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1、DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 2一、基础知识一、基础知识（一）提取（一）提取DNADNA的方法的方法1 1、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子2 2、生物大分子、生物大分子主要指蛋白质、酶和核酸主要指蛋白质、酶和核酸3 3、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取学性质方面的差异，提取DNADN
2、A，去除其他成分，去除其他成分34 4、DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使盐浓度就能使DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀，充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反或者相反5 5、讨论：、讨论：根据根据DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度曲线图，溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，思考在什么浓度下，DNADNA的溶解度最小？的溶解度最小？DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度是如何变化的？溶液中的溶解度是如
3、何变化的？45在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA的溶的溶解度随解度随NaClNaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA溶解度最小；当溶解度最小；当NaClNaCl溶液溶液浓度继续增加时，浓度继续增加时，DNADNA的溶解度又逐渐增大。的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol2 molL L时，时，DNADNA的溶解度最大，浓度为的溶解度最大，浓度为 0 014 mol14 molL L时，时，DNADNA
4、的溶解度最低。利用这一原理，可以使的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNADNA在盐在盐溶液中溶解或析出溶液中溶解或析出如何通过控制如何通过控制NaClNaCl溶液的浓度使溶液的浓度使DNADNA在盐溶液在盐溶液中溶解或析出？中溶解或析出？6DNADNA不不溶溶于于酒酒精精溶溶液液，但但是是细细胞胞中中的的某某些些物物质质则则可可以以溶溶于于酒酒精精。利利用用这这一一原原理理，可可以以将将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离6 6、DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性7 7、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋
5、白酶能水解蛋白质，但是对DNADNA没有影响没有影响大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受606080C80C的高温，的高温，而而DNADNA在在80C80C以上才会变性以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质蛋白质,但对但对DNADNA没有影响没有影响7大家应该也有点累了，稍作休息大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流898 8、DNADNA的鉴定的鉴定 DNA DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定此，二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试
6、剂的试剂 紫外灯照射法紫外灯照射法A A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭（化已锭（EBEB）B B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴再滴一滴EBEB溶液染色溶液染色C C、将蜡纸放在紫外灯、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)(260 nm)下照射（暗室下照射（暗室中），可见橙红色的荧光中），可见橙红色的荧光(DNA(DNA的紫外吸收高峰的紫外吸收高峰在在260 nm260 nm处处)甲基绿甲基绿 （蓝绿色）（蓝绿色）10二、二、DNADNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计（一）
7、实验材料的选取（一）实验材料的选取 1 1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2 23 3种实验材料）种实验材料）2 2、原则：凡是含有、原则：凡是含有DNADNA的生物材料都可以考的生物材料都可以考虑，但选用虑，但选用DNADNA含量相对较高的生物组织，成功含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大的可能性更大11动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液
8、中加入一定量的蒸馏水加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可滤后收集滤液即可（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1 1、动物细胞、动物细胞答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出DNADNA讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水
9、能使鸡血细胞破裂？12植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜细胞膜2 2、植物细胞、植物细胞讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于有利于DNADNA的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是NaClNaCl，有利于有利于DNADNA的溶解的溶解实例：提取洋葱实例：提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集
10、研磨液磨，过滤后收集研磨液13答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，释放不完全，提取的提取的DNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？的影响？（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？成分
11、？答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质14讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去，能够去除杂质除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度溶解度不同的多种杂质不同的多种杂质15讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方
12、案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与白质变性，与DNADNA分离分离1617（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为精溶液（体积分数为95 95），静置，静置2 23min3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取，溶液中会出现白色
13、丝状物，这就是粗提取DNADNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水并用滤纸吸取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出18192 2、DNADNA的鉴定的鉴定鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一于两只试管中，其中一只加入只加入DNADNA丝状物，各加入二苯胺丝状物，各加入二苯胺4ml 4ml 试剂。试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,5min,待试待试管冷
