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1、第三章 药物的杂质检查第一节 药物的杂质与限量第二节 杂质的检查方法第三节 药物中一般杂质的检查方法第四节 特殊杂质的检查与鉴定方法第三章 药物的杂质检查第一节 药物的杂质与限量第二节 杂质的检查方法第三节 药物中一般杂质的检查方法第四节 特殊杂质的检查与鉴定方法第三章 药物的杂质检查一、药物的杂质与纯度第一节 药物的杂质与限量杂质：任何影响药品纯度的物质。无治疗作用，影响药物稳定性和疗效，对健康有害的物质。药物的纯度：药物的纯净程度。例：1、外消旋氧氟沙星的抗感染作用仅为左旋氧氟沙星的1/2；2、青霉素在生产中可能引入过敏性杂质，可导致过敏性休克，甚至造成心衰死亡。第一节 药物的杂质与限量1
2、848年发现阿片中得盐酸罂粟碱1881年合成盐酸罂粟碱ChP1985采用目视比色法检查吗啡ChP1990采用TLC法检查有关物质发现其他生物碱ChP2010采用HPLC法检查其注射液中有关物质药物纯度需综合评价：外观性状 理化常数 杂质检查 含量测定第一节 药物的杂质与限量 检查杂质、控制纯度是保证药品质量、确保用药安全、有效的一个重要方面。第一节 药物的杂质与限量例如：化学试剂规格的硫酸钡对可溶性钡盐不做检查，药用规格的硫酸钡要做酸溶性钡盐、重金属、砷盐等检查，如果存在可溶性钡盐则会导致医疗事故。二、药物的杂质的来源生产过程中引入贮藏过程中引入（1）药物生产过程引入a:原料、反应中间体及副产
3、物。b:试剂、溶剂、催化剂类。c:生产中所用金属器皿、装置所带来的杂质。d:从植物原料中提取分离药物时，引入的结构类似物及其他杂质。e:药物在制成制剂的过程中产生新杂质。二、药物的杂质的来源例1 盐酸普鲁卡因注射剂制剂生产 过程中产生新杂质高温灭菌高温灭菌盐酸普鲁卡因注射剂盐酸普鲁卡因注射剂对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸水解进一步脱羧转化进一步脱羧转化苯胺苯胺引起毒性反应引起毒性反应（1）（2）具有不同晶型的药物：其理化常数，溶解性，稳定性、体内的吸收和疗效也有差异。如：驱虫药甲苯咪唑，有3三种晶型。C晶型的驱虫率90%B晶型的驱虫率4060%A晶型的驱虫率20%（2）药物贮藏过程引入a:保管不善或
4、贮存时间过长水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 b:包装不当二、药物的杂质的来源例:麻醉乙醚在日光、空气及湿气作用下,易氧化分解为醛及有毒的过氧化物CH3CH2OCH2CH3CH3CHO+CH3CH(OH)-O-O-CH(OH)CH3（二羟乙基过氧化物）药典规定:起封后24小时内使用例：四环素在酸性条件下可发生差向异构化反应,生成差向四环素(毒性高、活性低)pH 26三 药物杂质的分类(1)按来源分：一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如：H+、OH-、H2O、Cl-、SO42-、砷盐、重金属等特殊杂质：指在特定药物的生产和贮藏过程
5、中引入的杂质.如：乙酰水杨酸中的水杨酸；甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑三 药物杂质的分类(1)按来源分：还可分为工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂中混入的其他外来杂质(2)按性质分:信号杂质和有害杂质信号杂质：指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理.如：氯化物、硫酸盐等.有害杂质：对人体有毒害的杂质.在质量标准中严加控制,以保证用药安全.如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等.三 药物杂质的分类(3)按化学类别和特性分:无机杂质：反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其他残留的金属、无机盐等；有机杂质：合成过程未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等；残留溶剂三 药
6、物杂质的分类（1）杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量.（2）限量表示方法百分表示(%)百万分表示(ppm)（partspermillion）纯是相对的，不纯是绝对的！四 杂质的限量（3）杂质限量控制方法：四 杂质的限量限量检查法：不要求测定其准确含量，只需检查杂质是否超过限量。对杂质定量测定限量检查法三种检查方法比较法灵敏度法对照法标准对照法原理：取限度量的待检杂质对照品溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理后,比较反应结果,以确定杂质含量是否超过规定。管管2 2（对照管）（对照管）管管1 1（样品管）（样品管）操作:平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.如：蒸馏水中氯
