（KIA）复合试验 u动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验 1.糖发酵试验【原理】各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来鉴别细菌。【方法】将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，35培养18-24h 观察结果。【结
2、果】首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状：不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示；分解糖产酸不产气，培养基由紫色变为黄色，以“+”表示；分解糖产酸产气，除培养基顔色变化外，倒管中还有气泡，以“”表示。乳糖发酵试验左侧：伤寒沙门菌，不变色阴性（）；右侧：大肠埃希菌，产酸变黄产气气泡气泡细菌生化试验中最主要和最基本的试验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。2.吲哚试验（靛基质试验，I）【原理】有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，与吲哚试剂形成红色化合物。【方法】大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于蛋白胨水培养基中，35 18-24h后，加入吲哚试剂数滴，静置分层
3、，观察结果。2.吲哚试验（靛基质试验，I）【结果】在培养物液面上层呈玫瑰红色为阳性，不变色者为阴性。吲哚试验左侧：产气肠杆菌阴性；右侧：大肠埃希菌阳性（变红）用于肠杆菌科细菌的鉴定。【原理】某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下，加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。3.甲基红试验（MR）3.甲基红试验【方法】大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨水培养基中，35 1824 h，加入甲基红指示剂23滴观察结果。【结果】红
4、色为阳性，黄色为阴性。+甲基红试验左侧：产气肠杆菌阴性（变橘黄）；右侧：大肠埃希菌阳性（变红）主要用于鉴别大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。4.V-P（Voges-Proskauer）试验【原理】某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中精氨酸含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐（VP-乙液），及-萘酚（VP-甲液）可加速其反应。4.V-P（Voges-Proskauer）试验【方法】大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，35，2448h，加
5、入VP试剂甲液和乙液各1滴，充分摇动，静置10分钟，观察。【结果】红色为阳性，若为阴性应再培养4 h观察，仍无红色者为阴性。VP 试验左侧：产气肠杆菌阳性（变红）；右侧：大肠埃希菌阴性本试验常与甲基红试验一起使用，前者阳性的细菌，后者通常为阴性。5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验（C）【原理】当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸盐为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色为阳性，培养基不变色（绿色）为阴性。【方法】大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培养基中，35，2448h，观察。【结果】菌苔出现，培养基变为深蓝色
6、为阳性。细菌不能生长，培养基不变色（绿色）为阴性。5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验（C）枸橼酸盐利用试验左侧：大肠埃希菌阴性；右侧：产气肠杆菌阳性（有细菌生长，培养基颜色变蓝）用于肠杆菌科细菌的鉴定。6.克氏双糖铁（KIA）复合试验【原理】该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。含葡萄糖和乳糖，前者是后者的1/10。能发酵乳糖或同时发酵G，产酸量大，底层和斜面均变黄。只发酵G，产酸量少，斜面部分挥发、氧化，恢复红色。底层缺氧，酸不被氧化依然黄色。产气，琼脂出现裂隙。产硫化氢，遇铅或铁离子形成黑色沉淀。【方法】将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底层穿刺，上层斜面划线），35，24h，
7、观察。【结果】发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁沉淀。结果记录：顺序（斜面，底层，产气，产硫化氢）例如：斜面变黄，底层变黄，产生气体，不产硫化氢，用“A A+-”表示。标准管标准管痢疾杆菌痢疾杆菌KAKA 伤寒杆菌伤寒杆菌KA KA 大肠杆菌大肠杆菌AAAA2023/5/3122用于肠杆菌科细菌的初步鉴定。7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验【原理】培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲
8、哚会变红；具脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验【方法】将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU培养基，35，1824h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。【结果】扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。MIU试验左侧：未接种细菌的培养基，中间：变形杆菌尿酶阳性（红色），右侧：大肠埃希菌为尿酶阴性用于肠杆菌科细菌的鉴定。【实验任务】1.操作7个生化试验糖发酵试验（葡萄糖和乳糖）吲哚试验甲基红试验V-P试验枸橼酸盐利用试验KIA复合试验MIU复合试验(1)菌种大肠埃希菌、伤寒沙门菌、产气肠杆菌、变形杆菌。(2)培养基、试剂微量生化反应管，KIA斜面，MIU半固体靛基质试剂、甲基红试剂、VP试验甲/乙液。附附 录 简述IMVC组试验的原理、结果判断及应用。简述KIA复合试验的原理及结果判断。2023/5/3127【思考题】