14、却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有看溶解有DNADNA的溶液是否有蓝色的溶液是否有蓝色20（一）案例一：以鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNADNA的的粗提取粗提取三、实验案例三、实验案例鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长1 1、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得2
15、12 2、实验原理、实验原理 DNA DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaCl的的浓度的变化而改变的。当浓度的变化而改变的。当NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为0.14 mol0.14 molL L时时,DNA,DNA的溶解度最低。利用这一原的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在理，可以使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。DNA DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少
16、的一步提取出含杂质较少的DNADNA。DNA DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。223 3、实验材料和用具：、实验材料和用具：鸡血细胞液（鸡血细胞液（510ml510ml）；体积分数为）；体积分数为95%95%的冷的冷酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h24h）；蒸馏）；蒸馏水；质量浓度为水；质量浓度为0 0g/mlg/ml的柠檬酸纳溶液；务的柠檬酸纳溶液；务质量的浓度分别为质量的浓度分别为2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的
17、氯的氯化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（纸；滴管；量筒（100ml100ml，一个）；烧杯；，一个）；烧杯；（100ml100ml，一个，一个，50ml50ml、500ml500ml各二个）；试各二个）；试管（管（20ml20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。，二个）；漏斗；试管夹；纱布。234 4、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为取质量浓度为0 01g/ml1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）剂）100ml1
18、00ml，置于，置于500ml500ml烧杯中。注入新鲜的烧杯中。注入新鲜的鸡血（约鸡血（约180ml180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min1000r/min（转每分）的离心机离心（转每分）的离心机离心2min2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清
19、液，就可以得到鸡血细胞去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）液。）过程过程24柠檬酸钠作用柠檬酸钠作用防止血液凝固防止血液凝固作用机理作用机理柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的CaCa2+2+发生反应，生成柠发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的檬酸钙络合物，血浆中游离的CaCa2+2+大大减少，大大减少，血液就不会凝固血液就不会凝固鸡血细胞破碎以后释放出的鸡血细胞破碎以后释放出的DNADNA，容易被玻璃，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNADNA的的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血
20、细胞液胞液注意事项注意事项25讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNA时，为什么除去血液时，为什么除去血液中的上清液？中的上清液？答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆是血细胞，离心后除去的上清液是血浆5 5、方法步骤、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液5 mL5 mL10mL10mL，注入到，注入到50 mL50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌同时用玻璃棒充分搅拌5 min5 min，使血细胞加速，使血细胞加速破裂。然后，用放
21、有纱布的漏斗将血细胞液过破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至滤至500mL500mL。取其滤液。取其滤液。提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质2627讨论：讨论：答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破会吸水以至胀破（1 1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？会有什么变化？（2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能破裂。注意应沿一个
22、方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎太快太猛，防止打碎DNADNA（3 3）滤去的是什么物质？得到的是什么？）滤去的是什么物质？得到的是什么？答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNADNA28溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA将氯化钠的物质的量浓度为将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol2 mol的溶的溶40mL40mL加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min1min，使其混合均匀，这时，使其混合均匀，这时DNADNA在溶液中呈溶在溶
23、液中呈溶解状态解状态沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于浓度相当于0.14 mol0.14 molL L）析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物2930讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？降低
24、降低NaClNaCl溶液浓度到使溶液浓度到使DNADNA溶解度最低点，使溶解度最低点，使DNADNA从从NaClNaCl溶液中析出溶液中析出将溶液中的将溶液中的DNADNA与其他杂质分离，这一步骤是与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于以利于DNADNA分子的附着和缠绕分子的附着和缠绕注意事项：注意事项：31滤取含滤取含DNADNA的粘稠物的粘稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3 3中的溶液中的溶液至至 500m
25、L500mL的烧杯中，含的烧杯中，含 DNADNA的粘稠物被留在的粘稠物被留在纱布上纱布上将将DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解取取 1 1个个 50 mL50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为质的量浓度为 2 mol2 molL L的溶液的溶液 20mL20mL。用钝头。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中液中3233过滤含有过滤含有DNADNA的氯化钠溶液的氯化钠溶液取取1 1个个100 mL100 mL
