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1、基因组测序技术和基因识别单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式主要内容 一、基因组测序技术 二、基因识别单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式一、基因组测序技术 大规模DNA 测序技术使全基因组的测序成为可能。现有测序仪所能测得的序列长度有限，一般500-1000bp。而基因组序列长度远大于此，必须经过下列过程才能测得：打碎 测序 拼接鸟枪法杂交测序法单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式1、鸟枪法 鸟枪法（shotgun method）,也称霰弹法。将DNA分子打碎，得到长度在500-1000bp 之间的小片段，对这些片段测序，然后根据他们之间的关系进行拼接，得
2、到最终目标序列。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式序列片段覆盖待测序列序列片段之间也存在着相互覆盖或者重叠。目标序列序列碎片单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式拼接过程 以每个片段为顶点，在每个顶点之间画有向边，有向边的权值代表交叠的字符d 得到三发送个数，方向由交叠序列前片段指向后片段。AGGTCCTAAAAGGTCCTAAAAGGTCC TAAAAGG TCCTAAA1341113单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式拼接过程 查找能顺箭头方向依次经过各顶点的所有通路中权值之和最大的，即为拼接后的序列。1 adbc，权值82 bcad，权值73 badc
3、，权值54 cadb，权值105 dbca，权值8拼接结果：AGGTCCTAAA最大权的哈密顿路径问题（Hamilton tour problem）AGGTCC TAAAAGG TCCTAAA1341113a bc d单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式2、杂交测序法 杂交测序法（sequencing by hybridization，SBH）基本原理是：构建基因微阵列（microarray，也称基因芯片，gene chip），让待测序列与其反应，然后由反应获得的信息确定待测序列的局部序列，最后根据这些局部序列重构目标序列。基因微阵列（microarray，也称基因芯片，gene
4、chip），将高密度DNA 片段阵列以一定的排列方式使其附着在基片上而形成。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式AA AT AG AC TA TT TG TC GA GT GG GC CA CT CG CCAAATAGACTATTTGTCGAGTGGGCCACTCGCCGCACCTGAACTGCACT目标序列：CGTGACT 互补序列：GCACTGA单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 由测出的局部序列：GCAC、ACTG、CTGA、CACT，可以重构目标序列的互补序列GCACTGA，从而得到目标序列 CGTGACT。可用求最大权值的哈密顿路径的方法求解。也可用欧拉路径
5、的方法求解，该算法较省时。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式3、拼接软件 Phred、Phrap、Consed Sequencher ContigExpress单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式1aggtcc2taaa3agg4tcctaaa单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标
6、题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式二、基因识别 基因组（genome）是指一个生物体、细胞或病毒的整套基因。基因组学（genomics）以基因组分析为手段，研究基因组的构成、时序表达模式和功能，并提供有关生物物种及其细胞功能的进化信息。功能基因组学研究基因和非编码序列生物学功能。比较基因组学通过生物物种基因组之间的比较，研究基因的功能。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 基因识别是识别DNA 序列上的具有生物学特征的片段，是基因组研究的基础。基因识别是生物信息学领域里的一个重要研究内容 基因识别问题，在近几年受到
7、广泛的重视 当人类基因组研究进入一个系统测序阶段时，急需可靠自动的基因组序列翻译解释技术，以处理大量已测定的但未知功能或未经注释的DNA 序列 单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式1、原核基因识别 原核基因特点：基因密度高、简单（绝大多数不含内含子）。其重点在于识别编码区域 单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 非翻译区域（untranslated regions,UTR）编码区域两端的DNA，有一部分被转录，但是不被翻译，这一部分称为非翻译区域 5 UTR-基因上游区域的非翻译区域 3 UTR-基因下游区域的非翻译区域单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式