7、化物的检查 5滴滴 1mL0.2mgCl-/50mL4g/mL规定水中氯化物含量规定水中氯化物含量 4g/mL灵敏度法原理：以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量.操作：在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应。例：乳酸中枸橼酸、草酸、磷酸或酒石酸的检查：取本品0.5g，加水适量使成5ml，混匀，用氨试液调至微碱性，加氯化钙试液1ml,置水浴中加热5分钟，不得产生浑浊。比较法操作：取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质吸光度（旋光度）,与规定限量比较,判断供试品中杂质限量。例：维生素B2中检查感光黄素，利用维生素B2几乎不溶于CCl3的性质，用无乙醇CCl3提取供试品中得感光黄素
8、，在440nm波长处测定CCl3液的吸光度，不得超过0.016.（4）杂质限量计算杂质限量%=供试品量杂质最大允许量100%100%SVL（ppm）=106C L（%）=100%SC V 注意:单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法%或ppm例1.对乙酰氨基酚中氯化钠的检查样品溶液:对照品溶液:标准标准NaCl溶液溶液(10 g/mlCl-)，取，取5.0ml同法操作同法操作比较比较,浊度不得更大浊度不得更大.计算氯化物限量是多少计算氯化物限量是多少(%)？L=CV=S100%1010-65.02.025100100%=0.01%例2.葡萄糖中重金属的检查方法：规定：规定：含重金属百万分之五
9、(5ppm)计算：应取标准铅溶液(10g/mlPb)多少ml？SVL（ppm）=106C 例4：肾上腺素中肾上腺酮的检查 盐酸溶液盐酸溶液供试品液(2.0mg/ml)样品0.2g，置100ml量瓶中 (0.05mol/L)A A310nm310nm规定：规定：0.050.05L=C酮体C样品100%E100C酮体=A1E1%1cm=435习题.溴化钠中砷盐检查方法：方法：取标准砷溶液取标准砷溶液2.0mL(每每1mL相当于相当于1g砷砷)制备砷斑制备砷斑规定：规定：含砷量不得超过含砷量不得超过4ppm计算：计算：应取供试品量应取供试品量(g)？注 意v药典中规定的检查项目，是正常生产和储存中可
10、能产生并需要控制的杂质。v药典中未规定的杂质一般有以下几种情况：1、指正常生产和储存过程中不可能引入 2、含量甚微，对人体和药物质量无不良影响 3、限量要求较宽，现有产品均能达到 4、对杂质认识不足，有待于积累资料药物的检查项下包括v纯度（杂质）检查v有效性：指与药物疗效有关的一些特定指标v安全性：异常毒性、热原、降压物质、无菌等v均匀性：制剂中药物与辅料的混合均匀程度，如含量均匀度等。复方氢氧化铝片制酸力药用炭吸着力硫酸钡疏松力曲安奈德含氟量第二节 杂质的检查方法v原则：要选专属性强的方法，使药物不干扰测定v利用药物和杂质在物理性质或化学性质的差异v合理的确定杂质检查项目与限度，合理的选择杂
11、质检查方法一、杂质的研究规范（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称1、以杂质的化学名称作为项目名称（1）当被检的是已知化合物就以该化合物的化学名称作为质量标准中的项目名称；如：卡比马唑及其片剂中得甲巯咪唑（2）如化学名太长，又无通的简称，可选用相宜的简称或习称作为项目名称，并在质量标准起草说明中应写明该已知杂质的结构式；如：肾上腺素中的酮体（3）如杂质无相应的简称或习称，则用“杂质A”、“杂质B”等作为特定检查的项目名称一、杂质的研究规范2、以某类杂质的总称作为项目名称，当杂质不能明确为单一物质而又为某一类物质，则以这类物质的总称作为项目名称;v如：硝酸毛果芸香碱中的“其他生物碱”一、杂质的
12、研究规范3、以检测方法作为项目名称：当被检测的杂质结构未知，亦不属于具体的类别时，可用“杂质吸光度”、“溶液透光率”等做项目名一、杂质的研究规范（二）杂质检查项目的确定v包括药物在质量研究和稳定性考察中检出并在批量生产中出现的杂质和降解产物v尤其是降解产物和毒性杂质，通常作为必须的检查项目。v除了降解杂质和毒性杂质外，在原料中已控制的杂质，在制剂中一般不再控制。要有针对性（三）杂质限度的确定v应考虑到生产的可行性及批与批之间的正常波动，药物的稳定性v根据原料药每日剂量来制订质控限度v创新药物：杂质限度的确定通常是要求用于临床试验的样品杂质不得超过用于临床前安全性研究的样品v仿制药物：根据已有的
13、标准制定相应的杂质限度v见P103（四）杂质检查方法的选择与验证v分析方法要求专属、灵敏v有机杂质多采用色谱法，特别HPLC法，等度洗脱可能漏检杂质的缺点，v检测限不得大于该杂质的报告限度v可根据原料药或制剂的生产工艺及储存条件，以中间体、立体异构体、粗品、重结晶母液、经加速破坏性试验后的样品作为测试品进样系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求n如何验证专属性？一化学方法1、显色反应检查法2、沉淀反应检查法3、生成气体的检查法4、滴定法 二、杂质的常用检查方法当药物中杂质与药物的化学性质相差较大时，可选择合适的试剂，使之与杂质发生化学反应。1、薄层色谱法(TLC