26、烧杯，用放有两层纱布的漏斗烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤过滤步骤5 5中的溶液。取其滤液，中的溶液。取其滤液，DNADNA溶于溶于滤液中滤液中提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNADNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为分数为 9595的溶液的溶液 50mL50mL（使用冷却的酒精，（使用冷却的酒精，对对DNADNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝丝状物卷起，并用滤纸吸取上面
27、的水分。这种丝状物的主要成分就是状物的主要成分就是DNADNA3435答：因为答：因为DNADNA不溶于冷酒精，而其他物质可以不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的溶解在酒精中，使含杂质较少的DNADNA丝状物可丝状物可以析出以析出,悬浮于溶液中悬浮于溶液中讨论：讨论：（2 2）观察丝状物呈什么颜色？）观察丝状物呈什么颜色？答：白色答：白色（1 1）为什么要加）为什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？36取两支取两支20 mL20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为浓度为0 0015 mol015 molL L的溶液的溶液5 mL5
28、mL，将丝状物，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL4mlL的二苯的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 5 minmin，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化溶液颜色的变化 DNA DNA的鉴定的鉴定3738讨论：讨论：答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色原来颜色（2 2）这一鉴定结果说明什么问题？）这一鉴定结果说明
29、什么问题？（1 1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？答：提取出的丝状物是答：提取出的丝状物是DNADNA（3 3）DNADNA的直径约为的直径约为2010-10 m2010-10 m，实验中，实验中出现的丝状物的粗细是否表示出现的丝状物的粗细是否表示1 1个个DNADNA分子直径分子直径的大小？的大小？答：答：DNADNA分子直径只有分子直径只有2 nm2 nm。丝状物是多。丝状物是多个个DNADNA子聚在一起形成的子聚在一起形成的 3940答答：整整个个实实验验共共“两两次次蒸蒸馏馏水水，三三次次过过滤滤，两两次析出，六次搅拌次析出，六次搅拌”6 6
30、、讨论：、讨论：两次蒸馏水两次蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一次：细胞吸水胀破 第一步第一步第二次：使第二次：使 DNADNA黏稠物析出黏稠物析出 第三步第三步（1 1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？41过过滤滤时时使使用用的的纱纱布布层层数数与与需需用用滤滤液液或或黏黏稠稠物物有有关关，第第二二次次要要用用其其滤滤出出的的黏黏稠稠物物有有关关，所所以以要要使使用用多多层层纱纱布布，第第一一次次和和第第三三次次均均要要用用其其滤滤液液，使用的纱布为使用的纱布为1 12 2层层三
31、次过滤三次过滤第一次：第一次：DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第一步第一步第二次：第二次：DNADNA被留在纱布上被留在纱布上 第四步第四步第三次：第三次：DNADNA存在于滤液里存在于滤液里 第六步第六步42两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液含杂质多溶液含杂质多第三步第三步第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精第七步第七步六次搅拌：第一、二、三、五、七步六次搅拌：第一、二、三、五、七步其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直在第三
32、、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNADNA43（2 2）为什么反复地溶解与析出）为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去，能够去除杂质？除杂质？答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出反复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解溶解度不同的多种杂质度不同的多种杂质44（二）案
33、例二：以菜花为实验材料进行（二）案例二：以菜花为实验材料进行DNADNA的的粗提取粗提取1 1、课前准备、课前准备将新鲜菜花和体积分数为将新鲜菜花和体积分数为9595的乙醇溶液放的乙醇溶液放入冰箱冷冻室入冰箱冷冻室24 h24 h2 2、提取、提取DNADNA的具体步骤的具体步骤取材：称取取材：称取30 g30 g菜花，去梗取花，切碎菜花，去梗取花，切碎研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL10 mL研磨研磨液，充分研磨液，充分研磨10 min10 min45研磨液的配制方法如下：将研磨液的配制方法如下：将10.1 g Tris10.1 g Tris加入到加入到
34、50 mL50 mL蒸馏水中，使其溶解，然后，用蒸馏水中，使其溶解，然后，用2 2 moL/LmoL/L的的HClHCl溶液调节溶液调节pHpH至至8.08.0，再加入，再加入8.76 8.76 g NaCl g NaCl、37.2 g EDTA 37.2 g EDTA、20 g SDS20 g SDS。待上述。待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1 000 mL1 000 mLTris/HCl:Tris/HCl:提供缓冲体系，提供缓冲体系，DNADNA在这一体系中在这一体系中呈稳定态（呈稳定态（TrisTris为三羟甲基氨基甲烷）为三羟甲基氨基甲烷）EDTA
35、EDTA（乙二胺四乙酸二钠）：是（乙二胺四乙酸二钠）：是DNADNA酶的抑酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后制剂，可以防止细胞破碎后DNADNA酶降解酶降解DNADNASDSSDS（十二烷基磺酸钠）：可以使蛋白质变性，（十二烷基磺酸钠）：可以使蛋白质变性，与与DNADNA分离分离46过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用料离心管中进行离心，用1000 r/min1000 r/min的转速，的转速，离心离心2 25 min5 min，取上清液放入烧杯中，取上清
36、液放入烧杯中)。在。在4 4 冰箱中放置几分钟后，再取上清液冰箱中放置几分钟后，再取上清液沉淀：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的沉淀：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为体积分数为9595的预冷乙醇溶液中，并用玻的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插玻璃棒不要直插到烧杯底部到烧杯底部)。沉淀。沉淀3 35 min5 min后，可见白色的后，可见白色的DNADNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上状物缠绕在玻璃棒上47观察你提取的观察你提取的DNADNA颜色，如果不是白色丝状物，颜色，如果不是白色丝状物，说明说明DNADNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的提取的DNADNA含量低，或是实验操作中出现错误，含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备需要重新制备四、课题成果评价四、课题成果评价（一）是否提取出了（一）是否提取出了DNADNA48