8、对于任何给定的核酸序列（单链DNA 或mRNA），根据密码子的起始位置，可以按照三种方式进行解释。例如，序列ATTCGATCGCAA 这三种阅读顺序称为阅读框（reading frames）CAA A ATTCGATCGATTCGAT CGCAAATTCGATCGCA（1）（3）（2）单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 一个开放阅读框（ORF,open reading frame）是一个没有终止编码的密码子序列。原核基因识别任务的重点是识别开放阅读框，或者说识别长的编码区域。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式基于基因密码子特性的识别方法 辨别编码区域与非编码区域的一
9、种方法 是检查终止密码子的出现频率 终止密码子出现的期望次数为：每21 个（64/3）密码子出现一次终止密码子 单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式基本思想：如果能够找到一个比较长的序列，其相应的密码子序列不含终止密码子，则这段序列可能就是编码区域。基本算法：扫描给定的DNA 序列，在三个不同的阅读框中寻找较长的ORF。遇到终止密码子以后，回头寻找起始密码子。这种算法过于简单，不适合于处理短的ORF 或者交叠的ORF。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 识别编码区域的另一种方法是分析各种密码子出现的频率 将一个随机均匀分布的DNA 序列翻译成氨基酸序列，则在氨基酸序列
10、中上述3 种氨基酸出现的比例应该为6:4:1例如，亮氨酸、丙氨酸、色氨酸分别有6 个、4 个和1 个密码子但是在真实的氨基酸序列中，上述比例并不正确这说明DNA 的编码区域并非随机单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 假设在一条DNA 序列中已经找到所有的ORF，那么可以利用密码子频率进一步区分编码ORF 和非编码ORF 利用这种方法，可以计算一个ORF 成为编码区域的可能性。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式基于编码区域碱基组成特征的识别方法 编码序列与非编码序列在碱基组成上有区别 单个碱基的组成比例 多个碱基的组成 通过统计分析识别编码序列单击此处编辑母版标题样式
11、单击此处编辑母版标题样式2、真核基因识别问题 真核基因远比原核基因复杂：一方面，真核基因的编码区域是非连续的，编码区域被分割为若干个小片段。另一方面，真核基因具有更加丰富的基因调控信息，这些信息主要分布在基因上游区域。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式基因识别基本思路 找出基因两端的功能区域:转录启动区 终止区 在启动区下游位置寻找翻译起始密码子 识别转录剪切位点剪切给体位点剪切接受体位点单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 各种不同的方法有不同的适应面，而不同的方法有时可
12、以结合起来以提高基因识别的准确率。关键问题是如何提高一个识别算法的敏感性（sensitivity，Sn）和特异性（specificity，Sp）。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式3、基因识别的主要方法两大类识别方法：从头算方法（或基于统计的方法）根据蛋白质编码基因的一般性质和特征进行识别，通过统计值区分外显子、内含子及基因间区域 基于同源序列比较的方法 利用数据库中现有与基因有关的信息（如EST 序列、蛋白质序列），通过同源比较，帮助发现新基因。最理想的方法是综合两大类方法的优点，开发混合算法。单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 基因识别方法有：（1）基于规则的系
13、统（2）语义学方法（3）线性辨别分析（LDA）（4）决策树（5）动态规划（6）隐马尔柯夫模型（7）剪切对比排列（spliced alignment）单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式4、基因识别程序介绍表5.7 基因识别程序及访问地址（HP 主页；ESE-mail 服务器；WSweb 服务器；CL 客户/服务器协议；EX 有可执行代码；SC 有源代码）单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式表5.8 各程序的性能比较（敏感性(1)被预测出的真实编码核酸的%；敏感性(2)被正确识别出的编码外显子的%；特异性(1)预测出的编码核酸为真实编码核酸的%；特异性(2)预测出外显子为
14、真实外显子的%）单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式Genscan访问：以核酸序列SEQ5 作综合分析为例单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式SEQ5 seq5 1 gaattccagg ttggaggggc ggcaacctcc tgccagcctt caggccactc tcctgtgcct 61 gccagaagag acagagcttg aggagagctt gaggagagca ggaaaggtgg aacattgctg 121 ctgctgctca ctcagttcca caggtgggag gaacagcagg gcttagagtg ggggtcattg
15、181 tgcagatggg aaaacaaagg cccagagagg ggaagaaatg cctaggagct accgagggca 241 ggcgacctca accacagccc agtgctggag ctgtgagtgg atgtagagca gcggaatatc 301 cattcagcca gctcagggga aggacagggg ccctgaagcc aggggatgga gctgcaggga 361 agggagctca gagagaaggg gaggggagtc tgagctcagt ttcccgctgc ctgaaaggag 421 ggtggtacct actcc