14、)2、高效液相色谱法(HPLC)3、气相色谱法(GC)二二色色谱谱法法色谱最大特点：分离1、薄层色谱法(TLC)（1）杂质对照品法：结构已知并能制备杂质对照品判断方法：比较杂斑数目与杂斑颜色。杂斑数杂斑数供供 斑数斑数杂对杂对杂颜色杂颜色供供 杂颜色杂颜色杂对杂对供供杂对杂对Rf1Rf2规定：规定：如显杂质斑点，如显杂质斑点，不得多于不得多于2 2个，其个，其颜色与对照品主斑颜色与对照品主斑点相比较，不得更点相比较，不得更深。深。地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠20mg/ml 地塞米松地塞米松0.20mg/ml（2）供试品自身稀释对照法（高低浓度对比法）杂质结构不确定，无杂质对照品。杂质与主成分斑
15、点颜色相近的情况下使用。例：氢化可的松中例：氢化可的松中“其他甾体其他甾体”检检查查供试液供试液:3mg/ml对照液对照液:60 g/ml(供试液稀释供试液稀释50倍倍)判断判断:杂斑数杂斑数供供 3个个,杂颜色杂颜色供供 主斑颜色主斑颜色对对（3）杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用:当药物中存在多个杂质时，若已有杂质对照品，则采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品杂质，则可同时采用供试品溶液自身稀释对照品法检查。盐酸黄酮哌酯有关物质检查：制备浓度为20mg/ml的供试品溶液；精密量取适量，用溶剂稀释成浓度为0.10mg/ml的溶液作为对照品溶液；另取3-甲基黄酮-8羧酸对照
16、品，制成浓度为0.10mg/ml的溶液作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各10L，分别点样展开。要求：供试品如显杂质斑点不得多于2个，其中在与对照品溶液相同的位置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深，另一杂质斑点颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。4)对照药物法无杂质对照品；供式品显示的杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异 要求：对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。对对供供2、高效液相色谱法(HPLC)（1）外标法（杂质对照品法）：适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制（以定量环或自动进样器进样）情况。测定供试品中某个杂质或主成分的含量：用于有杂质对照品或杂质对照
17、品易制备的情况。（2）加校正因子的主成分自身对照法：用于已知杂质的控制。以主成分为对照，用杂质对照品测定杂质的校正因子.f=As/CsAR/CRCx=AxAs/Csf（3）不加校正因子的主成分自身对照法：适用于没有杂质对照品的情况方法：将供试品溶液稀释成与杂质限量相当的溶液作为对照溶液，调节检测器的灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液，分别进样比较峰面积。（4）峰面积归一化法：只适用于供式品中结构相似、相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量的粗略考查。不适于微量杂质的检查。3、气相色谱法(GC)用于药物中挥发性杂质的检查,特别是药物中残留溶剂的检查.1、内标法加校正因子法2、外标法3、面积归一化法4
18、、标准溶液加入法同HPLC法1 供试品溶液2 对照液（供试品+待检杂质对照品）内标法或外标法1 A杂质量2 A杂总量限度检查：-即杂质量对照量（总量-杂质量）v顶空进样时，因供试品溶液与对照品处于不同的基质中，采用标准溶液加入法可消除基质效应的影响，当其他定量方法与标准溶液加入法不一致时，以后者为准。采用公式计算：L=CX X/C样100%Ais/Ax=(Cx+Cx)/CxAis:加入对照品后组分x的峰面积Ax:组分x的峰面积Cx:供试品中组分x的浓度Cx：加入的对照品浓度4、毛细管电泳法v用于酶类药物中酶类杂质的检查，检查方法与HPLC法相同1、可见-紫外分光光度法：对光吸收性质的差异（1）
19、杂杂A=A药药A 0供供A规规A（2）杂质与药物的杂质与药物的UVUV重叠：重叠：供供1A供供2A规规C（3）杂杂A 0药药A=A：供供Aab（三）光谱方法v例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查原理：二羟基蒽酚是地蒽酚制备的原料和氧化分解产物，它的三氯甲烷溶液在432nm处有最大吸收，而地蒽酚在该波长处几乎无吸收。方法：地蒽酚的三氯甲烷溶液（0.10mg/ml)在432nm处测定，吸光度不得大于0.12，即相当于含二羟基蒽酚的量不大于2.0%思考如何设计方法？2、红外分光光度法主要用于药物中无效或低效晶形中的检查。P112图3-3 甲苯达唑中A晶型检查的IR图谱3、原子吸收分光光度法v广泛用于超微量元素分析，在杂质检查中主要用于药物中金属杂质的检查,采用标准加入法供试品溶液：b对照品溶液：供试品溶液+限度量的待测元素溶液，a判断标准：b 0.5号浊度标准液。澄清乌洛托品H+水解甲醛+肼缩合甲醛腙白色混浊浊度标准液配制原理：学习要求学习要求v掌握 药物中杂质的来源、杂质的分类、杂质限量的概念和计算，一般杂质和特殊杂质检查方法。v熟悉 药物中杂质鉴别方法。v了解 热分析法的基本原理及其在杂质研究中的应用。课外泛读课外泛读v阅读中国药典有关内容1、一部附录铅、铬、砷、铜、汞测定法2、一部附录电感耦合等离子体质谱法3、二部附录重金属检查法4、二部附录砷盐检查法