16、cttca cagggtaact gaatgagaga ctgcctggag gaaagctctt 481 caagtgtggc ccaccccacc ccagtgacac cagcccctga cacgggggag ggagggcagc 541 atcaggaggg gctttctggg cacacccagt acccgtctct gagctttcct tgaactgttg 601 cattttaatc ctcacagcag ctcaacaagg tacataccgt caccatcccc attttacaga 661 tagggaaatt gaggctcgga gcggttaaac aac
17、tcacctg aggcctcaca gccagtaagt 721 gggttccctg gtctgaatgt gtgtgctgga ggatcctgtg ggtcactcgc ctggtagagc 781 cccaaggtgg aggcataaat gggactggtg aatgacagaa ggggcaaaaa tgcactcatc 841 cattcactct gcaagtatct acggcacgta cgccagctcc caagcaggtt tgcgggttgc 901 acagcggagc gatgcaatct gatttaggct tttaaaggat tgcaatcaag t
18、gggacccac 961 tagcctcaac cctgtacctc ccctcccctc cacccccagc agtctccaaa ggcctccaac 1021 aaccccagag tgggggccat gtatccaaag aaactccaag ctgtatacgg atcacactgg 1081 ttttccagga gcaaaaacag aaacagcctg aggctggtca aaattgaacc tcctcctgct 1141 ctgagcagcc tagggggcag actaagcaga gggctgtgca gacccacata aagagcctac 1201 tg
19、tgtgccag gcacttcacc cgaggcactt cacaagcatg cttgggaatg aaacttccaa 1261 ctctttggga tgcaggtgaa acagttcctg gttcagagag gtgaagcggc ctgcctgagg 1321 cagcacagct cttctttaca gatgtgcttc cccacctcta ccctgtctca cggcccccca 1381 tgccagcctg acggttgtgt ctgcctcagt catgctccat ttttccatcg ggaccatcaa 1441 gagggtgttt gtgtcta
20、agg ctgactgggt aactttggat gagcggtctc tccgctccga 1501 gcctgtttcc tcatctgtca aacgggctct aacccactct gatctcccag ggcggcagta 1561 agtcttcagc atcaggcatt ttggggtgac tcagtaaatg gtagatcttg ctaccagtgg 1621 aacagccact aaggattctg cagtgagagc agagggccag ctaagtggta ctctcccaga 1681 gactgtctga ctcacgccac cccctccacc t
21、tggacacag gacgctgtgg tttctgagcc 1741 aggtacaatg actcctttcg gtaagtgcag tggaagctgt acactgccca ggcaaagcgt 1801 ccgggcagcg taggcgggcg actcagatcc cagccagtgg acttagcccc tgtttgctcc 1861 tccgataact ggggtgacct tggttaatat tcaccagcag cctcccccgt tgcccctctg 1921 gatccactgc ttaaatacgg acgaggacag ggccctgtct cctcag
22、cttc aggcaccacc 1981 actgacctgg gacagtgaat cgtaagtatg cctttcactg cgaggggttc tggagaggct 2041 tccgagctcc ccatggccca ggcaggcagc aggtctgggg caggaggggg gttgtggagt 2101 gggtatccgc ctgctgaggt gcagggcaga tggagaggct gcagctgagc tcctattttc 2161 ataataacag cagccatgag ggttgtgtcc tgtttcccag tcctgcccgg tcccccctcg
23、2221 gtacctcctg gtggatacac tggttcctgt aagcagaagt ggatgagggt gtctaggtct 2281 gcagtcctgg caccccagga tgggggacac cagccaagat acagcaacag caacaaagcg 2341 cagccatttc tttctgtttg cacagctcct ctgtctgtcg ggggctcctg tctgttgtct 2401 cctataagcc tcaccacctc tcctactgct tgggcatgca tctttctccc cttctataga 2461 tgaggaggtt
24、aaggttcaga gaggggtggg gaggaacgcc ggctcacatt ctccatcccc 2521 tccagatatg accaggaaca gacctgtgcc agcctcagcc ttacatcaaa atgggcctcc 2581 ccatgcaccg tggacctctg ggccctcctg tcccagtgga ggacaggaag ctgtgagggg 2641 cactgtcacc cagggctcaa gctggcattc ctgaataatc gctctgcacc aggccacggc 2701 taagctcagt gcgtgattaa gcctc
25、ataac cctccaaggc agttactagt gtgattccca 2761 ttttacagat gaggaagatg gggacagaga ggtgaataac tggccccaaa tcacacacca 2821 tccataattc gggctcaggc acctggctcc agtccccaaa ctcttgaacc tggccctagt 2881 gtcactgttt ctcttgggtc tcaggcgctg gatggggaac aggaaacctg ggctgaactt 2941 gaggcctctc tgatgctcgg tgacttcaga cagttgctca
26、 acctctctgt tctcttgggc 3001 aaaacatgat aacctttgac ttctgtcccc tcccctcacc ccacccgacc ttgatctctg 3061 aagtgttgga aggatttaat ttttcctgca ctgagttttg gagacaggtc aaaaagatga 3121 ccaaggccaa ggtggccagt ttcctataga acgcctctaa aagacctgca gcaatagcag 3181 caagaactgg tattctcgag aacttgctgc gcagcaggca cttcttggca tttt
27、atgtgt 3241 atttaatttc acaatagctc tatgacaaag tccacctttc tcatctccag gaaactgagg 3301 ttcagagagg ttaagtaact tgtccaaggt cacacagcta atagcaagtt gacgtggagc 3361 aatctggcct cagagccttt aattttagcc acagactgat gctcccctct tcatttagcc 3421 aggctgcctc tgaagttttc tgattcaaga cttctggctt cagctttgta cacagagatg 3481 attc
28、aatgtc aggttttgga gcgaaatctg tttaatccca gacaaaacat ttaggattac 3541 atctcagttt tgtaagcaag tagctctgtg atttttagtg agttatttaa tgctctttgg 3601 ggctcaattt ttctatctat aaaatagggc taataatttg caccttatag ggtaagcttt 3661 gaggacagat tagatgatac ggtgcctgta aaacaccagg tgttagtaag tgtggcaatg 3721 atggtgacgc tgaggctgt
29、g tttgcttagc atagggttag gcagctggca ggcagtaaac 3781 agttggataa tttaatggaa aatttgccaa actcagatgc tgttcactgc tgagcaggag 3841 ccccttcctg ctgaaatggt cctggggagt gcagcaggct ctccgggaag aaatctacca 3901 tctctcgggc aggagctcaa cctgtgtgca ggtacaggga gggcttcctc acctggtgcc 3961 cactcatgca ttacgtcagt tattcctcat ccc
30、tgtccaa aggattcttt tctccattgt 4021 acagctatga agctagtgct caaagaagtg aagtcattta ccccaggccc cctgccagta 4081 agtgacaggg cctggtcaca cttgggttta tttattgccc agttcaacag gttgtttgac 4141 cataggcgag attctcttcc ctgcaccctg ccgggttgct cttggtccct tattttatgc 4201 tcctgggtag aaatggtgcg agattaggca gggagtggac gcttccct
31、gt ccctggcccc 4261 gcaaagagtg ctcccacctg ccccgatccc agaaatgtca ccatgaagcc ttcattcttt 4321 tggtttaaag cttggcctca gtgtccgtac accatggggt ccttggccag atggcgactt 4381 tctcctctcc agtcgccctc ccaggcacta gcttttagga gtgcagggtg ctgcctctga 4441 tagaagggcc aggagagagc aggttttgga gacctgatgt tataaggaac agcttgggag 45
32、01 gcataatgaa cccaacatga tgcttgagac caatgtcaca gcccaattct gacattcatc 4561 atctgagatc tgaggacaca gctgtctcag ttcatgatct gagtgctggg aaagccaaga 4621 cttgttccag ctttgtcact gacttgctgt atagcctcaa caaggccctg accctctctg 4681 ggcttcaaac tcttcactgt gaaaggagga aaccagagta ggtgatgtga caccaggaaa 4741 gatggatggg tg
33、tgggggaa tgtgctcctc ccagctgtca ccccctcgcc accctccctg 4801 caccagcctc tccacctcct ttgagcccag aattcccctg tctaggaggg cacctgtctc 4861 gtgcctagcc atgggaattc tccatctgtt ttgctacatt gaacccagat gccattctaa 4921 ccaagaatcc tggctgggtg caggggctct cgcctgtaac cccagcactt tgggaggcca 4981 aggcaggcgg atcaagaggt caggagt
34、tca agacctgcct ggccaacacg gtgaaacctc 5041 agctctacta aaaatacaaa aattagccag gcgtggtggc acacgcctgt aatcccagct 5101 atttgggaag ctgagacaga agaatttctt gaacccggga ggtggaggtt tcagtgagcc 5161 gagatcacgc cactgcactc caccctggcg gataaagcga gactctgtct caaaaaaaac 5221 ccaaaaacct atgttagtgt acagagggcc ccagtgaagt c
35、ttctcccag ccccactttg 5281 cacaactggg gagagtgagg ccccaggacc agaggattct tgctaaaggc caagtggata 5341 gtgatggccc tgccaggcta gaagccacaa cctctggccc tgaggccact cagcatattt 5401 agtgtcccca ccctgcagag gcccaactcc ctcctgacca ctgagccctg taatgatggg 5461 ggaatttcca taagccatga aggactgcac aaagttcagt tgggagtgaa agagaa
36、atta 5521 aagggagatg gaaatataca gcactaattt tagcaccgtc ttcagttcta acaacactag 5581 ctagctgaag aaaatacaaa catgtattat gtaatgtgtg gtctgttcca tttggattac 5641 ttagaggcac gagggccaag gagaaaggtg gtggagagaa accagctttg cacttcattt 5701 gttgctttat tggaaggaaa cttttaaaag tccaaggggg ttgaagaatc tcaatatttg 5761 ttattt
37、ccag ctttttttct ccagtttttc atttcccaaa ttcaaggaca cctttttctt 5821 tgtattttgt taagatgatg gttttggttt tgtgactagt agttaacaat gtggctgccg 5881 ggcatattct cctcagctag gacctcagtt ttcccatctg tgaagacggc aggttctacc 5941 tagggggctg caggcaggtg gtccgaagcc tgggcatatc tggagtagaa ggatcactgt 6001 ggggcagggc aggttctgtg
38、ttgctgtgga tgacgttgac tttgaccatt gctcggcaga 6061 gcctgctctc gctggttcag ccacaggccc caccactccc tattgtctca gccccgggta 6121 tgaaacatgt attcctcact ggcctatcac ctgaagcctt tgaatttgca acacctgcca 6181 acccctccct caaaagagtt gccctctcta gatccttttg atgtaaggtt tggtgttgag 6241 acttatttca ctaaattctc atacataaac atcac
39、tttat gtatgaggca aaatgaggac 6301 cagggagatg aatgacttgt cctggctcat acacctggaa agtgacagag tcagattaga 6361 tcctaggtct atctgaagtt aaaagaggtg tcttttcact tcccacctcc tccatctact 6421 ttaaagcagc acaaacccct gctttcaagg agagatgagc gtctctaaag cccctgacag 6481 caagagccca gaactgggac accattagtg acccagacgg caggtaagct
40、 gactgcagga 6541 gcatcagcct attcttgtgt ctgggaccac agagcattgt ggggacagcc ccgtctcttg 6601 ggaaaaaaac cctaagggct gaggatcctt gtgagtgttg ggtgggaaca gctcccagga 6661 ggtttaatca cagcccctcc atgctctcta gctgttgcca ttgtgcaaga tgcatttccc 6721 ttctgtgcag cagtttccct ggccactaaa tagtgggatt agatagaagc cctccaaggg 6781
41、 ctccagcttg acatgattct tgattctgat ctgacccgat tctgataatc gtgggcaggc 6841 ccattcctct tcttgtgcct cattttcttc ttttgtaaaa caatggctgt accatttgca 6901 tcttagggtc attgcagatg aaagtgttgc tgtccagagc ctgggtgcag gacctagatg 6961 taggattctg gttctgctac ttcctcagtg acattgaata gctgacctaa tctctctggc 7021 tttggtttct tcat
42、ctgtaa aagaaggata ttagcattag cacctcacgg gattgttaca 7081 agaaagcaat gaattaacac atgtgagcac ggagaacagt gcttggcata tggtaagcac 7141 tacgtacatt ttgctattct tctgattctt tcagtgttac tgatgtcggc aagtacttgg 7201 cacaggctgg tttaataatc cctaggcact ttcacgtggt gtcaatccct gatcactggg 7261 agtcatcatg tgccttgact cgggcctgg
43、c ccccccatct ctgtcttgca ggacaatgcc 7321 gtcttctgtc tcgtggggca tcctcctgct ggcaggcctg tgctgcctgg tccctgtctc 7381 cctggctgag gatccccagg gagatgctgc ccagaagaca gatacatccc accatgatca 7441 ggatcaccca accttcaaca agatcacccc caacctggct gagttcgcct tcagcctata 7501 ccgccagctg gcacaccagt ccaacagcac caatatcttc ttc
44、tccccag tgagcatcgc 7561 tacagccttt gcaatgctct ccctggggac caaggctgac actcacgatg aaatcctgga 7621 gggcctgaat ttcaacctca cggagattcc ggaggctcag atccatgaag gcttccagga 7681 actcctccgt accctcaacc agccagacag ccagctccag ctgaccaccg gcaatggcct 7741 gttcctcagc gagggcctga agctagtgga taagtttttg gaggatgtta aaaagttg
45、ta 7801 ccactcagaa gccttcactg tcaacttcgg ggacaccgaa gaggccaaga aacagatcaa 7861 cgattacgtg gagaagggta ctcaagggaa aattgtggat ttggtcaagg agcttgacag 7921 agacacagtt tttgctctgg tgaattacat cttctttaaa ggtaaggttg ctcaaccagc 7981 ctgagctgtt tcccatagaa acaagcaaaa atatttctca aaccatcagt tcttgaactc 8041 tccttggc
46、aa tgcattatgg gccatagcaa tgcttttcag cgtggattct tcagttttct 8101 acacacaaac actaaaatgt tttccatcat tgagtaattt gaggaaataa tagattaaac 8161 tgtcaaaact actgacgctc tgcagaactt ttcagagcct ttaatgtcct tgtgtatact 8221 gtatatgtag aatatataat gcttagaact atagaacaaa ttgtaataca ctgcataaag 8281 ggatagtttc atggaacata ct
47、ttacacga ctctagtgtc ccagaatcag tatcagtttt 8341 gcaatctgaa agacctgggt tcaaatcctg cctctaacac aattagcttt tgacaaaaac 8401 aatgcattct acctctttga ggtgctaatt tctcatctta gcatggacaa aataccattc 8461 ttgctgtcag gtttttttag gattaaacaa atgacaaaga ctgtggggat ggtgtgtggc 8521 atacagcagg tgatggactc ttctgtatct caggctg
48、cct tcctgcccct gaggggttaa 8581 aatgccaggg tcctgggggc cccagggcat tctaagccag ctcccactgt cccaggaaaa 8641 cagcataggg gaggggaggt gggaggcaag gccaggggct gcttcctcca ctctgaggct 8701 cccttgctct tgaggcaaag gagggcagtg gaggcaagcc aggctgcagt cagcacagct 8761 aaagtcctgg ctctgctgtg gccttagtgg gggcccaggt ccctctccag c
49、cccagtctc 8821 ctccttctgt ccaatgagaa agctgggatc aggggtccct gaggcccctg tccactctgc 8881 atgcctcgat ggtgaagctc tgttggtatg gcagagggga ggctgctcag gcatctgcat 8941 ttcccctgcc aatctagagg atgaggaaag ctctcaggaa tagtaagcag aatgtttgcc 9001 ctggatgaat aactgagctg ccaattaaca aggggcaggg agccttagac agaaggtacc 9061 a
50、aatatgcct gatgctccaa cattttattt gtaatatcca agacaccctc aaataaacat 9121 atgattccaa taaaaatgca cagccacgat ggcatctctt agcctgacat cgccacgatg 9181 tagaaattct gcatcttcct ctagttttga attatcccca cacaatcttt ttcggcagct 9241 tggatggtca gtttcagcac cttttacaga tgatgaagct gagcctcgag ggatgtgtgt 9301 cgtcaagggg gctcag